三葉青研究和生產現狀及發展對策

李 者 ，周昌和，杜向標，劉守贊，白 巖，蔣玲苔，王嘉一，潘潔渝，樓瑩瑩，鄭炳松

（1.浙江農林大學，省部共建亞熱帶森林培育國家重點實驗室，浙江 杭州 311300；2.浙江農林大學 林業與生物技術學院，浙江 杭州 3 113003；3.龍泉市林業局，浙江 龍泉 323700；4.龍泉市城區林業工作站，浙江 龍泉 323700；5.浙江農林大學植物園，浙江 杭州 311300）

中藥三葉青，學名三葉崖爬藤Tetrastigma hemsleyanum，為葡萄科Vitaceae 崖爬藤屬Tetrastigma藤本植物，全株均具有藥用價值[1]，多以塊根入藥，味微苦，性平，具有清熱解毒、消腫止痛、化痰散結的功效，可用于小兒高熱驚風、百日咳、瘡癰痰核和毒蛇咬傷[2]。清代《植物名實圖考》中記載“石附子（即三葉青）俚醫以治小兒，退熱、止腹痛，取漿沖服”[3]；《浙江民間常用草藥》記載“清涼解毒、祛風化痰功效，可治小兒風熱，驚風、疝氣痛、咳嗽、發燒及口腔炎等；治蛇咬傷”[4]；《全國中草藥匯編》中記載三葉青可治療小兒發熱驚厥、毒蛇咬傷、肺炎、肝炎[5]。

近年來，有研究表明，三葉青具有抗腫瘤的藥效，引起了人們的極大關注，產業發展迅速，并于2018 年，與鐵皮石斛Dendrobium officinale，靈芝Ganoderma Lucidum，番紅花（中藥名西紅花）Crocus sativus等并稱為“新浙八味”[6]。與此同時，暴露出了三葉青野生資源稀缺、人工引種種植混亂、特征成分不明等問題，亟待解決。為了三葉青產業能健康快速地發展，本文采用整合文獻、分析網絡數據和實地考察等方法，對三葉青自2009-2019 年底近十年的研究和發展現狀進行整理并歸納總結，提出解決方案，以期為三葉青產業的提升提供借鑒。

1 三葉青研究進展

1.1 三葉青藥用價值

研究表明，三葉青的主要有效成分為黃酮類、三萜類、甾體類、酚酸類和脂肪酸類化合物[7]，安全無毒，且副作用小，被稱為“植物抗生素”。近年來，以三葉青中的黃酮、多糖以及未標明成分的提取物為研究對象，發現其可有效抑制肺癌[8-10]、肝癌[11-14]、乳腺癌[15-16]、食管癌[17]、結腸癌[18]細胞的增殖和遷移，如：浙江艾克野生植物有限公司研制出以三葉青塊根為原料，可抑制腫瘤細胞的金絲地甲膠囊[19]，與鱉甲消癥湯聯合，一個療程后瘤體穩定緩解率可達到66.7%[20]。三葉青用于白血病治療也有較好的效果[21-22]；還可用于治療病毒性腦膜炎等疾病[23]。

目前，盡管在三葉青中發現了多種不同種類的化合物，但是，研究者們認為，其抗炎、退熱等起效快的有效成分卻沒有明確對應；三葉青抗腫瘤效果良好，但研究多數使用其提取物，具體指標性成分和藥物起效及代謝等過程有待進一步探究。這些問題未解決，在一定程度上阻礙了其進入《中華人民共和國藥典》，進而影響了產業進程。

1.2 三葉青栽培技術

三葉青為陰生于山谷的瀕危藥用植物，故而對其人工栽培技術的研究對三葉青產業的發展至關重要。其中，以對影響三葉青生長的光照條件的研究較多，結果表明，采用光照強度調控（遮蔭70%左右）[24-26]、光質調控（紅藍光質）[27-29]、光周期調節（光照12 h·d-1）[30-31]等措施，均有利于三葉青的生長以及代謝產物的積累。在三葉青生長過程中，所施用的肥料種類對其生長也至關重要。研究表明，施用不高于0.5 g·kg-1的氮肥有利于三葉青的生長[32]，以硝態氮（NO3--N）形式施用對黃酮積累更有益[33]。

1.3 三葉青組培技術

三葉青組織培養技術日臻成熟[34]。誘導愈傷組織產生和進行繼代培養的最佳條件為，培養基采用MS、30 g·L-1蔗糖、2.0 mg·L-16-BA 和0.2 mg·L-1NAA 混合配方，光源為日光燈，培養溫度為28℃。如果配合采用9∶1 或7∶3 紅藍混合光源，可提高三葉青干物質的含量。向倩倩等[35]利用農桿菌C58C1 菌株建立起三葉青毛狀根培養體系，得出毛狀根中的黃酮含量為2年生三葉青塊根中黃酮含量的1/5。

圖1 2009-2019 年三葉青文獻類型和數量Figure 1 Literatures on T.hemsleyanumfrom 2009 to 2019

對三葉青的科學研究為產業發展提供了一定的理論基礎，但目前關于三葉青的理論研究還不夠全面，如圖1 可見，對三葉青的研究多集中在藥理、藥化和生理方面的研究，對分子生物學相關研究僅以“三葉崖爬藤”之名發表于植物相關期刊[36]，而對其藥學方面的研究相關期刊涉及較少。研究方向較為單一且淺顯，難以為產業的多層次、多方位發展提供有力依據。

2 三葉青產業發展現狀及存在的問題

2.1 產品種類日漸豐富、產業發展宜進一步加快速度

對三葉青的研究起步較晚，因此，其至今未被收錄進《中華人民共和國藥典》，無法生產以其為主要成分的藥品，這是制約其產業發展的關鍵問題。目前，僅在《浙江省中藥材炮制規范》[2]中對三葉青進行了描述，其原藥材僅進入浙江省醫保，存在發展的地域差異。同時，三葉青不在衛生部《既是食品又是藥品的物品名單》和《可用于保健食品的物品名單》中，因而限制了與之相關的保健品的生產，致使其相關保健品種類少之又少。令人欣慰的是，近年來，以三葉青為主要原料的金絲地甲膠囊、金芪片和中肝合劑等保健品，對于提升癌癥術后患者的生存率和改善生活質量效果顯著[20]，并且逐漸在市場中占領了一席之地；目前，已有多家生物醫藥公司根據《浙江省中藥材炮制規范》生產三葉青凍干粉，用于退熱、抗菌、消炎，活性高、起效快。不僅如此，以三葉青提取物為主要原料的化妝品也陸續問世，如三葉青凝膠、洗手液和三葉青牙膏等，慢慢被民眾所熟知。

圖2 “新浙八味”論文量Figure 2 Papers on “New Zhebawei” in some academic websites

2.2 野生資源稀缺、引種和種植較為混亂

由于三葉青的藥用效果良好，腫瘤抑制作用顯著，因此，需求量不斷增加，野生資源被過度采挖，現已成為一種瀕危的藥用植物。2011 年，浙江三葉青栽培品種被列入“浙江省首批農作物種質資源保護名錄”。由于浙江三葉青生長周期長，野生資源恢復慢，給后續研究造成了一定的困難，也在一定程度上阻礙了三葉青產業的發展。

目前，浙江、江西、福建等地區開始人工種植三葉青。但是，因為引種混亂，致使市面上的三葉青來源混雜。黃真等[37]發現浙江和廣西產三葉青在形態與水浸液都有不同，導管排列方式也有區別；彭昕等[38]發現云南等地區的三葉青相比浙江產三葉青塊根較大，產量也較高；但浙江產三葉青塊根的價格是云南、廣西等地區的4～ 5 倍。由此可見，產地不同，質量差異較大，評價標準無法統一，為三葉青引種栽培和品質鑒定帶來了困難。

同時，通過對浙江臨安、遂昌、龍泉、黃巖、衢州等多家種植基地進行取樣調查和訪問調查后發現，三葉青人工種植方式也存在諸多問題，多數基地的栽培管理方法不科學。例如，在搭遮蔭棚大田種植中，使用噴灌技術可使棚內保持較高的空氣濕度，但夏季棚內高溫，致使三葉青生長緩慢，高濕則容易發生病害。另外，浙江產三葉青種植年限長，需要3 年以上才可采收，管理成本高，又因為價格相對其他產地高，致使收購困難，很多種植戶的積極性受到打擊，產量和品質無法保證。

2.3 知名度低，民眾接受度不高

三葉青主要產于浙江、湖南、廣西和福建等地區，除這些地區之外，人們并不了解這種中藥。文獻檢索顯示，從1957 年起就有人對三葉青臨床效果進行了研究[39]。但在中國知網、維普網、Web of Since 和Springerlink 等文獻檢索網站進行關鍵詞搜索（圖2）時發現，與“新浙八味”中其他藥材相比，有關三葉青的論文數量相對較少，僅占1.06%～ 2.42%。在“新浙八味”中，三葉青的日搜索量（圖3）僅占總搜索量的4.348%，說明群眾對其接受度較低，影響了三葉青市場的活躍度。

2.4 三葉青產業發展滯緩，給價格帶來沖擊

圖3 “新浙八味”日搜索量Figure 3 Daily search of “New Zhebawei”

圖4 三葉青2014-2019 年統貨價格波動Figure 4 Price of unified T.hemsleyanum during 2014-2019

三葉青產業鏈終端發展滯緩，影響了原藥材的供應價格。由圖4 可知，2014 年和2015 年，三葉青統貨價格平穩在250～ 300 元·kg-1之間。2015 年下半年，除河北安國藥材市場外，在其他三大藥材市場（河南禹州、江西樟樹、安徽亳州）上的三葉青統貨價格呈下降趨勢，2018 年穩定在100 元·kg-1左右。2019 年5 月份后亳州藥材市場、玉林藥材市場和安國藥材市場上的三葉青統貨價格都有小幅度上漲。初步分析其原因是，三葉青產業發展存在明顯的地域限制性，民眾接受度不高；市場銷售途徑較少，市場需求量低；又因三葉青育苗容易，品質評價標準不統一，市場準入門檻低，種植戶連年增多，供求不平衡，致使近年來價格逐漸下降。

3 三葉青研究及產業發展對策

3.1 加強三葉青研究的深度和廣度，為三葉青產品深度研發奠定堅實基礎

Nature公布的科學熱詞排行榜，癌癥于2017 年和2018 年連續兩年位于榜首。三葉青作為具有抑制癌細胞作用的藥用植物，具有很高的研究價值。如圖5 所示，有關三葉青的文獻數量在逐年增加，在2010 年后的9年中，論文數量呈跨越式增加。說明研究人員對三葉青的重視程度不斷提高，也為其投入了大量精力。但是這些研究結果還遠不足以滿足產業發展的需求。因此，應注重三葉青研究的深度和廣度。首先，應加強對三葉青藥理和毒理的研究，明確三葉青提取物的作用機理，為有效成分的研究打下基礎；其次，加強對三葉青特征性有效成分的研究，明確其抗腫瘤、抗病毒和清熱的具體成分；同時，關注對于不同體質的人群可能會產生不同的副作用；最后，加強產品的深度開發，例如提取物的精準產品研發。只有如此，才有可能讓三葉青早日進入《中華人民共和國藥典》，為三葉青市場的健康快速發展提供保障。

3.2 科學種植，精深加工，推進三葉青產業快速發展

三葉青產業發展依靠高質量、統一標準的貨源、完善的供貨渠道以及銷售渠道。要解決目前三葉青種植業中存在的問題，就必須加大野生資源的保護力度，保證種植技術的科學化和規范化。首先，可采取封山育林、建立保護區的方法保護三葉青野生資源；也可通過收集野生三葉青種質資源建立種質資源庫的方式對其野生資源進行保護。其次，提高三葉青的種苗質量，統一標準。目前，三葉青的主要繁殖方式為扦插，但扦插方法普通存在不易結塊根的問題，白巖等[40]研究出了解決三葉青扦插不結塊根問題的方法。洪霞等[41]在三葉青的扦插研究中發現，有無成對葉片是扦插成活的關鍵，且在種植時以控根容器中種植3 株為最佳。最后，仿生種植，提升原藥材質量。林下仿野生種植三葉青是近年來較為流行的方法，不但可以利用竹林、經濟林和果樹的林下空間，還可以減少栽培管理措施，產出的藥材品質也最接近野生三葉青，且產量較高，尤其是吳學謙等[42-43]發明的三葉青袋式栽培法，操作簡單，可在毛竹Phyllostachys edulis林、果樹等經濟林下或光伏板下靈活使用。

以上措施均為平面栽培，是在袋口或盆口或缽口上的單層栽培，其空間利用和土地利用率低，難以在栽種地缺乏的城鎮環境中種植，亦無法兼顧城市的美化和綠化工作。白巖等[44]對三葉青進行了柱式立體種植方式研究，可有效減少占地面積，提升種植效率。同時，亦可充分利用三葉青較高的觀賞價值，作為景觀中的重要耐陰綠植，與多種植物搭配，美化環境，賞心悅目。多層次研發三葉青新產品，增加其附加價值。在當今形勢條件下，三葉青產業發展可以偏向保健品研發和化妝品研發方向。例如，研發類似金絲地甲膠囊和金芪片等具有抗腫瘤、抗病毒和提高免疫力效用的保健品，提高癌癥患者的生活質量，延長壽命。此外，三葉青具有抗炎、抗病毒的作用，可以針對這一特點研發祛痘類的保濕水、乳液，具有消毒作用的洗手液和灌洗劑等化妝品或日化產品。

3.3 科研和產業聯動，增加核心競爭力

圖5 1957-2019 年三葉青論文數量變化Figure 5 Literatures on T.hemsleyanum during 1957-2019

近年來，三葉青產業得到了較大發展，但是目前還屬于比較小眾的藥用植物，不為人們所熟知，這也是阻礙三葉青產業快速發展的一個現實原因。因此，正確把握三葉青入選“新浙八味”這一契機，挖掘三葉青的藥效，加快產品的深度研究，豐富研發產品類型，提升其知名度和民眾接受度，實現彎道超車，以增強其核心競爭力。綜上所述，三葉青產業發展機遇與挑戰并存。在國家和黨中央強調中醫藥工作要“傳承精華、守正創新”的大背景下，三葉青產業迎來了產業發展的春天。本文建議加強科學研究力度，推動產業進程，希望可以為三葉青科研產業鏈的健康發展提供借鑒。