分光光度法測定口服補(bǔ)液鹽散中亞硝酸根含量

袁艷麗，韓衍青，李新麗，劉 成，蔡英杰

(江蘇省理化測試中心，江蘇 南京 210042)

亞硝酸鹽是食物中毒最多的原因之一，過量的亞硝酸鹽攝入會引發(fā)人中毒、致癌、甚至死亡[1]。口服補(bǔ)液鹽散適用于各種病因和各年齡段患者的腹瀉治療，是世界衛(wèi)生組織要求各國使用的腹瀉治療首選藥物，其主要成分有氯化鈉、枸櫞酸鈉、氯化鉀和無水葡萄糖[2]。配方里的鹽成分，可能會引入亞硝酸鹽，有的廠家將其限量控制在2 mg/kg。常用的亞硝酸鹽的測定方法有分光光度法和離子色譜法[3]。離子色譜法測定亞硝酸鹽不需要衍生，因此常做為亞硝酸鹽測定的首選方法[4-6]。但采用離子色譜-電導(dǎo)檢測器法測定亞硝酸鹽時，由于口服補(bǔ)液鹽散中氯離子含量較高，會嚴(yán)重干擾和氯離子保留時間靠得很近的亞硝酸根離子的測定。經(jīng)過多次預(yù)試驗發(fā)現(xiàn)采用脫氯的前處理方法會造成痕量亞硝酸根的回收率偏低，本文擬采用分光光法來測定口服補(bǔ)液鹽散中的亞硝酸根，并進(jìn)行了相關(guān)方法學(xué)驗證。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

儀器：Cary50紫外可見分光光度計，美國瓦里安；KQ-400KDE超聲器，昆山市超聲儀器有限公司。

試劑：對氨基苯磺酰胺(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；鹽酸N-(1-萘)-乙烯二胺(分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；1000 mg/L水中亞硝酸根標(biāo)準(zhǔn)品(北京壇墨質(zhì)檢科技有限公司)；純水(實驗室自制)；口服補(bǔ)液鹽散(II)由某制藥公司提供。

1.2 儀器條件

檢測波長540 nm；石英玻璃皿：3 cm。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

1.3.1 對氨基苯磺酰胺溶液(10 g/L)

稱取5g對氨基苯磺酰胺，溶于350 mL鹽酸溶液(1+6)中，用水稀釋至500 mL。

1.3.2 鹽酸N-(1-萘)-乙烯二胺溶液(1.0 g/L)

稱取0.5 g鹽酸N-(1-萘)-乙烯二胺溶于500 mL水中，儲存于棕色瓶中。

1.3.4 NO2-標(biāo)準(zhǔn)工作溶液配制(0.33 mg/L)

1.3.5 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的配制

1.3.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

1.4 供試品溶液的制備

精密稱取2.0 g口服補(bǔ)液鹽散(III)至250 mL容量瓶中，用純水溶解并稀釋至刻度，搖勻后，準(zhǔn)確移取50 mL至50 mL比色管中，然后，加入1 mL對氨基苯磺酰胺溶液(10 g/L)，搖勻后放置5 min，加入1.0 mL鹽酸N-(1-萘)-乙烯二胺溶液(1.0 g/L)，立即混勻，20 min后，于波長540 nm處，用3 cm比色皿，測定吸光度。

1.5 定量方法

口服補(bǔ)液鹽散(II)中的亞硝酸根含量結(jié)果，采用外標(biāo)法定量。計算公式如下： X =5 m1/m(其中，X-樣品中亞硝酸根(NO2-)的含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；m1-從校準(zhǔn)曲線上查得的試管中亞硝酸根(NO2-)的質(zhì)量，單位為微克(μg)；m-樣品的稱取量，單位為克(g)；5-稀釋倍數(shù)。)

2 結(jié)果與分析

2.1 線性關(guān)系

圖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

表1 標(biāo)準(zhǔn)系列溶液的吸光度

2.2 檢測限和定量限

以添加標(biāo)準(zhǔn)工作溶液為0 mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液為空白溶液，依法經(jīng)過重氮偶合應(yīng)后，連續(xù)測定21次。按照LOD = 3.3 δ/S、LOQ =10 δ/S公式計算檢測限和定量限。式中LOD：檢測限；LOQ：定量限；δ：響應(yīng)值的偏差； S：標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。21次空白測定的吸光度響應(yīng)值的偏差δ為0.000131，標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率S為0.0666，因此LOD=3.3 δ/S=0.006491 μg，LOQ=10 δ/S=0.01967 μg。稱樣量為2.0 g，定容體積為250 mL時，每50 mL溶液中含樣品0.40 g，因此折算到樣品中，方法的檢測限為0.0162 mg/kg，定量限為0.0492 mg/kg。

2.3 重復(fù)性試驗

表2 重復(fù)性實驗結(jié)果 mg/kg

2.4 回收率試驗

回收率實驗同重復(fù)性實驗。以重復(fù)性實驗的數(shù)據(jù)結(jié)果來計算回收率。結(jié)果見表3，回收率在97.12%～100.40%，平均回收率為99.06%。

表3 回收率試驗數(shù)據(jù)

2.5 穩(wěn)定性試驗

表4 穩(wěn)定性試驗結(jié)果

由表4數(shù)據(jù)可知，2h內(nèi)測定方法結(jié)果的RSD=1.83%，因此，供試品溶液2h內(nèi)放置穩(wěn)定，溶液穩(wěn)定性良好。

2.6 耐用性試驗

分別改變分光光度計的檢測波長為538 nm及542 nm，并按重復(fù)性試驗的方法配制樣品溶液，按照改變后的條件，進(jìn)行樣品溶液的測試，每個條件進(jìn)行三次平行測定，并與重復(fù)性試驗結(jié)果進(jìn)行比較，結(jié)果見表5。改變波長后的6次測定與重復(fù)性實驗數(shù)據(jù)的RSD=1.15%，耐用性試驗結(jié)果良好。

表5 耐用性試驗結(jié)果

3 結(jié)論

采用分光光度法測定口服補(bǔ)液鹽散中的亞硝酸根含量，方法的線性、檢出限、重復(fù)性、回收率等均得到了滿意的結(jié)果，方法簡單易操作，可以為口服補(bǔ)液鹽散中亞硝酸根含量的檢測提供一種參考方法。