規(guī)模化豬場如何建立實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測體系

周松峰，黃全奎，華 俊，秦樹英 ，覃紹敏，吳健敏*

（1.廣西里建桂寧種豬有限公司，廣西 南寧 530105；2.廣西壯族自治區(qū)獸醫(yī)研究所，廣西 南寧530001）

近年來，隨著散養(yǎng)戶的大量退出，特別是受非洲豬瘟的影響[1]，規(guī)模化豬場在我國已占到了絕對(duì)的比重[2]，整體提升了養(yǎng)豬行業(yè)的綜合管理水平，但是仍存在很多不足。例如一些規(guī)模場由于生產(chǎn)管理方式、生物安全措施和技術(shù)防控手段較為落后，行業(yè)間缺乏溝通，對(duì)疾病缺乏有效的監(jiān)控手段等原因[3]，使得疾病頻繁出現(xiàn)且無法有效控制，造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。另外，一些規(guī)模場雖然沒有發(fā)生重大動(dòng)物疫情，但是由于沒有建立實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測技術(shù)體系，無法判斷豬群中是否存在帶毒豬。帶毒豬持續(xù)不斷地向外界排毒[4]，造成散發(fā)性疫情不斷發(fā)生。

規(guī)模化豬場要積極創(chuàng)造條件，開展免疫抗體及病原監(jiān)測，積極做好種豬垂直傳播疫病病原的凈化工作。通過監(jiān)測，有針對(duì)性地提升豬場綜合生物安全措施并把它作為今后規(guī)模場工作的重點(diǎn)。完整的、準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測體系是疫病防治的科學(xué)武器和有效手段，規(guī)模場實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測體系的建設(shè)勢在必行[5]。本文就如何建立規(guī)模化豬場實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測體系，進(jìn)行簡單闡述。

1 監(jiān)測的分類

規(guī)模化豬場監(jiān)測可以分為常規(guī)監(jiān)測和發(fā)生疫病時(shí)的快速檢測兩種。

1.1 常規(guī)監(jiān)測

常規(guī)監(jiān)測是指在豬群表現(xiàn)正常的情況下，開展的針對(duì)豬群及原料品質(zhì)的監(jiān)測。主要包括抗體監(jiān)測、病原監(jiān)測和飼料監(jiān)測3個(gè)方面。

抗體監(jiān)測：通過血清學(xué)診斷技術(shù)，檢測豬血清中的特定抗體水平。包括抗體水平的高低、維持的時(shí)間、抗體均勻度及群體免疫水平等。抗體水平監(jiān)測可以評(píng)價(jià)疫苗的質(zhì)量，評(píng)估豬群的免疫狀況[6]，從而為制定合理的免疫程序(如免疫次數(shù)、免疫時(shí)間及免疫劑量等)提供依據(jù)。免疫抗體監(jiān)測常根據(jù)不同的群體進(jìn)行，一般大致分為公豬、母豬、育肥豬和仔豬4個(gè)群體。想要精確地反映豬場的實(shí)際情況，還應(yīng)細(xì)分群體，包括后備母豬、1～2 胎次、3～4 胎次、5～6 胎次及高胎次等 5個(gè)母豬群體；哺乳仔豬（新生仔豬、斷奶前）；斷奶仔豬；保育豬和育肥豬。公豬可被視為一個(gè)單獨(dú)群體進(jìn)行普檢，其他豬群按實(shí)際情況進(jìn)行抽檢。其中母源抗體消長規(guī)律的監(jiān)測最為重要，它對(duì)制定合理的免疫程序，及時(shí)根據(jù)變化修定免疫程序意義重大[7]。

病原監(jiān)測：通過PCR技術(shù)、細(xì)菌分離鑒定和藥敏試驗(yàn)等方法對(duì)病毒、細(xì)菌、真菌及寄生蟲等病原進(jìn)行監(jiān)測。一般采集豬血液、鼻咽拭子、肛拭子、糞、尿、分泌物及養(yǎng)殖環(huán)境樣品等進(jìn)行檢測，監(jiān)測本場病原的感染情況(感染程度、感染時(shí)間及感染對(duì)象等)，從而采取合理的應(yīng)對(duì)措施，有針對(duì)性地選擇疫苗及消毒藥物進(jìn)行預(yù)防，以及使用敏感藥物進(jìn)行治療，防止耐藥菌株的產(chǎn)生。通過隔離、淘汰帶毒豬等合理的凈化手段，建立某種特定疾病的陰性場，再通過定期監(jiān)測，持續(xù)保持對(duì)某種疾病的陰性狀態(tài)，是確保豬場生產(chǎn)安全穩(wěn)定，創(chuàng)造更大效益最為有效的措施。

對(duì)疫病的控制應(yīng)以預(yù)防為主，而常規(guī)監(jiān)測是疫病預(yù)防的重要手段，通過常規(guī)監(jiān)測和動(dòng)態(tài)分析，及早發(fā)現(xiàn)問題、解決問題，可形成豬場生物安全屏障。

飼料監(jiān)測：飼料安全對(duì)于豬群的健康尤為重要[8]，它是保證豬群健康的基本前提。飼料常規(guī)監(jiān)測主要分為以下幾個(gè)方面：常規(guī)理化指標(biāo)，如水分、粗蛋白質(zhì)、總磷、粗灰分、鈣、粗纖維、粗脂肪、氯化鈉、脂肪酸和各種氨基酸等；重金屬，如鎘、鉻、砷和汞等；抗生素，抗生素殘留；違禁藥物，如三聚氰胺、克倫特羅和萊克多巴胺等；霉菌毒素，如赤霉烯酮、嘔吐毒素和黃曲霉毒素；對(duì)豬群有害病原的檢測，如藍(lán)耳病病原、非洲豬瘟病原等。

1.1.1 常規(guī)監(jiān)測需注意的問題。科學(xué)合理的常規(guī)監(jiān)測方法必須做到以下幾點(diǎn)（以抗體和病原監(jiān)測為例），數(shù)據(jù)才有意義。首先保證檢測樣品的數(shù)量和質(zhì)量。育肥豬群（本公司將育肥豬群分為3個(gè)階段：小豬階段、中豬階段、大豬階段）的每個(gè)生長階段都至少要采集總量的5%，母豬群至少要采集總量的10%，公豬需要全群采集。樣品數(shù)量決定整個(gè)豬群檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，所以樣品越多結(jié)果越可靠。規(guī)范采血操作，合理地分離和保存血清。血清應(yīng)為無色至淡黃色澄明液體，無溶血，檢測時(shí)最好是新鮮血清，血清保存時(shí)間越久，結(jié)果越不準(zhǔn)確。采集的病料必須新鮮且具有代表性，最好是未經(jīng)藥物治療的活病豬的病料。要根據(jù)不同病原的不同特性，合理保存病料，特別是在夏季高溫天氣下，更要防止病料腐敗變質(zhì)。要保證豬場監(jiān)測的連續(xù)性[9]。開展定期監(jiān)測，必須根據(jù)本場現(xiàn)狀并結(jié)合以前和周邊的疫情形勢進(jìn)行。制定合理的監(jiān)測時(shí)間，要確保監(jiān)測時(shí)間的連續(xù)性，一般每隔4個(gè)月監(jiān)測1次。對(duì)于特定監(jiān)測項(xiàng)目，要確保監(jiān)測的階段性和連續(xù)性，如母源抗體的監(jiān)測，哺乳豬、保育豬等的抽樣檢測，后備豬的病原和抗體監(jiān)測等。要具備實(shí)驗(yàn)室及試驗(yàn)條件。基本實(shí)驗(yàn)室主要包括解剖室、病原檢測室、血清學(xué)檢測室、樣品及檔案保存室、洗滌與廢棄物無害化處理室等。所需的必要儀器設(shè)備主要有熒光定量PCR檢測儀、超凈工作臺(tái)、生化培養(yǎng)箱、酶標(biāo)儀、普通顯微鏡、微量移液器、電熱水浴鍋、高壓滅菌鍋、冰箱及一些解剖器具、試管和離心管等。試驗(yàn)藥品、試劑盒及常規(guī)的培養(yǎng)基、藥敏試紙等按試驗(yàn)需要配備。其中人員條件主要指具有較強(qiáng)的專業(yè)理論知識(shí)和生產(chǎn)管理經(jīng)驗(yàn)的工作人員，因?yàn)閷?duì)監(jiān)測結(jié)果進(jìn)行合理的分析和判斷是規(guī)模化豬場生產(chǎn)監(jiān)測的重要組成部分。同時(shí)還需制定嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理制度，包括崗位責(zé)任制、儀器設(shè)備操作使用管理制度、生物安全管理制度、病料采集保存制度、試驗(yàn)記錄制度及檔案資料管理制度等。

1.2 發(fā)病時(shí)的快速檢測

當(dāng)豬群生產(chǎn)狀況低下或臨床出現(xiàn)病態(tài)時(shí)，為了快速查明病因，需要根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整檢測內(nèi)容，從而判定豬場是否受到特定病原侵襲。

1.2.1 監(jiān)測方法。利用血清學(xué)技術(shù)(如ELISA試驗(yàn)、血凝試驗(yàn))檢測免疫抗體或某種疾病的野毒抗體(如豬偽狂犬病gE抗體等)。監(jiān)測項(xiàng)目包括豬瘟、藍(lán)耳病、豬偽狂犬病、圓環(huán)病毒病、口蹄疫、細(xì)小病毒病、豬乙型腦炎和弓形體病等的抗體。運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)，從基因水平監(jiān)測動(dòng)物病原菌(如PCR方法)，利用特異性引物可以快速擴(kuò)增某種特定病原的核酸，從而判定所檢病料中是否存在特定病原，隨后通過測序及基因序列的遺傳進(jìn)化分析[10]，判定該病原是否變異或進(jìn)化，及時(shí)準(zhǔn)確地掌握疫病流行動(dòng)態(tài)，為疫苗的篩選及進(jìn)一步制定防控措施提供依據(jù)。檢測項(xiàng)目包括豬瘟、豬偽狂犬病、圓環(huán)病毒病、藍(lán)耳病和豬細(xì)小病毒病等的病原。運(yùn)用微生物學(xué)技術(shù)，對(duì)細(xì)菌性致病菌進(jìn)行分離鑒定[11]，檢測分離菌株的致病性及對(duì)抗生素的耐藥情況等。檢測項(xiàng)目包括副豬嗜血桿菌、鏈球菌、大腸桿菌、寄生蟲、藥物殘留和霉菌毒素等。利用快速診斷試劑 (如膠體金試紙條等)，現(xiàn)場可以快速、準(zhǔn)確地檢測抗體、病原和藥物殘留等，非常方便。

2 本公司常規(guī)的監(jiān)測方案

2.1 后備種豬

后備種豬飼養(yǎng)至60 kg后，轉(zhuǎn)至后備豬馴化隔離舍飼養(yǎng)，對(duì)不符合選留條件的及時(shí)淘汰出群，對(duì)符合條件的采樣監(jiān)測。監(jiān)測項(xiàng)目包括豬瘟抗原及抗體、藍(lán)耳病抗原及抗體、豬偽狂犬病抗原及抗體、豬口蹄疫抗體、圓環(huán)病毒病抗原及抗體等。

2.2 生產(chǎn)公豬和母豬

公豬全群監(jiān)測，生產(chǎn)母豬分胎次抽檢，每年2次。監(jiān)測項(xiàng)目：豬瘟抗原及抗體、藍(lán)耳病抗原及抗體、豬偽狂犬病抗原及抗體、圓環(huán)病毒病抗原及抗體、口蹄疫抗體、乙腦抗原及抗體、細(xì)小病毒病抗原及抗體、弓形體等。

2.3 生長豬群

按周齡定期抽檢，監(jiān)測項(xiàng)目為：豬瘟抗原及抗體、豬偽狂犬病抗原及抗體、圓環(huán)病毒病抗原及抗體、藍(lán)耳病抗原及抗體、口蹄疫抗體及弓形體等。

2.4 特殊時(shí)期的檢測

豬群中個(gè)體或群體出現(xiàn)疫病時(shí)，以臨床判定為參考，制定相應(yīng)的檢測項(xiàng)目，根據(jù)所需檢測項(xiàng)目，采集相應(yīng)的樣品，詳細(xì)記錄采集樣品的來源、采集日期、豬只日齡及臨床癥狀等項(xiàng)目，并合理地保存樣品，盡快送到本公司實(shí)驗(yàn)室檢測。公司具有專門的疫病診斷實(shí)驗(yàn)室，能夠做到現(xiàn)采現(xiàn)檢，省去了諸多中間環(huán)節(jié)，使得檢測更加快速、準(zhǔn)確。

目前國家對(duì)豬瘟、藍(lán)耳病、豬偽狂犬病及口蹄疫等嚴(yán)重影響我國養(yǎng)豬業(yè)的病原開展凈化工作。雖然不同的疫病有不同的凈化方案，但是其凈化的大體思路基本相同：篩選評(píng)估適合本場的優(yōu)質(zhì)疫苗，定期、持續(xù)開展病原及抗體監(jiān)測，采取強(qiáng)有力的淘汰措施和合理的飼養(yǎng)管理及全方位的生物安全措施等[12]。

3 討論

3.1 實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測數(shù)據(jù)的積累

規(guī)模化豬場實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測，只是生產(chǎn)綜合管理環(huán)節(jié)中的一環(huán)，豬場的生產(chǎn)監(jiān)測遠(yuǎn)不止這些。對(duì)豬場的每一個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)、每一個(gè)細(xì)節(jié)都需要監(jiān)測，只有這樣才能夠了解整個(gè)豬場的真實(shí)情況，從而對(duì)豬場整體的生產(chǎn)進(jìn)行合理地指導(dǎo)。另外，監(jiān)測可以是長遠(yuǎn)的，也可以是短期的，只有對(duì)生產(chǎn)環(huán)節(jié)處處留心，積累試驗(yàn)數(shù)據(jù)，從大量的數(shù)據(jù)中歸納和總結(jié)出影響豬場生產(chǎn)的不利因素，才能做到及時(shí)采取應(yīng)對(duì)措施。

3.2 監(jiān)測體系有助于特定病原的凈化

通過豬場實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測體系的建立和應(yīng)用，規(guī)模化豬場可以根據(jù)檢測的具體情況，凈化某些特定病原(如豬偽狂犬病、豬瘟、藍(lán)耳病等)，并提出控制方案，有效提高豬群的健康水平[13]。

3.3 多種舉措并舉，保證豬場生產(chǎn)穩(wěn)定

豬場的實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測體系是保障豬場安全生產(chǎn)的有力武器，但是并非決定性因素，實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測體系只是豬場的一個(gè)較為合理的參考系統(tǒng)。在運(yùn)行實(shí)驗(yàn)室監(jiān)測體系的同時(shí)，提高豬場的管理水平，采取綜合性措施，才能使豬場真正實(shí)現(xiàn)安全、健康生產(chǎn)[14]。