血培養布魯菌在實驗室的鑒識

李艷

【摘要】目的 總結布魯菌在血培養時的表現特性，對其正確鑒定識別。方法 通過對我院2018年8月～2019年1月共151例血培養陽性，經過鑒定為布魯菌感染且血清學凝集試驗陽性（1例為陰性）結果進行回顧性分析總結。結果 血培養時間平均為82.1 h陽性報警，生長曲線具有共同特征，血平板上生長緩慢。結論 實驗室人員通過血培養生長曲線特征、菌落特點及生化反應正確識別布魯菌，為臨床提供診斷的金標準，幫助實驗室人員及早做出防護，防止實驗室感染。

【關鍵詞】布魯菌;血培養;平均陽性報警時間;生長曲線特征

【中圖分類號】R446 【文獻標識碼】A 【文章編號】ISSN.2095.6681.2020.27..02

布魯菌是一類人畜共患感染性疾病的病原體，主要通過接觸染病牛羊，細菌可經完整的皮膚黏膜進入宿主體內，或者食用未煮熟的染病牛羊肉或奶制品，人類普遍對布魯菌易感。布魯菌進入人體后，首先侵犯局部淋巴結，并在淋巴結內生長繁殖形成感染灶，當細菌繁殖到一定數量便侵入血流并釋放出內毒素，出現菌血癥。外周血中培養出布魯菌是診斷的金標準[1]，抽取血液進行培養是臨床醫生普遍使用且容易被病人及家屬接受的診斷方法。本文通過對151例血培養檢測出布魯菌的病例資料進行回顧性分析，總結其在自動培養儀上生長曲線特點，轉種后生長緩慢，菌落特征及一系列生化反應特點，為檢驗科微生物工作人員對本菌的正確識別提供參考，及早而準確發放血培養結果，為臨床醫生提供診斷依據，防止誤診和漏診。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年8月～2019年1月我院門診及住院病人根據2012年頒布的《布魯氏菌病診療指南（試行）》確診為布魯氏菌病，外周血中均有布魯菌生長的151例病人資料。虎紅平板凝集試驗（PAT）1+至4+（1例為陰性），血清抗體微量凝集試驗：陰性1例，1：50陽性2例，1：100陽性23例，1：200陽性22例，1：400陽性29例，1：800陽性21例，≥1：800陽性53例。臨床上表現為不同程度的發熱、多汗、關節痛、肝脾腫大并有接觸史[2]。

1.2 儀器與試劑

VersaTREK及配套使用的需氧培養瓶。遼寧迪浩生物科技有限公司生產的布魯氏菌抗體檢測試劑盒（虎紅平板凝集法）。

1.3 標本采集

無菌采集10 mL血液至需氧培養瓶中，按儀器要求的程序放入培養儀，培養儀自動進行。

1.4 試驗室鑒定

VersaTREK自動血培養儀發出陽性報警，查看生長曲線為下降的曲線（如圖1），應該高度懷疑布魯菌生長，為防止試驗室污染和操作人員感染，然后按照無菌操作要求在生物安全柜中進行抽取混勻的培養瓶中的樣本轉種到馬血平板和伊紅美藍平板上，放置在35～37℃、5～10﹪CO2培養箱中進行培養（平板上應做好標記，培養后的觀察、取菌、接種等一系列的操作都應該在生物安全柜中進行）。24 h后觀察血平板上有菌生長但不明顯，無法辨識菌落形態。培養至48～72 h血平板上生長出較小、突起、邊緣整齊、灰白色、濕潤的菌落，麥康凱平板上不生長。取菌涂片進行革蘭染色，油鏡觀察可見革蘭陰性球桿菌（如圖2），沙灘樣。 尿素分解試驗5～10分鐘出現陽性，氧化酶、觸酶陽性，能分解葡萄糖等糖類，產少量酸，能還原硝酸鹽，不分解甘露醇，不形成靛基質，不利用枸櫞酸鹽，甲基紅和VP試驗陰性。與布魯菌陽性標準血清發生肉眼可見的凝集反應。

2 結 果

布魯菌在VersaTREK自動血培養儀上的生長曲線為下降的曲線，VersaTREK是根據感受到的培養瓶中氣體壓力變化自動報警，布魯菌在生長過程中消耗氣體，所以生長曲線為下降曲線。151例病例最短的報陽時間為53.0 h，最長報陽時間為209.7 h，平均報陽時間為82.1 h。接種到血平板上放置5～10%CO2培養箱進行培養24 h，可見細菌生長但無法辨識菌落特征。繼續培養至48～72 h，可見細小、突起、邊緣整齊、灰白色、濕潤的菌落。革蘭染色為陰性球桿菌，沙灘樣，尿素分解試驗5～10分鐘出現陽性，氧化酶、觸酶陽性，能分解葡萄糖等糖類，產少量酸，能還原硝酸鹽，不分解甘露醇，不形成靛基質，不利用枸櫞酸鹽，甲基紅和VP試驗陰性，與布魯菌陽性標準血清做玻片凝集試驗，發生肉眼可見的顆粒凝集反應，可推斷為布魯菌生長。

3 討 論

目前，布魯氏菌病流行呈現新的趨勢，出現分散點狀，多發特點。病人多出現不同程度的反復發熱、多汗、關節痛、肝脾腫大并有接觸史，外周血中培養出布魯菌是診斷的金標準[1]，抽取血液進行培養是臨床醫生普遍使用且容易被病人及家屬接受的診斷方法。臨床醫生為尋找病源大多會進行血液培養，如果在VersaTREK培養儀上出現上述特征的生長曲線時，應高度懷疑布魯氏桿菌感染，布魯菌的主要致病物質是內毒素。光滑型菌的莢膜有較強的侵襲力，細菌產生的透明質酸酶和H2O2 酶可幫助細菌能通過完好的黏膜和呼吸道進入宿主體內，為避免實驗室操作人員實驗室內感染，后序的操作應該在生物安全柜中進行。

布魯菌生長緩慢，本文中的151例菌株的平均報陽時間為82.1 h，最短報陽時間為53.0 h，最長報陽時間為209.7 h。全自動血培養儀系統廣泛應用，對布魯氏菌培養的報道也逐漸增多。[4]

布魯菌在血平板上生長緩慢，菌落特征為較小、突起、邊緣整齊、灰白色、濕潤光滑。革蘭染色陰性球桿菌，呈現沙灘樣，應與其他革蘭染色陰性桿菌相區別。布魯菌有較強的侵襲力，人類對其普遍易感，可通過完整的皮膚黏膜、呼吸道、消化道感染人類，常可導致實驗室污染感染，被認為是存在極大的危害的病原菌，[5] 常通過氣溶膠使微生物操作人員獲得感染，多篇文獻中有實驗室暴發感染的相關報道，[6]我國也有實驗室感染的相關報道。[7]布魯氏桿菌抵抗力強，如在水、土壤、糞便、皮毛肉和乳制品中可存活數周至數月。因此，對于微生物實驗室的檢驗人員，應熟練掌握對布魯菌的認識，做到早期識別，規避實驗室感染的風險。

參考文獻

[1] 董巧榮，4例菌血癥布魯氏菌血培養特性分析[J].甘肅醫藥，2017，36（5）：375–376.

[2] 王榮英，賀振銀，陳亞津，等.布魯桿菌病患者流行病學及臨床特征分析[J].中國全科醫學，2017，20（8）：988-991.

[3] 劉凡瑜，王 平，王 迪，等.吉林省西部牧區養羊戶布魯桿菌病感染現況調查[J].吉林大學學報（醫學版），2015，41（1）：175-180.

[4] 陳日榮，李惠冰，周美容.不同種類微生物在全自動血培養儀中的生長曲線特點及意義[J].中國感染控制雜志，2006，5（3）：206-208.

[5] 陳東科，孫長貴.實用臨床微生物學檢驗與圖譜[M].第一版，北京：人民衛生出版社，2011：497.

[6] Robichaud S，Libman M，Behr M，et al.Prevention of laboratory-acquired brucellosis[J].Clin Infect Dis.2004，38（12）：e119-e122.

[7] 王 帝，翟 璐.東北農業大學28名師生因動物實驗感染嚴重傳染病[N].中國青年報，2011-09-03.