MTDH 和PDCD4 在胃癌組織中的表達及其臨床意義

任玉清 陳啟松 王華

（深圳市南山區西麗人民醫院普通外科 廣東 深圳 518055）

近年來，由于多種因素的交互性作用，導致胃癌具有較高的發病率，嚴重影響患者健康以及生命安全。該病屬于典型的消化系統惡性腫瘤類型，其發病率占據人類惡性腫瘤第三名[1-2]。因為早期胃癌一般表現為無癥狀或只是輕微不適，而一旦覺察到明顯癥狀時，普遍已經進入晚期，延誤了最佳治療機會。所以，必須采取有效措施，尋求科學有效的診斷指標[3]。我院積極開展研究，探索分析胃癌組織中異黏蛋白(MTDH)以及程序性細胞死亡因子4(PDCD4)的表達水平及其臨床意義，取得了有價值的經驗。

1.資料與方法

1.1 一般資料

將我院2019 年1—10 月收治的接受胃癌手術治療患者50例作為研究對象。含男33 例、女17 例；年齡42 ～76 歲，平均(60.5±4.5)歲；病程1 ～6 個月，平均(3.5±0.5)個月；在胃癌TNM 臨床分期方面，含Ⅰ＋Ⅱ期26 例，Ⅲ＋Ⅳ期24 例；在有無淋巴結轉移情況方面：含淋巴結轉移34 例，未發現淋巴結轉移16 例。所有研究對象均具有胃癌相關臨床指征并經檢查確診，均為原發疾病，已對并發嚴重肝、腦、腎以及血液性疾病患者予以排除，同時排除過往有胃部腫瘤史及術前接受放射和化學治療者。所有研究對象均同意納入本研究，并經本院倫理委員會審批，其臨床資料均完整準確。

1.2 方法

組建專門小組，抽調本院專業人員5 人參與。選取研究對象胃癌組織以及癌旁組織標本實施檢測。實驗材料及試劑選用MTDH Rabbit pAb-多克隆抗體(武漢愛博泰克生物科技有限公司)、ANti-PDCD4 多克隆抗體(上海安妍生物有限公司)，通用型二步法檢測試劑盒(PV-6000)免疫組化(北京欣興唐生物科技有限公司)、濃縮型DAB 試劑盒(上海康朗生物科技有限公司)。按照規范進行標本采集，注意癌旁組織必須自距離癌組織邊界＞5cm 位置選取[4-5]。完成標本采集后，要將其妥善固定于比例10%的中性甲醛溶液中，以乙醇進行脫水，以石蠟進行包埋。予以連續切片蠟塊6 張，應用覆有多聚賴氨酸載玻片實施粘貼，之后實施免疫組織化學染色檢測。免疫組化嚴格按照要求規范實施具體操作：①烤片。將備好的切片置于68℃的烤片箱中進行烤片，時間持續20min。②二甲苯脫蠟，乙醇脫水。將烤片完成的切片依次置入3缸二甲苯試劑缸，每缸予以停留15min。實現脫蠟后，依次以純乙醇、75%乙醇、50%乙醇、純凈水實施洗脫，最后以比例為0.01mol/L 的磷酸鹽緩沖液實施沖洗3 次。③內源性過氧化物酶活性阻斷及滅活。將切片置入備好的濕盒，應用比例為3%的過氧化氫去離子水滴入，保存在37℃環境下10min，然后以比例為0.01mol/L 的磷酸鹽緩沖液實施洗滌。④加入一抗。將一抗進行稀釋后滴入，在4℃條件下孵育24h。⑤濕盒復溫。將濕盒置于室溫下半小時，應用0.01mol/L 磷酸鹽緩沖液實施洗滌。⑥滴加二抗。滴加二抗試劑1 滴，于37℃條件下放置15min。⑦沖洗。應用PBS 磷酸鹽緩沖液予以沖洗3 次，每次持續3min。⑧顯色。配置完成新鮮DAB 顯色液，將50μl 滴于到標本，仔細觀察，但特異性部位著色較強，周圍著色較淺時，立即停止反應。⑨復染及藍化。應用蘇木素實施復染，15s 后應用自來水洗滌，并將其置入95℃熱水中完成藍化60s。所有患者在完成手術治療后，均接受隨訪[6]。

1.3 觀察指標

①胃癌組織和癌旁組織中MTDH 與PDCD4 表達差異。②MTDH與PDCD4 在胃癌組織中的表達水平與臨床病理參數間的關系。③MTDH 與PDCD4 在胃癌組織中表達的相關性。免疫組化顯色標準為：當細胞內呈現棕黃色顆粒即表示MTDH 與PDCD4 發生陽性染色[7]。

1.4 統計學方法

應用SPSS20.0 軟件對相關結果數據實施分析。P＜0.05 對應差異有統計學意義。

2.結果

2.1 胃癌患者胃癌組織與癌旁組織MTDH 與PDCD4 表達情況比較

檢測表明，胃癌患者胃癌組織及癌旁組織中均呈現MTDH 與PDCD4 表達，MTDH 胃癌組織中表達水平為74.00%(37 例)，顯著超過癌旁組織的26.00%(13 例)(P＜0.05)；PDCD4 胃癌組織中表達水平為26.00%(13 例)，顯著低于癌旁組織的74.00%(37 例)(P＜0.05)。

2.2 胃癌組織MTDH 和PDCD4 表達水平與臨床參數情況比較

胃癌組織中，MTDH 陽性表達水平和腫瘤分期、浸潤程度、淋巴結轉移有顯著相關(P＜0.05)，與其他參數無明顯相關性(P＞0.05)；PDCD4 陽性表達水平與腫瘤分化程度顯著相關(P＜0.05)，與其他參數無顯著相關性(P＞0.05)。見表1 ～表3。

2.3 胃癌組織中MTDH 和PDCD4 在表達情況比較

50例胃癌患者中，有37例MTDH陽性表達，其中6例(16.22%)PDCD4 陽性表達；有13 例MTDH 陰性表達，其中有6 例(46.15%)PDCD4 陽性表達。

表1 胃癌組織MTDH 和PDCD4 表達水平與性別、年齡、腫瘤大小情況比較[n(%)]

表2 胃癌組織MTDH 和PDCD4 表達水平與腫瘤浸潤程度、分期和淋巴轉移情況比較[n(%)]

表3 胃癌組織MTDH 和PDCD4 表達水平與腫瘤分化程度、部位和分型情況比較[n(%)]

3.討論

異黏蛋白(MTDH)屬于星形細胞上調基因-1(AEG-1)的別稱[8]。臨床研究結果顯示，其對于膀胱癌、乳腺癌、前列腺癌以及腦膠質瘤、非小細胞肺癌等一系列惡性腫瘤而言，均具有高表達屬性[9]。其與腫瘤不良預后具有十分密切的關系，且能夠促進腫瘤增殖、轉移和以及提升其化療耐藥性。程序性細胞死亡因子4(PDCD4)屬于細胞凋亡所必需的一類新生大分子復合物類型，一旦細胞凋亡啟動，就會表達為上調[10]。臨床研究證實，PDCD4 不但會在極大程度上影響細胞的程序性死亡，還能夠通過阻止細胞腫瘤性轉化以有效抑制腫瘤的發生以及發展[11]。本研究結果顯示，胃癌患者的胃癌組織中，MTDH 含量明顯性超過癌旁組織，且和腫瘤分期、浸潤程度及淋巴結轉移等具有明顯相關性[12-13]。而PDCD4 在患者胃癌組織中的表達水平明顯性低于癌旁組織，且和腫瘤分化程度具有明顯相關性；對于同一胃癌患者而言，其MTDH 和PDCD4 表達基本表現為負相關關系。因此，對于胃癌患者，積極實施MTDH 和PDCD4 表達水平檢測，能夠有效實現對胃癌的發生、發展以及預后的判斷和分析，對于及時治療干預具有重要價值[14-15]。