多管發(fā)酵法與紙片法檢測(cè)水中糞大腸菌群的比較

王琦

摘 要：糞大腸桿菌能更準(zhǔn)確地反映水體受糞便污染的情況，是目前國(guó)際上通行的監(jiān)測(cè)水質(zhì)是否受糞便污染的指示菌。本文將多管發(fā)酵法和紙片法同步檢測(cè)了太湖水的糞大腸菌群，并對(duì)兩種方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了比較，分析兩種方法的差異以及各自的優(yōu)缺點(diǎn)，這樣能在今后的實(shí)驗(yàn)中選取更準(zhǔn)確、高效的方法測(cè)定糞大腸菌群。

關(guān)鍵詞：糞大腸菌群;多管發(fā)酵法;紙片法

糞大腸菌群是糞便污染的指示菌，是水質(zhì)污染的重要指標(biāo)之一，目前，糞大腸菌的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法為多管發(fā)酵法，檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)，試驗(yàn)步驟較為繁瑣，無(wú)法快速評(píng)價(jià)水質(zhì)污染狀況。紙片法主要參照《水和廢水監(jiān)測(cè)分析方法（第四版）》（C類方法），在水質(zhì)監(jiān)測(cè)工作中，紙片法由于其方便高效，應(yīng)用逐年增多。本文采用多管發(fā)酵法和紙片法同步檢測(cè)了太湖水的糞大腸菌群，并對(duì)兩種方法的實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了比較分析。

一、糞大腸菌群的實(shí)驗(yàn)方法

1.多管發(fā)酵法

多管發(fā)酵法是根據(jù)大腸菌群細(xì)菌能發(fā)酵乳糖、產(chǎn)酸產(chǎn)氣并能使乳糖蛋白胨培養(yǎng)液變黃同時(shí)產(chǎn)生氣泡的原理，將水樣分濃度梯度接種到盛有乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的發(fā)酵管中，在37℃±0.5℃下培養(yǎng)24±2h，再將試驗(yàn)陽(yáng)性的發(fā)酵管中的培養(yǎng)物轉(zhuǎn)接到EC培養(yǎng)液中進(jìn)行復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，在44.5℃±0.5℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24±2h，培養(yǎng)后立即觀察，發(fā)酵管產(chǎn)氣表明確信試驗(yàn)陽(yáng)性。

2.紙片法

每份水樣設(shè)置3個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度梯度分別采用5張大紙片，5張小紙片，5張小紙片。5張大紙片每張接種10mL水樣，5張小紙片每張接種1mL水樣，再是1︰10稀釋的水樣接種到5張小紙片中，每張接種1mL，濃度高時(shí)可適當(dāng)稀釋。接種水樣時(shí)要均勻涂抹于紙片上，用手輕輕壓平，做好標(biāo)記，于44.5℃±1℃下培養(yǎng)18～24h。觀察結(jié)果，紙片呈均勻藍(lán)紫色，為陰性，若紙片上出現(xiàn)紫紅色菌落，周?chē)悬S圈者為陽(yáng)性或出現(xiàn)片狀紅暈周?chē)鸀辄S色背景者也為陽(yáng)性。

3.計(jì)算

兩種方法均根據(jù)不同接種量所出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果的數(shù)目，從MPN表中查得相應(yīng)的MPN指數(shù)，再經(jīng)下面的公式換算成每100mL的MPN值。

MPN值=MPN指數(shù)×10（ml）∕接種量最大的一管（ml）

我國(guó)目前以1L為報(bào)告單位，MPN值再乘10，即為1L水樣中的糞大腸菌群數(shù)。

二、實(shí)際水樣檢測(cè)結(jié)果

用紙片法和多管發(fā)酵法對(duì)8個(gè)實(shí)際水樣中的糞大腸菌群作比對(duì)檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表1。

對(duì)兩種方法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行秩和檢驗(yàn)，結(jié)果為t=7，P>0.10，表明紙片法與多管發(fā)酵法檢測(cè)結(jié)果之間無(wú)顯著性差異。

三、檢測(cè)方法的比較

在糞大腸菌群檢測(cè)方法中多管發(fā)酵法是傳統(tǒng)的檢測(cè)方法，操作步驟繁雜、干擾因素多 ，專一性差，需要確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，因此檢測(cè)周期較長(zhǎng)，需48h，不適于大量樣品的分析。但傳統(tǒng)方法均有原理簡(jiǎn)單、費(fèi)用較低、利于推廣的優(yōu)點(diǎn)，因此仍是常規(guī)監(jiān)測(cè)中的主要檢測(cè)方法。

紙片法與多管發(fā)酵法相比，紙片法只需在44.5℃下培養(yǎng)18～24h即可得出結(jié)果，紙片法快速省時(shí)簡(jiǎn)便，適合大批量監(jiān)測(cè)和應(yīng)急監(jiān)測(cè)。兩者比較見(jiàn)表2。

四、結(jié)語(yǔ)

實(shí)際水樣實(shí)驗(yàn)表明，紙片法與多管發(fā)酵法檢測(cè)結(jié)果之間無(wú)顯著性差異，但是紙片法的檢測(cè)結(jié)果普遍略低于經(jīng)典的多管發(fā)酵法，這可能是由于紙片法是將接種后的樣品直接置于培養(yǎng)箱中在44.5℃培養(yǎng)，而多管發(fā)酵法是將接種后的樣品先置于37℃環(huán)境中初發(fā)酵試驗(yàn)，再置于44.5℃環(huán)境中復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)，比前者多一個(gè)富集過(guò)程。紙片法具有操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)，能夠較為準(zhǔn)確地判斷水樣微生物污染狀況，可以作為環(huán)境分析方法中糞大腸菌群的快速篩查方法。

參考文獻(xiàn)：

[1]楊璐，朱雨欣.多管發(fā)酵法與紙片法檢測(cè)水中糞大腸菌群的比較[J].科技視界，2017（34）：2.