血清TLR4及MFG-E8與子癇前期患者表達及發生早期腎損傷的關系

任春麗,唐興國,張玉芳,袁曉明

(1.承德醫學院附屬醫院 產科，河北 承德067000;2.承德護理職業學院 解剖教研室，河北 承德067000)

子癇前期(PE)是妊娠特有的疾病，在妊娠20周之后發生，病情隨妊娠呈持續性進展，最常見的并發癥之一就是引起急性腎損傷[1]，研究顯示TOLL受體4(TLR4)和乳脂肪球表皮生長因子Ⅷ(MFG-E8)均與急性腎損傷病理機制有關[2,3]，本研究探討TLR4和MFG-E8在子癇前期患者中的表達與診斷意義，并探討其與子癇前期發生早期腎損傷的關系。

1 資料與方法

1.1 病例資料

選取在我院住院治療的妊娠期高血壓(GH)患者30例，輕度子癇前期(mPE)患者30例、重度子癇前期(sPE)30例以及正常妊娠(NP)患者30例為研究對象。妊娠期高血壓及子癇前期患者診斷及分類均符合第九版《婦產科學》診斷標準。正常孕婦的年齡(32.07±3.58)歲，高血壓組孕婦年齡(32.66±3.91)歲，輕度子癇前期組孕婦年齡(34.77±3.51)歲，重度子癇前期組孕婦年齡(34.01±3.72)歲。組間比較無統計學差異(P>0.05)。

1.2 方法

兩組患者均在分娩前晨起空腹采取肘正中靜脈血5 ml，實驗室離心10 min后取上層血清于-80°冰箱保存已備用。采用酶聯免疫吸附法(ELISA法)進行檢測兩組患者血清中TLR4和MFG-E8的表達水平，具體所有操作均按試劑盒操作說明進行。

1.3 統計學分析

2 結果

2.1 不同組別外周血TLR4與MFG-E8表達水平比較外周血TLR4在正常孕婦、妊娠期高血壓、輕度子癇前期、重度子癇前期，隨病情加重呈逐漸升高趨勢，多組間進行單因素方差分析，組間兩兩比較：各組間均有顯著性差異(P<0.01)，仍具有顯著性差異(P<0.01)。外周血MFG-E8在正常孕婦、妊娠期高血壓、輕度子癇前期、重度子癇前期，隨病情加重呈逐漸降低趨勢，多組間進行單因素方差分析，組間兩兩比較：各組間差異均有顯著性差異(P<0.01)，見表1。

表1 組間外周血TLR4和MFG-E8表達水平比較

2.2 外周血TLR4與MFG-E8的相關性比較在正常孕婦組，外周血TLR4與MFG-E8表達水平呈負相關，但無統計學意義，r=-0.345，P=0.062；在妊娠期高血壓組，外周血TLR4與MFG-E8表達水平呈負相關，r=-0.390，P=0.033；在子癇前期組，隨著子癇前期病情進展，外周血TLR4與MFG-E8表達水平呈明顯負相關，r=-0.799，P=0.000，見圖1；在重度子癇前期并發早期腎損傷的病例為42例，外周血TLR4與MFG-E8表達水平呈顯著負相關，r=-0.875，P=0.000，見圖2。隨著外周血TLR4水平逐漸升高，MFG-E8的表達水平呈下降趨勢。

2.3 外周血TLR4與MFG-E8診斷子癇前期的價值外周血TLR4與MFG-E8表達水平診斷子癇前期的敏感度分別為83.33%、78.33%，特異度分別為80.00%、86.67%；TLR4聯合MFG-E8診斷PE的敏感度98.00%，特異度78.57%；TLR4、MFG-E8及TLR4聯合MFG-E8診斷PE的ROC曲線下面積分別是0.850、0.889及0.928，見表2；ROC曲線見圖3。

表2 TLR4、MFG-E8以及TLR4聯合MFG-E8對診斷子癇前期的預測價值

圖1 PE患者TLR4與MFG-E8的相關性

圖2 PE合并急性腎損傷的TLR4與MFG-E8的相關性

圖3 TLR4、MFG-E8、TLR4聯合MFG-E8的ROC曲線

3 討論

子癇前期為妊娠代謝性疾病的一種，臨床表現多樣化，常導致腦、腎、肝、心血管等多個器官受累；發病機制復雜，目前公認原因之一是母胎界面炎癥免疫過度激活及血管內皮細胞受損[4]。常因子癇前期患者病情隱匿而復雜，嚴重影響母嬰生命安全。近年來，因分子診斷，影像學診斷等技術水平提高，使得子癇前期的診斷水平明顯提升，但子癇前期的早期診斷仍是一個嚴峻的課題。本研究通過兩種炎癥介質TLR4與MFG-E8提高子癇前期診斷敏感性及特異性，為子癇前期的早期診斷提高理論依據。

TLR4是Toll樣受體家族中重要的成員，Toll樣受體是連接特異性與非特異性免疫的橋梁，識別并激活免疫細胞應答。研究顯示TLR4與子癇前期發病機制的相關性可能與TLR4參與炎癥反應及炎癥損傷有關[5]。有研究顯示子癇前期合體滋養細胞和內皮細胞中TLR4的表達也明顯高于正常孕婦組；在胎盤絨毛血管內皮中，早發性子癇前期婦女胎盤中TLR4的表達高于晚發性子癇前期，表明子癇前期的嚴重程度與胎盤絨毛的炎癥損傷程度相關[6]。有研究顯示子癇前期婦女單核細胞內源性激活，并伴有TLR4的高表達及促炎細胞因子的產生[7]。這些研究均與本研究相符合，本研究提示隨著子癇前期進展，TLR4表達水平呈逐漸增高趨勢，且重度子癇前期>輕度子癇前期>妊娠期高血壓>正常孕婦(P<0.01)。

MFG-E8又稱乳凝集素，是一種糖蛋白，能夠維持機體免疫穩態，具有凋亡清除、修復損傷、血管生成及減輕炎癥反應等作用，是一種防御型因子[8]。目前國內外研究MFG-E8與子癇前期的關系很少，但通過對急性腎損傷、妊娠期糖尿病、自身免疫系統疾病等能夠了解MFG-E8的生理作用。研究顯示[9]通過對急性腎損傷的重組小鼠進行MFG-E8注射，MFG-E8對IL-1β、IL-6、TNF-α有明顯抑制作用(P<0.05)。MFG-E8能夠降低血清CRE、BUN，減輕急性損傷的病理變化。有人對糖尿病腎病中MFG-E8表達研究中顯示：MFG-E8與肌酐、胱抑素C呈負相關，表明MFG-E8對凋亡細胞吞噬功能減弱，對炎癥因子的免疫抑制作用減弱，導致腎臟損傷[10]。有研究顯示[11]：系統性紅斑狼瘡(SLE)患者血清MFG-E8水平高于健康對照組，MFG-E8水平轉陰后，MFG-E8陰性的SLE患者常表現出CRP、TNF-α、IFN-1和IL-10均顯著高于在MFG-E8陽性的SLE。從而得出結論MFG-E8陽性SLE是一個更強的免疫應答。本研究中顯示子癇前期患者隨病情加重，血清MFG-E8表達水平呈逐漸下降趨勢，且重度子癇前期<輕度子癇前期<妊娠期高血壓<正常孕婦(P<0.01)。

TLR4與MFG-E8在子癇前期及子癇前期并發早期腎損傷患者中表達呈明顯負相關。推斷可能是由于TLR4誘導PE患者母胎介面炎癥因子及單核細胞激活，而不能抵御炎癥攻擊的MFG-E8水平下降，導致其不能發揮正常狀態下維持免疫穩定的作用，破壞了免疫平衡，從而加重子癇前期及并發急性腎損傷的發生[12]。本研究顯示：隨著子癇前期病情進展，外周血TLR4與MFG-E8表達水平呈負相關(r=-0.799，P=0.000)；在子癇前期并發早期腎損傷的病例中，外周血TLR4與MFG-E8表達水平呈明顯負相關(r=-0.875，P=0.000)。而TLR4聯合MFG-E8對診斷子癇前期敏感性明顯升高，特異度略下降，敏感度98.00%，特異度78.57%，ROC曲線下面積：0.928。

綜上所述，TLR4與MFG-E8均密切參與子癇前期發病機制，且隨病情進展，TLR4表達水平呈逐漸升高趨勢，而MFG-E8則呈下降趨勢，兩者之間呈負相關，PE患者并發早期急性腎損傷時TLR4與MFG-E8負相關更明顯。TLR4與MFG-E8對診斷子癇前期的預測價值很高，如兩者聯合，診斷的敏感性明顯升高，為臨床上子癇前期患者的早期診斷、早期治療提高可靠依據。