慢性淋巴細胞白血病免疫表型及預后研究進展

曾雪嬌，龐楠楠，張瑞，謝仁古麗·阿里木，馬佳佳，趙宇，曲建華通訊作者)

(新疆醫科大學第一附屬醫院 血液科，新疆 烏魯木齊)

0 引言

慢性淋巴細胞白血病(chronic lymphocytic leukemia， CLL)是一種惡性程度低的異質性淋巴細胞疾病，以外周血及骨髓中與成熟的淋巴細胞相近的淋巴細胞增多為主要表現。具有獨特的細胞形態、免疫表型、細胞遺傳學及分子生物學特點。慢性淋巴細胞的精確診斷無論是對于治療方案選擇、預后評價及發病機制研究均有相當重要的意義。隨著流式細胞技術的快速發展，分析慢性淋巴細胞表面抗原的表達，進而判斷慢性淋巴細胞白血病的診斷，分級，預后與微小殘留有重要意義。免疫表型已成為診斷血液病的重要檢測手段。現對慢性淋巴細胞白血病免疫分型研究進展做一說明。

1 慢性淋巴細胞白血病的診斷

慢性淋巴細胞白血病是一種成熟B 淋巴細胞克隆增殖性腫瘤，以淋巴細胞在外周血、骨髓、脾臟和淋巴結等聚集為特征。主要發生于老年人群，國外文獻報道慢性淋巴細胞白血病中位發病年齡在65～70 歲，國內李增軍等人研究報道，中國的慢性淋巴細胞白血病發病中位年齡60 歲。其診斷要求符合以下3 條[1]：①外周血B 淋巴細胞≥5×109/L，淋巴細胞比例≥50%；②形態為小的成熟B 細胞為主，也可見幼稚淋巴細胞，但比例≤55%；③典型的免疫表型：CD5、CD19、CD79a、CD23、CD43 陽性，sIgM 或IgM和IgD 弱陽性，呈現單克隆κ 或λ，CD20、CD22、CD11c 弱陽性，CD10、FMC7、CyclinD1 陰性。慢性淋巴細胞白血病國際預后指數(CLL/IPI)的積分為4-5 分，其他B-CLPD 為0-2 分。

2 慢淋免疫表型研究進展

慢淋細胞上的抗原是細胞在分化為各種譜系、各種階段及細胞活化過程中基因表達的產物，有序的出現或缺失在細胞表面。運用流式細胞術(FCM)與單克隆抗體結合檢測慢性淋巴細胞白血病的細胞表面上的免疫標志， 從客觀上明確細胞的來源及分型，進一步運用細胞分類定量分析，為臨床判斷慢性淋巴細胞白血病的預后、細胞的移植成功率以及存活率都提供了非常重要的參照性數據， 指導臨床診療[2]。下面本文將從診斷價值，預后價值，新近發現這三個方面分類敘述慢性淋巴細胞白血病的相關免疫表型。

2.1 有診斷意義的免疫分型

2.1.1 CD79a

CD79 a 是B 淋巴細胞的功能蛋白之一，是B 淋巴細胞抗原受體的組成，對B 淋巴細胞有極大的特異性，表達于B 淋巴細胞分化的原始階段直到B 細胞分化成熟的漿細胞階段。但在慢性淋巴細胞白血病的表達率較低，CD79a 在絕大多數急性淋巴細胞白血病中表達陽性，可作為這兩種疾病鑒別標志。具體機制有待進一步研究。

2.1.2 CD5

作為T 細胞抗原之一的CD5 抗原，被認為在慢淋中與B 細胞進入激活狀態有關。需要注意的是，CD5 陰性但CD19 和 CD20 陽性的病人，在進行免疫分型診斷時應十分謹慎，即使沒有CD5 免疫表型的可疑病例，表達時并不能輕易否認慢淋的診斷。Indmdar[3]等 發現7%～20% 的CLL 患者缺乏CD5 的 表達，Efstathiou S[4]等認為CD5 陰性的病人病變程度較輕，預后較CD5陽性的病人好。Folke S 提出cD19/cD20/cD5 可成為慢性淋巴細胞白血病的確診依據。而K. V[5]發現7%-20% 的慢淋患者都缺乏CD5 的表達。以上都為CD5 在慢淋的診斷中的重要地位提供依據。

2.1.3 CDl9

CD19 大多分布于除漿細胞外的B 細胞發育的每個時段，是B細胞的重要標志，與B 細胞的分化、活化、增殖和抗體產生有關[6]。CD19 分布于除效應B 細胞以外的B 細胞發育的各個時期，具促進B 細胞激活的作用。CLL 的細胞抗原存在一定的異質性。目前越來越多的研究者提出CD5 和CDl9 雙陽性的B 細胞群很有可能就是慢淋的細胞群[7-8]。

2.1.4 CD22

CD22 是淋巴細胞表面特定的糖蛋白，屬于免疫球蛋白超家族。它表達于細胞質中幾乎全部的B 細胞，并促進了B 細胞的分化。CD22 作為一種黏附分子及信號傳遞因子，在下調B 淋巴細胞活化閾值中發揮作用。Cesano 等人[9]研究表明，CD22 有診斷和治療白血病及淋巴瘤的潛在用途。

2.1.5 CD20

表達于所有B 細胞的表面的CD20 分子，是B 細胞的標志性的抗原，是區別B 細胞的免疫表型，其作用也與B 細胞的活化和增殖分化過程密切相關。FMC-7 在大部分慢淋細胞中并不表達，但在其他的B 細胞相關增殖性疾病中則異常表達，或可成為慢淋與其他B 淋巴增殖性疾病的鑒別依據，而且多數資料顯示FMC-7和CD20 往往同時表達[10]。

2.1.6 CD10

以往認為CD10 是急性淋巴細胞白血病的相同抗原，在淋巴細胞進行分化中，它表達在前B 細胞及生發中心的B 細胞上，而有數據表明，前B-CLL 表達CD10 大概在75% 左右[11]。正常人的外周血大多數是T 淋巴細胞，正常不表達CD10 抗原。所以可以通過對于CD10 的檢測，來對反應性的增生及B 細胞性的慢淋進行鑒別診斷。

本文針對絕熱加速量熱儀在測試樣品反應過程中存在熱電偶動態特性和爐體加熱系統動態響應滯后等問題,提出了一種對其進行動態補償的方法,通過仿真進行了絕熱反應過程中影響因素分析,并利用PSO算法搜索優化出動態補償器參數,最后,通過標準樣品實驗對該方法進行了驗證,實驗補償效果與仿真結果相吻合,表明對絕熱加速量熱儀中的熱電偶動態特性和爐體加熱系統動態響應進行補償能有效提高絕熱性能,減小在動力學參數求取過程中所產生的誤差,研究成果對化學反應機理研究和化學品熱安全評估具體重要意義。

2.2 有預后價值的免疫分型

2.2.1 CD38

CD38 是白細胞活化相關抗原，多數表達于活化T 細胞、漿細胞、前B 細胞、單核細胞、胸腺細胞、造血干/祖細胞等細胞中，而成熟的循環細胞缺少或低表達CD38。CD38 與白血病及其疾病的預后息息相關。Ibrahim 等人的研究表明[12]，43%的慢淋患者中，CD38 表達為陽性，但是其表達與預后的關系目前仍不十分顯著。Thunberg 等人的研究[13]顯示CD38 的表達與預后不相關；Damle NR 等認為CD38 陽性是一個預后不良的標志。KroberA 等學者的研究[14]則提出，運用CD38 表達與否來進行分組，分析預后或無法獲得明確的結果。且有相關研究表明，慢淋細胞上CD38 可隨著疾病的進展發生變化[15]。筆者推測，CD38 可能在慢淋中不是獨立的預后指標。

2.2.2 CD23

CD23 是B 淋巴細胞激活后，獲得的細胞表面標志。CLL 病人CD23 的表達和疾病發展及生存期減低有關。[16]在非疾病狀態下的淋巴細胞中，CD23 的表達較低，而在慢淋活化的B 細胞中，CD23 的表達則異常增高。相關研究表明，慢淋患者CD23 陰性提示預后不良。[17]推測CD23 可用以明確慢淋白血病患者的又一重要預后指標。

2.2.3 CD13

CD13 可在B 淋巴細胞增殖性疾病中表達，多數提示預后不良。Nakase k[18]等人研究說明了抗原CDl3，CDl4，CD33 可在B細胞相關增殖性疾病中表達。推測CDl3，CDl4，CD33 等髓系抗原與B-CLL 的發生相關。

2.3 新發現的相關免疫分型

2.3.1 CD200

CD200 是一種糖蛋白，有免疫抑制的作用。在多種腫瘤細胞中均過表達。其中，在急性髓系白血病，多發性骨髓瘤及慢性淋巴細胞白血病中均有CD200 的過表達。Dorfman[19]等采用免疫組化的方法分析了10 例MCL 患者，他們的CD200 表達均呈陰性。CD200 的缺失不僅見于MCL，也可見于其他成熟B 淋巴細胞增殖性疾病。[20]Palumbo[21]等報道，CD200 在79 例CLL 患者中高表達，而在14 例MCL 患者中，11 例患者CD200 表達為陰性，另3 例患者CD200 陽性細胞計數小于20% 且為低表達；而在其他類型的B-CLPD 患者中( 如FL、MZL) 也呈現低表達。可見CD200 可能取代CD23 作為診斷慢性淋巴細胞白血病的又一重要且更具有標記性的免疫標記。

2.3.2 CD148

CDl48 是一種受體型蛋白酪氨酸磷酸酶( protein tyrosine phosphatase)，也稱DEP-1，在中性粒細胞，巨噬細胞、淋巴細胞及成纖維細胞有較強的表達。可以調節細胞周期，抑制細胞生長。 特別對淋巴細胞及腫瘤細胞。 Miquet[22-23]等人報道， MCL患者 CDl48 表達強度明顯高于 CLL、小淋巴細胞淋巴瘤( SLL)患者，并提出中等或者強表達 CDl48 可以排除 CLL，支持 MCL確診。在王曼等人的研究中， B- PLL 的 CDl48 以及 CD200 的表達差異與 MCL 存在相似之處，7 例患者 CDl48 均陽性，中位 熒 光 強 度( MFI)376.3(108.3～1132.0)， CD200 僅4 例 陽 性， MFI17.8(11～141.6)。提示CD148 可成為診斷慢性淋巴細胞白血病的新的免疫標記進一步研究。

2.3.3 CD160

CDl60[24-25]是一種免疫球蛋白樣活化NK 細胞受體，主要表達在NK 細胞和細胞毒性T 細胞亞群，而正常B 淋巴細胞和EBV 轉化的B 淋巴細胞系并不表達。新近有研究發現[26]，CDl60 與CLL發病密切相關。少量臨床研究顯示，CDl60 在CLL 中高表達。

2.3.4 CD86

CD86 是一種屬于B-7 家族的免疫球蛋白樣單體，多表達于樹突狀細胞、活化B 淋巴細胞及活化T 淋巴細胞表面。在CLL細胞與免疫細胞( 如CD86) 之間起著重要的通訊作用，從而為CLL 細胞提供免疫逃逸機制的條件，介導CLL 的發病。Ferenc Takács[27]等人的研究表明，CD86 表達較高的 CLL 細胞具有更高的增殖率，同時 CD86 和 CD23 表達之間呈正相關(P＜0.05)，兩者相關性可能來源于 LI-4 的分泌。相關臨床資料分析表明，CD86 高表達的患者血清淋巴細胞計數較低(P＜0.04)。這可能說明CD86 分子通過激活和消耗免疫系統來干擾CLL 患者的免疫系統。同時提示CD86 陽性可能是慢淋預后不良的提示。

2.3.5 CD56

CD56 是的T 淋巴細胞上一類抗原，可在T 淋巴細胞病理性增殖性疾病中表達。CD56 的異常高表達與CLL 細胞的增殖率正相關，可能與無病生存期與總體生存期的減低有相關性，今后可能成為CLL 預后不良的提示[28]。

2.3.6 CD34

CD34 是表達于造血干/祖細胞表面的跨膜糖蛋白。CD34 作為往往作為遞質參與淋巴細胞歸巢及初期的淋巴細胞再循環，以此補充外周T，B 淋巴細胞。研究人員[29]運用FISH 方法比較了60 例慢淋患者與對照組B 細胞分化初期的CD34+細胞數量。兩者雖無明顯差異，但法宣慢淋患者CD34+細胞中的染色體畸變的概率比CD19+細胞更高，將CD34 表達水平作為慢淋預后參考或可成為指導慢淋治療及預后評估的新思路。

2.3.7 CD45

CD45 在所有白細胞上都有表達，稱為白細胞共同抗原，廣泛存在于白細胞表面，是細胞膜信號轉導的關鍵分子，對于淋巴細胞的成熟與信號傳導中有關鍵意義，有報道提示在CLL 患者T 細胞上CD45 的表達水平明顯高于對照組，今后CD45 或可成為判斷慢性淋巴細胞白血病病人的預后指標。

3 總結與展望

慢性淋巴細胞白血病的免疫表型特點是診斷與預后評價的重要指標，但其結果依舊需要借助生物遺傳學與分子學，病理學等共同分析。慢性淋巴細胞白血病的免疫表型為慢淋的確診、鑒別、診療、預后評價、治療后微小殘存病灶的研究提供一定依據。對于慢淋預后的研究有待進一步認識，相信未來會有更加完善精準的臨床預后指標體系的建立。