住院患者紅細胞血型不規則抗體特點調查

陳碧樂，蔡雪嬌，葉銀才，林雙女，卓盛林，謝作聽

（1.溫州醫科大學附屬第一醫院 輸血科，浙江 溫州 325015；2.永嘉縣人民醫院 輸血科，浙江 溫州 325100）

紅細胞血型不規則抗體是指ABO血型系統以外的血型抗體[1]，可引起免疫性溶血性輸血反應、新生兒溶血病、血型鑒定和交叉配血困難、血液輸注無效等[2-4]，故對住院患者開展紅細胞血型不規則抗體檢測分析具有重要的臨床意義。為了解住院患者的紅細胞血型不規則抗體的表現特點，對其陽性率、分布特點、特異性及其免疫球蛋白類型等進行綜合調查分析。

1 對象和方法

1.1 對象 收集溫州醫科大學附屬第一醫院2017年11月至2019年10月期間所有住院患者共287 030例，其中男138 723，女148 307例，篩選到不規則抗體陽性患者共834例，其中男276例，女558例，年齡（54.0±28.5）歲；女性中僅妊娠史而無輸血史有403例，既有輸血史又有妊娠史有108例，僅有輸血史 而無妊娠史有30例，既無輸血史又無妊娠史有17例。

1.2 儀器與試劑 IH-1000全自動血型鑒定儀、IDIncubator恒溫孵育箱、ID-Centrifuge 12 S II凝膠卡專用離心機（美國BIO-RAD公司）；專用離心機（上海寰熙醫療器械有限公司）；Olympus普通光學顯微鏡（日本歐林巴斯公司）。微柱凝膠卡（瑞士DiaMed公司）、不規則抗體篩選試劑（江蘇力博醫藥生物技術股份有限公司）、不規則抗體特異性鑒定譜細胞（匈牙利REAGENS Kft公司）、兩種抗-D試劑（IgG+IgM分別來自英國Millipore公司、加拿大 Dominion Biologicals Limited公司），抗-D（IgG）試劑（北京金豪制藥股份有限公司）、抗-E、抗-e、抗-C、抗-c、抗-M、抗-N、抗-P試劑、抗-S（上海血液生物醫藥有限責任公司）；抗-H試劑（德國GmbH公司）；2-me試劑（中國醫藥集團上海化學試劑公司）。

1.3 方法

1.3.1 紅細胞血型不規則抗體篩查：檢測方法選用微柱凝膠抗人球蛋白法，檢測手段采用全自動血型分析儀。所有患者血標本均采用EDTA-K2抗凝，檢測前離心條件均為1 000×g離心3 min，所有檢測均在收到標本后3 h內完成，具體操作嚴格按照全自動儀器使用說明和本室操作規程執行。判斷標準：若I、II、III篩選細胞結果全陰性，判為未檢到紅細胞血型不規則抗體；若I、II、III篩選細胞中有1種以上細胞出現陽性結果且自身對照試驗陰性，判為檢到紅細胞血型不規則抗體。

1.3.2 紅細胞血型不規則抗體免疫球蛋白類型的確定：上述紅細胞血型不規則抗體陽性的標本分別采用室溫鹽水介質試管法、2-me裂解-室溫鹽水介質試管法確定其抗體免疫球蛋白類型，具體操作嚴格按照本室操作規程。納入標準：①若自身對照陰性，而室溫鹽水介質試管法抗體篩查試驗出現陽性格局，且血漿經0.2 mL 2-me裂解處理后室溫鹽水試管法抗體篩查試驗不再出現陽性格局，則判陽性抗體為IgM類紅細胞血型不規則抗體；②若自身對照陰性，室溫鹽水介質試管法抗體篩查結果陰性，則判陽性抗體為IgG類紅細胞血型不規則抗體；③若自身對照陰性，而室溫鹽水介質試管法出現陽性格局，且血漿經0.2 mL 2-me處理后室溫鹽水介質試管法仍出現陽性格局，則判陽性抗體為紅細胞血型IgM類合并IgG類不規則抗體。

1.3.3 紅細胞血型不規則抗體陽性標本的抗體特異性鑒定：①IgM類不規則抗體特異性鑒定：采用室溫鹽水介質試管法；②IgG類不規則抗體特異性鑒定：采用微柱凝膠抗人球蛋白法。判斷標準：①若抗體反應格局符合譜細胞其中一種或幾種抗原組合格局時，則判為檢到有明確抗體特異性的不規則抗體；②若反應格局不符合譜細胞其中一種或所有抗原組合格局或所有譜細胞均出現陽性或陰性結果時，則判為檢到無法確定特異性的不規則抗體。

1.4 統計學處理方法 采用SPSS22.0軟件對數據進行統計分析。計數資料用例數或百分率表述，計量資料正態分布用±s表示，偏態分布采用M（P25，P75）表示，2組間率的比較用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 紅細胞血型不規則抗體陽性率 287 030例住院患者中共有834例患者檢測到紅細胞血型不規則抗體，總陽性率為0.29%，其中男性患者抗體陽性率為0.20%；女性患者為0.38%，2組間比較差異有統計學意義（χ2=77.763，P＜0.05）。

2.2 紅細胞血型不規則抗體陽性標本的性別構成比 834例紅細胞血型不規則抗體陽性標本中女性患者抗體陽性構成比為66.99%（558/834），男性患者為33.01%（276/834）。

2.3 女性患者紅細胞血型不規則抗體陽性構成比 從大到小依次為：僅有妊娠史患者[72.22%（403/ 558）]＞既有輸血史又有妊娠史患者[19.35%（108/ 558）]＞僅輸血史患者[5.38%（30/558）]＞既無輸血史又無妊娠史患者[3.05%（17/558）]。

2.4 紅細胞血型不規則抗體陽性標本的抗體特異性 834例不規則抗體中能明確抗體特異性的有457例（占54.80%），其中Rh系統有294例，以抗-E數量最多，共230例；MNS血型系統（主要指M、N、S三種抗 原）99例，其中抗-M 90例；Lewis系統28例；Kell系統5例；Diego系統4例；抗-H或抗-HI 5例；P系統3例；Duffy系統2例；Kidd系統2例；Lutheran系統1例；混合抗體14例；無特異性抗體377例，見表1。

2.5 紅細胞血型不規則抗體免疫球蛋白類型 834例抗體中單純IgG類抗體632例（占72.90%）；單純IgM類100例（占11.75%）；IgG類合并IgM類102例（占12.23%）。

3 討論

本調查研究獲得的紅細胞血型不規則抗體總陽性率為0.29%，接近或稍低于國內相關報道[5-6]。其中男性患者抗體陽性率為0.20%，女性患者抗體陽性率為0.38%，陽性率接近國內文獻報道[7-8]，提示女性患者的紅細胞血型抗原暴露機會可能高于男性。本研究住院患者中不規則抗體分布特點為：①女性患者抗體陽性構成比為66.99%，男性患者抗體陽性構成比為33.01%；②女性患者抗體陽性構成比從大到小依次為：僅有妊娠史患者＞既有輸血史又有妊娠史患者＞僅輸血史患者＞既無輸血史又無妊娠史患者，提示妊娠與輸血是誘導紅細胞血型不規則抗體產生的重要因素。

不規則抗體免疫球蛋白類型為：IgG類、IgM類，但以IgG類抗體為主，提示臨床實驗室交叉配血時不能僅采用鹽水介質法以免造成IgG類抗體的漏檢。

表1 834例紅細胞血型不規則抗體陽性標本的抗體特異性

不規則抗體特異性表現特點為：以Rh血型系統抗體為主，其中抗-E占比最高，接近國內相關文獻報道[9-10]；抗-D占比次之，比較接近國內相關文獻報道[11-12]，且絕大多數抗-D患者為妊娠二胎或以上的女性或新生兒，因此建議對尚未產生免疫性抗-D的Rh陰性妊娠女性注射抗-D免疫球蛋白來封閉進入母體的胎兒紅細胞上的RhD抗原，以防止后者刺激母體產生免疫性抗-D并導致RhD陽性新生兒溶血病的發生；抗-c占比＞抗-e＞抗-C，且可表現為單一抗體、混合抗體或復合抗體等諸多形式。另外，本調查研究還發現抗-Cw、抗-Lua、抗-Fyb、抗-Dia、抗-K、 抗-Kpa、抗-Jka、抗H等稀有血型抗體各數例，其中抗-Cw是Rh血型系統Cw抗原的抗體，國外有研究報道認為Cw是RHCE基因單個點突變引起[13]，其IgG類抗體是引起新生兒溶血的Rh系統抗體之一[14]。關于抗-Cw，目前國內鮮見報道。需要特別指出的是，本研究中834例紅細胞血型不規則抗體中有377例無法確定抗體特異性，占比達到45.20%，略高于文獻報道[15-16]，推測其原因可能有：①存在聯合或復合抗體，從而干擾特異性的最終確定；②存在抗原劑量效應致部分雜合子紅細胞出現假陰性結果而干擾抗體特異性的最終確定[1]；③不同廠家的譜細胞抗原設計合理性有所差異；④單套譜細胞的鑒定能力有限。

目前國內紅細胞血型不規則抗體常規檢測方法多為微柱凝膠抗人球蛋白法，但因該法對IgG類溫抗體相對敏感，而對IgM類冷抗體不太敏感，容易造成IgM類冷抗體的漏檢。本調查研究發現住院患者不規則抗體的免疫球蛋白類型以IgG類溫抗體為主，但在37 ℃反應條件下IgM類抗體陽性構成比仍占到23.98%，提示臨床實驗室有必要采取措施減少IgM類冷抗體的漏檢。

綜上所述，本研究住院患者中紅細胞血型不規則抗體陽性患者以有妊娠史的女性患者為主，且不規則抗體特異性以IgG類Rh血型系統抗體最為常見，故臨床有必要考慮對供受者常規開展Rh血型系統D、E、C、c、e五種抗原檢測并實行抗原相合性輸血。另外，IgM類冷抗體的漏檢問題也應引起臨床實驗室的重視。