QuEChERS-UPLC-MS/MS法測(cè)定火龍果中14種農(nóng)藥殘留

尚遠(yuǎn)宏，田金鳳

攀枝花學(xué)院（攀枝花 617000）

火龍果（Hylocereus undulatusBritt），屬仙人掌科量天尺屬植物[1-2]，其果實(shí)屬于熱帶亞熱帶水果，果實(shí)有紅皮白肉、紅皮紅肉和黃皮白肉3種[3]。中國(guó)比較適宜在臺(tái)灣、廣西、福建、四川等地種植[3-4]，攀枝花市火龍果商品化種植從2008年開(kāi)始，以紅皮紅肉型火龍果居多[5]。隨著攀枝花火龍果種植面積逐年擴(kuò)大，病蟲(chóng)危害程度逐年增加[6]，火龍果生產(chǎn)過(guò)程中農(nóng)藥施用不合理，造成火龍果產(chǎn)品農(nóng)藥殘留問(wèn)題日益凸顯，因而高效檢測(cè)火龍果中的殺蟲(chóng)劑和殺菌劑等農(nóng)藥殘留、高度重視火龍果質(zhì)量安全問(wèn)題變得非常重要。

火龍果屬于“小眾化”的熱帶水果，國(guó)內(nèi)外對(duì)火龍果農(nóng)殘檢測(cè)的研究較少，僅以果蔬農(nóng)藥殘留監(jiān)控為主，且僅有部分利用氣相色譜法和液相色譜法直接檢測(cè)火龍果中少數(shù)農(nóng)藥殘留等方法的報(bào)道[1,7-9]，但鮮見(jiàn)火龍果中同時(shí)檢測(cè)試驗(yàn)的14種農(nóng)藥的殘留報(bào)道。GB 2763—2019中缺少火龍果中直接農(nóng)藥最大殘留限量檢測(cè)指標(biāo)和方法[10]，對(duì)于火龍果生產(chǎn)和消費(fèi)都存在極大隱患，不利于火龍果產(chǎn)業(yè)健康發(fā)展，因此通過(guò)有效的技術(shù)手段，對(duì)火龍果中的有關(guān)藥物殘留進(jìn)行檢測(cè)，確保人類對(duì)火龍果消費(fèi)的安全，具有十分重要意義。試驗(yàn)通過(guò)采摘攀枝花本地的紅心火龍果，以QuEChERS方法來(lái)凈化火龍果提取液，采用UPLC-MS/MS法測(cè)定火龍果中14種農(nóng)藥殘留，其方法準(zhǔn)確可靠，操作簡(jiǎn)易，回收率穩(wěn)定，可滿足火龍果農(nóng)藥殘留的評(píng)估檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

火龍果（采摘攀枝花仁和、鹽邊和米易地區(qū)的成熟期紅心火龍果樣品）；Agilent 6460A超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent公司）；離心機(jī)（Sigma公司）；電子天平（上海越平公司）；超純水器（美國(guó)Millipore公司）；渦旋混合器（LMS公司）；氮吹儀（美國(guó)Organomation公司）；甲酸；甲醇（色譜級(jí)，F(xiàn)isher公司）；農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：多菌靈、嘧霉胺、甲霜靈、烯酰嗎啉、三唑酮、戊唑醇、丙環(huán)唑、苯醚甲環(huán)唑、氧樂(lè)果、克百威、三羥基克百威、惡霜靈、腈菌唑、吡唑醚菌酯（德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH，純度均大于98%）；其他試劑（國(guó)產(chǎn)分析純）。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別準(zhǔn)確稱取適量14種標(biāo)準(zhǔn)品，分別用甲醇溶解配制成1.0 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于-20 ℃避光保存。其他濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇定量稀釋即得。

1.2.2 樣品前處理

紅心火龍果果實(shí)收獲時(shí)，隨機(jī)取5個(gè)果實(shí)進(jìn)行殘留檢測(cè)，共20份。火龍果去葉冠取可食用部分，稱取10.0 g（精確至0.01 g）火龍果樣品于50 mL聚丙烯刻度離心管中，加入10 mL 0.5%甲酸乙腈溶液[11]，振蕩渦旋20 min，加入1 g氯化鈉和5 g無(wú)水硫酸鎂[12-14]，立即渦旋混勻10 s，以10 000 r/min離心5 min，取5.0 mL上清液，加入QuEChERS試劑管中渦旋混勻1 min，以10 000 r/min離心3 min，取0.5 mL上清液，用水定容至1 mL，混勻以14 000 r/min離心5 min，過(guò)0.22 μm濾膜，即得。

1.2.3 儀器條件

色譜條件：色譜柱，ZORBAX SB-C18（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）；流動(dòng)相，4 mmol/L甲酸水-甲醇[15-16]，梯度洗脫；流速0.2 mL/min；進(jìn)樣體積2 μ L；柱溫30 ℃；洗脫方式，梯度洗脫；洗脫程序，0～7.5 min，甲醇由30%升至90%；7.5～10 min，甲醇為90%；10～10.5 min，甲醇由90%降至30%；10.5～15 min，甲醇為30%。質(zhì)譜條件：離子源，電噴霧離子源（ESI）；掃描方式，正離子掃描；檢測(cè)方式，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；霧化氣壓力，45 psi；輔助氣（AUX）流速，11 L/min；輔助氣溫度（TEM），300 ℃；電噴霧電壓（IS），4 000 V。14種農(nóng)藥的多反應(yīng)監(jiān)測(cè)質(zhì)譜參數(shù)見(jiàn)表1。

表1 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式下14 種農(nóng)藥的質(zhì)譜參數(shù)

1.2.4 方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍及檢出限[17-19]

將配制好的14種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液用甲醇稀釋成400 μg/L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用空白火龍果基質(zhì)提取液將混合標(biāo)準(zhǔn)溶液稀釋成200，100，80，40，20，10和4 μg/L系列質(zhì)量濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別進(jìn)行測(cè)定。以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，定量離子峰面積為縱坐標(biāo)，采用外標(biāo)法建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。以3倍信噪比（S/N≥3）和10倍信噪比（S/N≥10）分別確定檢出限（LOD）與定量限（LOQ）。

2 結(jié)果與分析

2.1 儀器條件和提取條件優(yōu)化

流動(dòng)相中加入少量酸（甲酸）能夠達(dá)到改善峰形、提高分離效率的作用，并且化合物更容易離子化，提高靈敏度；在子離子掃描模式下，優(yōu)化碰撞能量，得到相應(yīng)的離子碎片；14種農(nóng)藥的MRM色譜圖見(jiàn)圖1和圖2。樣品提取過(guò)程中用無(wú)水硫酸鎂和氯化鈉作為除水劑[12]，氯化鈉則加大水中的離子強(qiáng)度，因鹽析作用來(lái)將樣品中水層和有機(jī)試劑乙腈層分離，而無(wú)水硫酸鎂是由于其和水分子結(jié)合來(lái)起到除水作用。

2.2 方法的線性關(guān)系及檢出限

14種農(nóng)藥的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及檢出限見(jiàn)表2。14種農(nóng)藥在4.0～200.0 μg/L線性范圍內(nèi)的相關(guān)系數(shù)均大于0.999，定量限為0.15～1.0 μg/kg，低于國(guó)家規(guī)定的最大殘留限量值[10]。

圖1 100 μg/L混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流色譜圖

圖2 14種化合物的定量離子色譜圖

2.3 方法的回收率與精密度

以5，20和80 μg/kg的水平將14種農(nóng)藥添加到空白火龍果基質(zhì)中，測(cè)定回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。14種農(nóng)藥在火龍果中的回收率范圍為81.1%～94.7%，RSD為3.8%～10.6%，滿足農(nóng)藥定量分析要求[20]。

表3 14種農(nóng)藥的添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）

2.4 實(shí)際樣品分析

GB 2763—2019食品中農(nóng)藥最大殘留限量中，以“皮不可食的熱帶和亞熱帶水果”要求的火龍果非專屬（間接）的農(nóng)藥規(guī)定1種殺菌劑咪鮮胺和咪鮮胺錳鹽限量為7.0 mg/kg，3種殺蟲(chóng)劑氰戊菊酯和S-氰戊菊酯限量為1.5 mg/kg，克百威限量為0.02 mg/kg，氧樂(lè)果限量為0.02 mg/kg[7]，其標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)試驗(yàn)中其他10種農(nóng)藥沒(méi)有最大殘留的限量規(guī)定。按試驗(yàn)方法對(duì)攀枝花地區(qū)采集的20份紅心火龍果進(jìn)行分析，其14種農(nóng)藥的殘留量均低于檢測(cè)限和限量規(guī)定，均未檢出。

3 結(jié)論

結(jié)合固相萃取技術(shù)，以高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法建立攀枝花本地的紅心火龍果中14種農(nóng)藥殘留的分析測(cè)定方法。方法前處理操作簡(jiǎn)單，凈化效果好，靈敏度高，干擾少，其LOQ可達(dá)0.15 μg/kg，在實(shí)際檢測(cè)中具有較強(qiáng)可行性和實(shí)用性，也適用于火龍果各品種中14種農(nóng)藥殘留的定性和定量分析，且對(duì)于食品中農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)的完善、火龍果中多種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法和限量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供參考依據(jù)。