EML4-ALK、VEGF、EphA2在非小細胞肺癌中的表達情況及其臨床病理特征

羅丹，翟志恒，張洪亮*

(1.新疆維吾爾自治區中醫醫院，新疆 烏魯木齊；2.山東省濟寧市精神病防治院神經內科，山東 濟寧)

0 引言

臨床上肺癌的發病率較高，其中NSCLC(非小細胞肺癌)占85%以上，腫瘤發生、發展是多步驟、多基因、多階段的過程[1]。75%NSCLC患者在發現病灶時就已經有局部轉移或遠處轉移。目前，臨床上對于NSCLC患者主要還是采用化療治療，但多期化療又存在不良反應大的問題，且化療療效目前也遇到了瓶頸。所以目前分子生物學快速發展的背景下NSCLC治療的研究方向又轉向靶向治療，這種針對靶基因突變的療法整體療效不錯、毒性小。在EGFR(表皮生長因子受體)研究之后，EML4(棘皮動物微管相關蛋白4)-ALK(間變淋巴瘤激酶)被發現參與了NSCLC蛋白融合，EML4-ALK被證實參與腫瘤發生、發展過程[2-3]。VEGF是腫瘤血管生成的重要刺激因子，具有促進腫瘤血管生成、浸潤、轉移的作用，還與腫瘤生長、轉移關系密切。EphA2在正常人體各種上皮細胞中表達水平較低，在信息傳遞介導中具有關鍵性作用，可調控多種細胞行為。詳細報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年2月至12月期間我院收治的80例NSCLC患者為研究對象，其中男性47例，女性33例；年齡40～86歲，平均(54.8±0.2)歲；腺癌24例、鱗癌22例、肉瘤樣癌18例、大細胞癌16例；腫瘤分期：I期22例、II期20例、III期18例、IV期20例。

1.2 研究方法

選擇病理組織樣本以IHC(免疫組織化學)法測定 EML4-ALK、VEGF、EphA2。 標 本 以 4% 中 性 甲醛液固定，脫水、石蠟包埋，4μm切片，以全自動免疫組織化學染色機染色，以Ventana ALK兔單克隆抗體、OptiView DAB IHC Detection Kit檢測試劑盒及OptiView Amplification Kit增強擴增試劑盒及配套實際檢測EML4-ALK，設置陰性對照、陽性對照。EphA2采用檸檬酸高溫高壓修復，PBS洗2次，3min/次，去除PBS液后滴加一抗(EphA2濃度1/100)，4℃冰箱過夜后測定。VEGF以EDTA高溫修復。

1.3 結果判斷

瘤細胞胞質內可見棕黃色顆粒則為EphA2陽性表達，VEGF以胞膜、胞漿、細胞間質染成黃色、棕黃色或黃褐色為陽性表達。腫瘤細胞質中出現棕黃色顆粒為EML4-ALK陽性表達。

2 結果

(1)腫瘤病理標本中EML4-ALK陽性表達26例(32.50%)。包括腺癌12例、鱗癌5例、肉瘤樣癌4例、大細胞癌5例，III期13例、IV期7例、I期3例、II期3例。EML4-ALK陽性表達與患者年齡、性別、腫瘤分化程度、腫瘤大小、淋巴結轉移等情況無明顯相關性。EML4-ALK陽性表達中腺癌比例達到46.15%(12/26)，明顯高于鱗癌、肉瘤樣癌等腫瘤類型，同時III期、IV期比例76.92%(20/26)明顯高于I期與II期，差異顯著，所以說EML4-ALK陽性表達與腫瘤類型、腫瘤分期密切相關。(2)腫瘤病理標本中EphA2陽性表達40例(50.00%)，包括腺癌18例、鱗癌17例、其他5例。III期14例、IV期18例、I期5例、II期3例。EphA2陽性表達中IV期、III期比例達到了80.00%(32/40)，明顯高于I期、II期比例，所以說EphA2陽性表達與腫瘤臨床分期呈正相關性。(3)腫瘤病理標本中VEGF陽性表達49例(61.25%)。其中陽性表達的49例患者中包括腺癌19例、鱗癌18例、其他12例。III期17例、IV期20例、I期2例、II期10例。VEGF陽性表達中III期、IV期比例達到75.51%(37/49)，明顯高于I期、II期，差異明顯，所以說VEGF陽性表達與臨床分期呈正相關性。

3 討論

ALK是酪氨酸激酶受體的一種，與白細胞酪氨酸激酶同源，都隸屬于胰島素受體超家族，在胚胎期神經系統結構、功能發展中具有重要作用，胎兒出生后ALK表達減少，腦部、睪丸、小腸等組織還存在特定mRNA表達，而健康的肺、肝臟、淋巴細胞中均無表達[4-7]。21世紀人們才發現肺腺癌的病灶中EML4-ALK融合所致的致瘤性基因突變，且EML4-ALK融合蛋白陽性NSCLC細胞株經siRNA基因被敲除沉默后抑制其生長，說明EML4-ALK融合蛋白存在致癌效用[8-10]。EML4與ALK融合后ALK胞內酪氨酸激酶區活化，導致細胞增殖、癌變。IHC、FISH(原位雜交)、RT-PCR(逆轉錄聚合酶鏈反應)是檢測EML4-ALK融合蛋白的主要方法，其中RTPCR對RNA品質要求高，其引物難以設計，所以實際開展起來很困難。FISH法是檢測肺癌EML4-ALK融合蛋白的金標準，但其需要計算50個以上腫瘤細胞，這對難以獲取足量的組織的晚期肺癌、穿刺困難患者來說不切實際。通過IHC法測定EML4-ALK快速、高效，是常規病理實驗室的主要檢測手段[11]。吸煙、遺傳、環境、職業暴露等都是肺癌高危因素，其中吸煙是其最主要影響因素，但近些年的數據也表明不吸煙的肺癌患者在增多。也有研究報道NSCLC細胞核中雌激素ɑ受體表達，且與腺癌、女性等相關[12]。EML4-ALK融合蛋白還與腫瘤大小相關，其陽性表達是粘液性腺癌的高危因素。本組80例肺癌患者中EML4-ALK陽性表達率達到32.50%。

EphA2是存在酪氨酸激酶活性的一個基因，在腫瘤組織中表達而使其向惡性發展，在膀胱癌、結腸癌、乳腺癌及肺癌中均高表達，且腫瘤惡性程度越高、病理分期越高其表達水平越高[13]。本組研究結果中EphA2陽性表達率達到50.00%。VEGF是血管生成因子在NSCLC中的高表達情況早已被證實，且與腫瘤組織學類型、分化程度無明顯關系，而與臨床分期、淋巴結轉移關系密切[14-15]。未形成相關血管供養的腫瘤細胞處于休眠狀態，但是一旦腫瘤組織亞型細胞轉化為促血管生成表型，腫瘤組織便開始生成血管。新生血管生長后腫瘤細胞快速增殖，且增值率遠超凋亡率，腫瘤便進入快速發展階段，并出現轉移、浸潤。所以說腫瘤的生長依賴于生成的血管來提供營養物質，VEGF則是調控腫瘤血管生成的重要因子，且是其正向調節因子，與腫瘤侵襲及轉移都關系密切。本組中VEGF陽性表達率61.25%。

綜上所述，在NSCLC中EML4-ALK、VEGF、EphA2均具有極高的陽性表達率，其異常表達與腫瘤分型、分期、淋巴結轉移等關系密切，可作為NSCLC病情診斷、預后評估的參考指標，也可為靶向治療提供一定依據。