蘇木乙酸乙酯提取物對動脈粥樣硬化模型大鼠總膽固醇及白細胞介素-18的影響

袁 野，范增光

動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是由脂質(zhì)驅(qū)動的一種緩慢進展的炎癥過程，當粥樣斑塊破裂時會導(dǎo)致冠心病、腦卒中及外周動脈疾病等的發(fā)生，已成為危害人類健康的主要危險因素[1-2]。已有研究表明，血清總膽固醇(TC)及白細胞介素-18(IL-18)在AS的形成中均具有明顯的促進作用，是預(yù)測AS發(fā)生、發(fā)展的重要指標。在我國，中藥尤其是一部分活血化瘀藥物在抗AS方面具有較好的療效，在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用[3]。而中藥蘇木具有活血祛瘀等作用，在臨床上得到反復(fù)的驗證。近年來，隨著蘇木現(xiàn)代藥理研究的不斷深入，進一步證實蘇木及其提取物具有抗炎、免疫抑制、抗氧化、保護血管、抗心臟移植排斥反應(yīng)等藥理作用[4-5]。基于此，本研究觀察蘇木乙酸乙酯提取物對AS模型大鼠TC及IL-18水平的影響，探討其抗AS的部分機制。現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 健康成年雄性SD大鼠40只，體重(200±20)g，實驗動物購于黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，合格證書號：SCXK-(黑)2013-004，在適宜溫度、濕度、風(fēng)速的室內(nèi)飼養(yǎng)，12 h明暗循環(huán)，24 h自由獲取食物和水。

1.2 蘇木提取物的制備 蘇木產(chǎn)地云南，藥材購于黑龍江省藥材公司，委托黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院進行提取和制備。具體方法：經(jīng)生藥鑒定制成蘇木粗粉(40目)，浸泡于75%的乙醇溶液中，經(jīng)重復(fù)回流2次，去渣，加熱，水浴蒸干制成蘇木醇提取干粉，將提取的干粉與雙蒸水混勻得到混懸液，再用乙酸乙酯萃取，進而回收得到蘇木提取物。

1.3 實驗藥物 辛伐他汀片(杭州默沙制藥有限公司生產(chǎn))，羧甲基纖維素鈉(河北石家莊森隆化工有限公司生產(chǎn))，維生素D3注射液(上海通用藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn))1 mL；酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)試劑盒(上海信裕生物生產(chǎn))。辛伐他汀混懸液制備：將辛伐他汀溶于羧甲基纖維素鈉溶液中，得到濃度為0.42 mg/mL的混懸液；將蘇木乙酸乙酯提取物同樣溶于羧甲基纖維素鈉溶液中，得到濃度為0.115 g/mL的混懸液。

1.4 AS模型建立 將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，然后腹腔注射維生素D3注射液7×105U/(kg·d)，每日1次，共注射3 d，同時喂高脂飼料12周(93.4%普通飼料+5%豬油、0.1%丙硫氧嘧啶、1%膽固醇、0.5%膽酸鈉)。

1.5 實驗分組與給藥 將全部SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后采用隨機分組方法分為空白組、模型組、辛伐他汀組及蘇木乙酸乙酯提取物組，每組10只。喂養(yǎng)12周后，第13周對各組大鼠進行灌胃，連續(xù)4周。根據(jù)課題組前期實驗結(jié)果及人鼠劑量換算后給藥，其中空白組、模型組均灌服等體積的羧甲基纖維素鈉10 mL/(kg·d)；辛伐他汀組：灌服含0.42 mg/mL辛伐他汀的羧甲基纖維素鈉混懸劑10 mL/(kg·d)；蘇木乙酸乙酯提取物組：灌服含生藥0.115 g/mL的羧甲基纖維素鈉10 mL/(kg·d)。

1.6 標本取材 實驗16周后，將大鼠充分麻醉后固定四肢，進行腹主動脈采血，經(jīng)離心10 min后取得血清，于冰箱內(nèi)冷藏待檢，然后檢測TC，ELISA法檢測血清IL-18的表達。

2 結(jié) 果

2.1 大鼠一般狀態(tài) 在12周模型復(fù)制期間，40只大鼠未出現(xiàn)死亡情況，給藥灌胃期間模型組死亡2只，辛伐他汀組死亡1只，蘇木乙酸乙酯提取物組死亡1只，大鼠總死亡率為10%，將死亡大鼠解剖發(fā)現(xiàn)，辛伐他汀組1只大鼠無明顯誘因?qū)е滤劳觯溆?只由于灌胃時操作不當液體進入氣管導(dǎo)致死亡。

2.2 各組TC水平比較 與空白組對比，模型組大鼠血清TC水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與模型組對比，辛伐他汀組及蘇木乙酸乙酯提取物組TC水平均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與辛伐他汀組對比，蘇木乙酸乙酯提取物組TC水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表1。

表1 各組大鼠TC水平比較(±s) 單位：mmol/L

2.3 各組血清IL-18水平比較 與空白組對比，模型組大鼠血清IL-18水平升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與模型組對比，辛伐他汀組及蘇木乙酸乙酯提取物組IL-18水平均降低，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與辛伐他汀組對比，蘇木乙酸乙酯提取物組IL-18水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。詳見表2。

表2 各組大鼠血清IL-18 水平比較(±s) 單位：pg/mL

3 討 論

蘇木，又名赤木、蘇方、蘇方木等，為豆科植物蘇木的干燥心材，在我國主要分布于兩廣、四川、貴州等地，但以廣西為主要產(chǎn)地，其味甘、咸，微澀，性平，歸心、肝脾經(jīng)，是一味常用活血化瘀藥，具有活血化瘀、消腫止痛的作用[6-8]。趙煥新等[9]為證實蘇木的主要化學(xué)成分，從蘇木乙酸乙酯提取物中分離出8個化合物，同時，將這8種化合物在體外培養(yǎng)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其對內(nèi)皮細胞損傷具有明顯的保護作用。有研究表明，蘇木乙酸乙酯提取物具有明顯的抗炎及抗血脂的藥理作用[10]。近年來，蘇木在心血管領(lǐng)域，尤其在抗AS方面的應(yīng)用越來越廣泛。

在AS的形成過程中，脂肪浸潤學(xué)說、炎癥反應(yīng)學(xué)說等受到了人們的廣泛關(guān)注。特別在AS發(fā)生、發(fā)展的過程中，炎癥與血脂代謝紊亂兩者往往有著一定的聯(lián)系，相互影響，加快了AS的形成。血脂代謝異常會刺激血管內(nèi)皮細胞釋放炎性細胞，而炎性細胞移至內(nèi)皮下，會轉(zhuǎn)換成巨噬細胞，形成泡沫細胞貼敷于血管壁上，后逐漸演變?yōu)橹|(zhì)斑塊，而斑塊不斷聚集會導(dǎo)致動脈壁增厚變硬，血管腔狹窄，甚至?xí)l(fā)生完全閉塞，此外，不穩(wěn)定的粥樣斑塊破裂極易導(dǎo)致局部血管出血、鈣化等，繼而導(dǎo)致急性心腦血管事件的發(fā)生[11]。而血清TC是血脂成分中的一項極為重要的指標，其含量增加會促使紅細胞的硬化，進而影響紅細胞的變形能力，使血液黏稠性增加、細胞膜的流動性下降，引起血脂代謝紊亂[12]。師豪等[13]研究表明TC等血脂指標異常的表達可能是冠狀動脈粥樣硬化斑塊形成的重要機制之一。而炎癥反應(yīng)是由一系列致炎因子及細胞因子參與的復(fù)雜過程。研究表明，白細胞介素常作為炎癥的特異指標在AS發(fā)生發(fā)展的過程中都有不同程度的表達，其變化與AS的程度具有顯著的關(guān)系。IL-18是一種多效性前炎性細胞因子，也是強大的致炎誘導(dǎo)劑，在調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)中起重要作用[14]。胡秋玲等[15]研究也表明，IL-18可上調(diào)多種炎性因子，比如上調(diào)干擾素-γ(INF-γ)的表達和誘導(dǎo)Th1型免疫反應(yīng)，增加斑塊易損性效應(yīng)及促進AS形成，是AS形成的重要生化標志物。他汀類藥物既具有降血脂的作用，又具有抗炎作用，在AS的治療中起重要的作用。而中藥對AS的療效同樣顯著，越來越受到人們的重視。有研究證明，降血脂與抗感染治療可以減慢甚至?xí)孓D(zhuǎn)動脈粥樣斑塊的病變過程，調(diào)控粥樣斑塊，減輕病人的臨床癥狀，減少急性心腦血管事件發(fā)生[16]。

本實驗結(jié)果表明，在給予高脂飲食的基礎(chǔ)上腹腔注射維生素D3可使SD大鼠血清TC及IL-18水平升高，而給予辛伐他汀和蘇木乙酸乙酯提取物治療后可不同程度降低TC及IL-18水平。根據(jù)實驗結(jié)果可以初步得出結(jié)論：蘇木乙酸乙酯提取物可降低AS模型大鼠血清TC及IL-18水平，其機制可能是通過抑制炎癥反應(yīng)及改善血脂水平兩方面同時對AS起作用。但其抗AS的另一些機制還有待今后進一步的研究。