湖北貝母石油醚段化學成分研究

李宇 彭湘敏 張娜 劉丹 冉亞蘭 趙仁君 何美軍

摘 要：探究湖北貝母石油醚段的化學成分。本文將湖北貝母經60%乙醇超聲提取獲得總浸膏，再采用石油醚萃取獲得石油醚段浸膏;利用1D和2D NMR等對湖北貝母石油醚段的成分進行了探索。結果表明，石油醚段經硅膠柱色譜及半制備高效液相分離到2個化合物，利用1D和2D NMR波譜數據分析，鑒定其結構分別為beta-Sitosterol（1）、ethyl ferulate（2）。該研究可為湖北貝母藥材的開發利用、臨床使用提供理論依據。

關鍵詞：湖北貝母;抗菌活性;石油醚段;化合物

中圖分類號：S-3

文獻標識碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20201115002

收稿日期：2020-09-22

基金項目：湖北省農業科學院中藥材研究所2019年青年科學基金項目（項目編號：2019ZYCJJ05）

作者簡介：李宇（1990-），男，碩士，助理研究員。研究方向：中藥材天然產物;通訊作者何美軍，副研究員。研究方向：中藥材天然產物。

湖北貝母為百合科植物湖北貝母（Fritillariahupehensis Hsiao et K.C.Hsia）的干燥鱗莖，原野生于湖北省恩施自治州，俗稱“板貝”或“窯貝”，民間習作川貝藥用，使用歷史悠久[1]。湖北貝母在主產地恩施自治州利川市和恩施市至少有150a以上的種植歷史，以前又稱板貝、窖貝、奉貝，臨床上一直作川貝使用[2]。中藥貝母始載于《神農本草經》，是中醫臨床應用最為廣泛的止咳祛痰藥之一[3]。湖北貝母具有清熱化痰、止咳、散結的功效，傳統用于治療熱痰咳嗽、瘰疬痰核、癰腫瘡毒[4]。現代藥理實驗表明，湖北貝母具有鎮咳平喘[5]、抗炎[6]、抗癌[7]、抗腫瘤[8]等作用。貝母中的活性成分主要有生物堿、揮發油等，目前，絕大多數文獻是對貝母生物堿化學成分及藥理作用等方面，其它成分的相關研究比較少見[9]。

湖北貝母是湖北恩施重要的藥材之一，因此研究湖北貝母石油醚段化學成分以及其含量具有重要意義。該研究可為湖北貝母藥材的開發利用、臨床使用提供理論依據，也為湖北貝母向外更好發展打下基礎。

1?材料與方法

1.1?材料與試劑

J&K色譜純乙腈。本研究所用湖北貝母樣品采集于湖北省恩施市的人工種植品，經湖北省農業科學院中藥材研究所由金文高級農藝師鑒定為湖北貝母鱗莖。

1.2?儀器與設備

Bruker maXis高分辨飛行時間質譜儀;Aglient Technologies 7890A/5975C GC-MS聯用儀;Agilent 1260高效液相色譜儀（配DAD檢測器）;Phenomenex色譜柱（50mm×4.6mm， ODS 5μm）;Agilent Poroshell反相色譜柱120 EC-C18（4.6mm×150mm，4μm）;HS-GF254硅膠薄層板。

1.3?方法

將干燥的湖北貝母鱗莖20kg，粉碎，過40目篩，共用40L的60%的乙醇萃取，采用60%乙醇100L冷浸提取96h，過濾，減壓濃縮回收乙醇，得到浸膏800.27g。再加3倍體積的石油醚萃取3次，合并石油醚相，減壓回收石油醚，得到貝母石油醚段浸膏80.2g。

貝母石油醚段浸膏采用硅藻土拌樣，硅膠柱層析（Φ10cm×50cm）分離，以石油醚/乙酸乙酯體系（100：0、80：20、50：50、20：80、0：100，V/V）洗脫，得到8個組分Fr.A1～Fr.A8。根據HPLC和TLC分析結果，將Fr.A4～Fr.A6合并正向硅膠分離，以石油醚/氯仿體系（100：0、98：2、96：4、94：6、92：8、90：10、80：20，V/V））洗脫，得到10個組分Fr.B1～Fr.B10。根據HPLC分析，經半制備HPLC、ODS色譜柱（250mm×10mm，5μm），組分Fr.B6～Fr.B7合并，經半制備HPLC、ODS色譜柱分離，以CH3CN/H2O（85：15，V/V）體系洗脫30min，流速為2.5mL·min-1，得到化合物2（tR24.5min，10mg）。組分Fr.B8走凝膠柱，以乙腈洗脫，得到化合物1。

2?結果與分析

2.1?湖北貝母石油醚段化合物分離鑒定

2.1.1?化合物1

為白色無定型晶體，化合物1在UV（190～450nm）及可見光波段無吸收。1H NMR譜表明該化合物存在共軛雙鍵質子（δH5.32）。通過HRMS-ESI質譜檢測，其[M+K]+=453.3560，推測其分子式為C29H50O。1H NMR（CDCl3，400MHz）δ：5.32（1H，d，J=5.0Hz，H-5）3.50（1H，ddd，J=15.4，10.6，4.4Hz，H-3），1.02（3H，dd，J=18.9，9.7Hz，H-19），0.94-0.85（12H，m，H-19/26/27/29）;13C NMR（CDCl3，101 MHz）δ140.8（C-5），121.7（C-6），71.8（C-3），56.8（C-14），56.1（C-17），50.1（C-9），45.8（C-24），42.3（C-4），42.3（C-13），39.8（C-12），37.3（C-1），36.5（C-10），36.2（C-20），34.0（C-22），31.9（C-7），31.7（C-8），29.2（C-25），28.3（C-16），26.1（C-23），24.3（C-15），23.1（C-28），21.1（C-26），19.8（C-19），19.4（C-27），19.1（C-21），12.0（C-29），11.9（C-18）。化合物1的1H和13C NMR化學位移值與文獻報道的beta-Sitosterol的核磁數據基本一致，推斷該化合物為beta-Sitosterol[10]。

2.1.2?化合物2

為白色無定型晶體，化合物2的UV吸收光譜在340nm波長處顯示有最大吸收波長。高分辨質譜HRMS-ESI[2 M-H]-為441.1559，推測分子式為C12H14O4。HNMR（400MHz MeOD）7.59（1H，d，J=15.9Hz，H-8），7.16（1H，s，H-7），7.05（1H，d，J=7.1Hz，H-5），6.79（d，J=7.8Hz，1H，H-6），6.32（d，J=15.8Hz，1H，H-9），4.22（2H，dd，J=14.1，7.0Hz，H-10），3.88（s，3H，H-1），3.31（s，1H，），1.31（t，J=7.1Hz，4H，H-12）;13C NMR（101MHz，MeOD）δC：168.01（C-10），150.19（C-2），148.24（C-3），145.37（C-8），122.85（C-5），115.28（C-4），113.81（C-7），110.18（C-9），60.01（C-11），55.01（C-1），13.26（C-12）。化合物2的1H和13C NMR化學位移值與文獻報道的ethyl ferulate核磁數據基本一致，推斷該化合物為ethyl ferulate[11]。

3?結論

由于湖北貝母石油醚段有抗菌活性，本研究進而對湖北貝母石油醚段的成分進行了探索，石油醚段經硅膠柱色譜及半制備高效液相分離到2種化合物，利用1D和2D NMR波譜數據分析，鑒定其結構分別為beta-Sitosterol（1）、ethyl ferulate（2）。beta-Sitosterol是植物甾醇類成分之一，存在于某些植物或種子中，具有降血脂、抗癌、抗炎癥等作用，可作為苦檀子質量控制的指標[12]。β-谷甾醇-硬脂酸油脂凝膠和凝膠乳液對β-胡蘿卜素具有增強緩釋效應[13]。beta-Sitosterol可保護大鼠心肌缺血再灌注損傷，可能參與ERK1/2信號通路，緩解心肌缺血再灌注大鼠出現的氧化應激和炎癥損傷，并抑制其心肌細胞的凋亡[14]。ethyl ferulate能有效抑制SGC-7901細胞增殖，并能誘導SGC-7901細胞凋亡[15]。近年來，ethyl ferulate逐漸進入人們的視野，以其為主要物質的醫療藥物、功能性食品等如雨后春筍般誕生，其良好的清除自由基、抗菌消除炎癥、預防腫瘤、降血脂等特性深受人們喜愛和關注，因而使其具有了良好的開發和應用前景[16]。

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（責任編輯?李媛媛）