結(jié)直腸癌干細胞化療耐藥的研究進展△

竇曉鑫，孔憲斌，王方園，彭瑩瑩，孟靜巖

天津中醫(yī)藥大學(xué)1研究生院，2中醫(yī)學(xué)院，天津301617

結(jié)直腸癌（colorectal cancer，CRC），包括結(jié)腸癌、直腸癌及大腸癌，是世界上最致命的癌癥之一，預(yù)計至2030年其發(fā)病人數(shù)將近220萬，死亡人數(shù)也將近110萬[1-3]。CRC也是下消化道最常見的惡性腫瘤，其腫瘤細胞群在遺傳、表觀遺傳和表型上具有明顯的異質(zhì)性[4]。盡管在疾病診斷和手術(shù)、化療等治療方面取得了快速發(fā)展，但其預(yù)后仍然很差[5]。癌癥的復(fù)發(fā)和化療耐藥是其預(yù)后差的主要原因之一[6]。抑制細胞凋亡、藥物靶向改變、腫瘤細胞異質(zhì)性和腫瘤干細胞（cancer stem cell，CSC）等因素都會導(dǎo)致化療耐藥，而化療耐藥的關(guān)鍵因素是CSC的存在[7]。CSC也被稱為腫瘤起始細胞（tumor initiation cell，TIC），是一類能夠自我更新、多系分化、克隆、腫瘤起始、維持腫瘤特性和轉(zhuǎn)移增殖的特殊細胞群體，約占腫瘤細胞總數(shù)的5%，并與許多非CSC特征相同[8-10]。人們已經(jīng)在乳腺癌、CRC、胰腺癌、肺癌、前列腺癌和腦癌中識別出來CSC[11]。結(jié)直腸癌干細胞（colorectal cancer stem cell，CRCSC）導(dǎo)致化療耐藥發(fā)生的機制多種多樣[12]，包括調(diào)控相關(guān)蛋白、相關(guān)因子、信號通路、表觀遺傳調(diào)控、上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化等。而因其天然藥物提取物有較好的抗癌作用和相關(guān)抑制劑能有效清除CSC，均已被廣泛研究[13]，但其作用機制仍不完全清楚。因此，綜述CRCSC化療耐藥的作用機制和相關(guān)藥物的逆轉(zhuǎn)化療耐藥，將有利于更系統(tǒng)地了解現(xiàn)在的研究狀況，也有利于尋找更有價值的臨床治療靶點[14]。

1 蛋白

1.1 細胞外基質(zhì)蛋白

雙聚糖（biglycan，BGN）是一種經(jīng)典的細胞外基質(zhì)蛋白，在調(diào)節(jié)上皮細胞的形態(tài)、生長、遷移和分化方面發(fā)揮重要作用，是CRCSC的表面抗原之一，具有高表達的特征。用5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）處理不同BGN表達狀態(tài)的HT29和SW480細胞發(fā)現(xiàn)，敲除BGN基因增強了5-FU對HT29細胞的抑制作用，而BGN過表達則減少了5-FU對HT29細胞的抑制作用；5-FU的干預(yù)降低了HT29和SW480細胞系的集落形成率；敲除BGN基因后，HT29細胞的集落形成率進一步下降，而BGN過表達則提高了SW480細胞的集落形成率。進一步研究表明BGN導(dǎo)致CRC多藥耐藥是通過激活核因子κB（nuclear factor-κB，NF-κB）通路，而在轉(zhuǎn)染NC載體的HT29和SW480細胞中進一步證實了抑制NF-κB通路后能誘導(dǎo)細胞凋亡[15]。

1.2 RNA結(jié)合蛋白

RNA結(jié)合蛋白Musashi-1是結(jié)腸干細胞標志物之一，位于細胞質(zhì)中，參與胞內(nèi)核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP）復(fù)合體的形成，其中包含兩個RNA識別基序（RNA recognition motif，RRM），即RRM1和RRM2。應(yīng)激顆粒（stress granule，SG）是一種RNP，能促進細胞抗應(yīng)激活動。Musashi-1過表達的HT29和HCT116細胞較對照組的半數(shù)抑制濃度（50% inhibitory concentration，IC50）增加了 2倍，其耐藥性顯著增強。進一步檢測到5-FU干預(yù)的Musashi-1過表達的HCT116細胞凋亡率明顯低于正常HCT116細胞，因此5-FU可導(dǎo)致CRCSC中Musashi-1陽性SG的形成，這表明Musashi-1通過形成SG導(dǎo)致CRC耐藥[16]。

2 相關(guān)因子

2.1 趨化因子

趨化因子CXC配體2（C-X-C motif chemokine ligand 2，CXCL2）與白細胞介素-8受體β（interleukin-8 receptor β，IL-8RB）的趨化因子受體2（chemokine receptor 2，CXCR2）結(jié)合，偶聯(lián)到 GαI并促進中性粒細胞和內(nèi)皮細胞的趨化，從而促進血管生成、化療耐藥、腫瘤的生長和轉(zhuǎn)化。通過shRNA敲除伊立替康（CPT-11）耐藥（CPT-11-R）LoVo細胞的CXCL2，顯著下調(diào)了CRCSC表面抗原ALDH1、CD24、CD44和EpCAM的表達，對CPT-11的抗性則導(dǎo)致CXCL2、CXCR2的表達增加，因此LoVo細胞對CPT-11的耐藥性增強了CXCL2/CXCR2軸的表達。進一步研究結(jié)果表明了CXCL2-CXCR2軸信號是通過GαI-2和GαQ/11傳遞。這種特殊的配體-受體結(jié)合是通過GαI-2和GαQ/11信號促進CSC特性和化療耐藥細胞株的致癌作用[17]。

2.2 抑制因子

腫瘤抑制因子p53能夠維持細胞基因組的完整性，是腫瘤細胞中突變最頻繁的基因。p53發(fā)生突變時，腫瘤抑制功能喪失，激活了致癌功能如化療耐藥，這一現(xiàn)象被稱為突變型p53功能獲得（gain of function，GOF）。GOF能促進細胞獲得CSC特征，而CSC通過激活其標志物乙醛脫氫酶（aldehyde dehydrogenase，ALDH）導(dǎo)致耐藥發(fā)生。用順鉑處理已具有不同p53狀態(tài)的SW480細胞系，發(fā)現(xiàn)突變型p53表達細胞中的乙醛脫氫酶1A1（aldehyde dehydrogenase 1A1，ALDH1A1）和乙醛脫氫酶 1A3（aldehyde dehydrogenase 1A3，ALDH1A3）表達水平均高于突變型p53缺陷細胞，ALDH1A1過表達顯著抑制SW480細胞的凋亡，表明ALDH1A1參與了突變型p53介導(dǎo)的SW480細胞的化療耐藥[18]。

3 信號通路

3.1 PI 3K/AKT

磷脂酰肌醇3-激酶催化亞基α（phosphatidylinositol-4，5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha，PIK3CA）是CRC中最常見的突變基因之一，也是磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K）/蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，也稱AKT）信號通路的關(guān)鍵激酶之一。從臨床收集的CRC病例中，PIK3CA基因的突變率為9.55%（42/440）。將CC-1細胞移植到裸鼠體內(nèi)，同時用FOLFOX培養(yǎng)基[25μmol/L 5-FU和0.625μmol/L奧沙利鉑（OXA）]加或不加PI3K/AKT抑制劑進行干預(yù)，單用FOLFOX表現(xiàn)出顯著的化療耐藥性，而FOLFOX與PI3K/AKT抑制劑聯(lián)合使用時，觀察到明顯的腫瘤生長抑制，提示PIK3CA突變與CRC一線化療耐藥有關(guān)。進一步實驗發(fā)現(xiàn)與野生型腫瘤相比，PIK3CA突變腫瘤組織中pAKT水平升高。同時，PIK3CA突變型腫瘤組織中G蛋白偶聯(lián)受體5（leucine-richrepeat G protein-coupled receptor 5，LGR5）和c-myc的表達水平也比野生型腫瘤高。PIK3CA突變誘導(dǎo)的PI3K/AKT信號通路的激活有利于CRCSC的存活和增殖，并參與了化療耐藥的發(fā)生[19]。

3.2 STAT 3

信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）信號通路的異常激活促使了癌癥的發(fā)生和發(fā)展。在5-FU干預(yù)的HCT116和SW480細胞中miRNA-196b-5p的過表達增加，而miRNA-196b-5p的過表達則降低了腫瘤球體的形成能力和抗細胞凋亡作用；在未用5-FU干預(yù)的細胞中，miRNA-196b-5p過表達減少，其沉默則提高了細胞凋亡率，同時還下調(diào)了抗凋亡蛋白B細胞淋巴瘤/白血病-2（B cell lymphoma/leukemia-2，Bcl-2）和Bcl-xl的表達。此外，單獨沉默或同時敲除負調(diào)控因子細胞因子信號抑制物1（suppressor of cytokine signaling 1，SOCS1）和細胞因子信號抑制物3（suppressor of cytokine signaling 3，SOCS3）可以挽救miRNA-196b-5p對5-FU耐藥的抑制作用。這些結(jié)果表明，沉默miRNA-196b-5p能通過靶向STAT3信號通路的負調(diào)控因子SOCS1和SOCS3抑制CRCSC的特性和化療耐藥[20]。

4 表觀遺傳調(diào)控

4.1 lncRNA

長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA，lncRNA）是一類超過200個核苷酸的非編碼RNA，具有廣泛的生物學(xué)作用。lncRNA-cCSC1（基因符號為MAPKAPK5-AS1）在CRCSC中表達明顯上調(diào)，提示預(yù)后不良。與HT29和HCT116貼壁細胞相比，lncRNA-cCSC1在HT29和HCT116球形細胞中的表達明顯上調(diào)；與CD133-CD44-細胞相比，CD133+CD44+細胞中l(wèi)ncRNA-cCSC1的表達增加。用慢病毒載體將lncRNA-cCSC1 shRNA導(dǎo)入HT29和HCT116細胞，從表達shcCSC1和shCont的細胞中分離出CD133+CD44+細胞，并用5-FU檢測其耐藥性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與陰性對照組相比，shcCSC1表達組細胞凋亡率顯著提高。同時，經(jīng)5-FU處理后，細胞增殖能力下降，其中shcCSC1表達組細胞的增殖能力明顯降低，這些結(jié)果表明敲除lncRNA-cCSC1基因降低了細胞對5-FU的耐藥性[21]。

4.2 miRNA

miRNA是一種短的（20～24個核苷酸）非編碼RNA，通過與靶向mRNA的3'非翻譯區(qū)（3'UTR）結(jié)合，能在轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)基因表達。miRNA-195-5p是CRC細胞干性和耐藥性的調(diào)節(jié)因子，在5-FU耐藥的SW620和HT29細胞中，miRNA-195-5p過表達顯著降低了P糖蛋白（P-glycolprotein，P-gp）和ATP結(jié)合盒轉(zhuǎn)運蛋白G2（ATP-binding cassette protein G2，ABCG2）的表達；當(dāng)細胞用2 μg/ml 5-FU處理時，miRNA-195-5p降低了腫瘤球體形成率，而抗miRNA-195-5p則提高了腫瘤球體形成率。這些結(jié)果證明了miRNA-195-5p能提高5-FU耐藥CRC細胞的化療敏感性。Notch信號蛋白NOTCH2和免疫球蛋白Kappa J區(qū)重組信號結(jié)合蛋白（recombination signal binding protein for immunoglobulin Kappa J region，RBPJ）在3'UTR具有miRNA-195-5p的雙結(jié)合位點。為了進一步研究耐藥機制，有研究建立了3組SW620細胞（miRNA-Control+pcDNA3.1、miRNA-195-5p+pcDNA3.1、miRNA-195-5p+NOTCH2和RBPJ），研究發(fā)現(xiàn)NOTCH2和RBPJ能夠部分或全部下調(diào)miRNA-195-5p對干細胞標志物表達和消除球體形成的抑制作用；同時在5-FU耐藥CRC細胞中，5-FU上調(diào)了NOTCH2和RBPJ的表達，這些結(jié)果表明miRNA-195-5p能通過抑制NOTCH2和RBPJ調(diào)節(jié)CRC的干性和耐藥性[22]。

5 酶

5.1 糖基轉(zhuǎn)移酶

ST6β-半乳糖苷α-2，6-唾液酸轉(zhuǎn)移酶 1（ST6 beta-galactoside alpha-2，6-sialyltransferase 1，ST6GAL1）是糖基轉(zhuǎn)移酶家族的成員，形成細胞表面糖決定簇和分化抗原，其在CSC中的高表達與化療耐藥相關(guān)。從切除的CRC標本中分離出CD133+與CD133-細胞群，通過蛋白質(zhì)印跡法（Western blot）觀察到CD133+群 體表 達的ST6GAL1水平是CD133-群體的12倍。之后用Caco2和SW480細胞株建立了ST6GAL1-和ST6GAL1+細胞模型，在腫瘤球體形成實驗和克隆形成實驗中發(fā)現(xiàn)，與ST6GAL1-細胞相比，ST6GAL1+細胞產(chǎn)生了更多的腫瘤球體和克隆；在用5-FU干預(yù)時，ST6GAL1+細胞在CCK-8試驗中比ST6GAL1-細胞有更好的活性；同時將細胞皮下移植到NOD/SCID小鼠體內(nèi)，在體內(nèi)熒光素酶檢測時發(fā)現(xiàn)，與ST6GAL1-細胞組相比，ST6GAL1+細胞組中小鼠的腫瘤更大。這些證明了ST6GAL1在CRCSC中高表達，并增強了腫瘤細胞對化療的耐受性[23]。

5.2 脫泛素酶

泛素特異性肽酶22（ubiquitin-specific protease 22，USP22）是一種脫泛素酶，與CRC的進展和化療耐藥相關(guān)。WNT/β-catenin信號通路是CSC化療耐藥發(fā)生的主要信號通路之一。在CD133+Caco2和HCT15干細胞中發(fā)現(xiàn)USP22的表達上調(diào)，而USP22的表達下調(diào)顯著抑制了CRCSC的增殖。在5-FU耐藥的Caco2細胞中敲除USP22，并用5-FU干預(yù)，發(fā)現(xiàn)WNT熒光素酶活性和β-catenin的表達沒有上調(diào)；之后上調(diào)β-catenin，發(fā)現(xiàn)敲除USP22基因的5-FU耐藥的Caco2細胞活力完全恢復(fù)。這些證實了USP22通過WNT/β-catenin信號通路維持CRC細胞的干性并導(dǎo)致化療耐藥[24]。

6 缺氧

缺氧是腫瘤微環(huán)境（tumor microenvironment，TME）的一個重要特征，能夠通過缺氧誘導(dǎo)因子（hypoxia-inducible factor，HIF）促進腫瘤細胞干化和化療耐藥發(fā)生，而腫瘤相關(guān)成纖維細胞（cancerassociated fibroblast，CAF）也參與了CRCSC的維持和化療耐藥。將CRC患者的原發(fā)腫瘤分離成單細胞群體，并建立具有干性的腫瘤球體細胞TS和TS來源的貼壁細胞TSA，把TS和TSA細胞移植到免疫缺陷小鼠體內(nèi)，發(fā)現(xiàn)TS比TSA細胞具有更強的啟動腫瘤形成的能力，這證實了TS細胞是含有高度富集的CRCSC。CAF和TS細胞共培養(yǎng)時發(fā)現(xiàn)CAF能促進TS細胞的球形增殖能力。進一步實驗發(fā)現(xiàn)，在缺氧環(huán)境中TS細胞與CAF共培養(yǎng)時對化療的抵抗力顯著增強，這可能與轉(zhuǎn)化生長因子-GLI2的異位過表達有關(guān)[25]。

7 上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化

上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transformation，EMT）在CRC細胞的表觀遺傳改變中起重要作用。在癌癥中，EMT與CSC的自我更新能力、腫瘤異質(zhì)性和化療耐藥有關(guān)。鋅指E盒結(jié)合同源框2（zinc finger E-box binding homeobox 2，ZEB2）與EMT、細胞周期、細胞凋亡和衰老有關(guān)，在CRC細胞侵襲時高表達。用敲除ZEB2基因的HCT116細胞進一步研究發(fā)現(xiàn)，通過消除SCFFBXW7-E3-連接酶活性誘導(dǎo)ZEB2/EMT導(dǎo)致CRC細胞對5-FU和奧沙利鉑化療藥物產(chǎn)生耐藥；用5-FU干預(yù)2～3個月發(fā)現(xiàn)，與親本細胞相比，敲除ZEB2基因的5-FU耐藥細胞的集落形成率降低。這些結(jié)果表明ZEB2誘導(dǎo)的EMT參與了化療耐藥的發(fā)生和CSC特性的維持[26]。

8 活性氧

活性氧（reactive oxygen species，ROS）是細胞膜、線粒體、過氧化物酶體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的NADPH氧化酶（NADPH oxidase，NOX）復(fù)合體通過多種機制產(chǎn)生的高活性、含氧的化學(xué)分子。慢性增加的內(nèi)源性ROS促使細胞轉(zhuǎn)化和腫瘤形成，而化療的細胞毒作用與誘導(dǎo)細胞內(nèi)ROS的生成有關(guān)。在用流式細胞儀檢測細胞內(nèi)ROS含量的實驗中發(fā)現(xiàn)耐阿霉素的CRC細胞LOVO/DX的內(nèi)源性ROS水平顯著低于對照組LOVO細胞，這表明了耐藥細胞和CSC的ROS含量低于藥物敏感的細胞，證實了CSC的化療耐藥與ROS的水平有關(guān)[27]。

9 藥物

9.1 天然藥物

丹酚酸B（salvianolic acid B，SALB）是從丹參中提取的水溶性酚類化合物，能夠提高CRC的臨床治療效果。在裸鼠結(jié)腸CSC異種移植模型中，LOVOCSC+OXA+SALB-低劑量（L）組比LOVOCSC+OXA組腫瘤體積小，且SALB以劑量依賴的方式抑制LOVOCSC移植瘤的腫瘤體積；在HCT116CSC+5-FU+SALB-L組和HCT116CSC+5-FU組中，HCT116CSC+5-FU+SALB-L組的腫瘤體積明顯減小，且SALB以劑量依賴的方式抑制HCT116CSC移植瘤的腫瘤體積。這些實驗結(jié)果證明了SALB能逆轉(zhuǎn)裸鼠結(jié)腸CSC異種移植模型的耐藥性，從而增加腫瘤對5-FU、OXA化療藥物的敏感性，并且SALB以劑量依賴的方式抑制腫瘤生長。在進一步實驗中發(fā)現(xiàn)HCT116CSC+SALB-L組的CD44、性別決定區(qū)Y框蛋白2（sex-determining region Y-box 2，SOX2）和 ABCG2表達水平較HCT116CSC組顯著下降，表明小劑量的SALB可以顯著抑制CRC移植瘤的CD44、SOX2和ABCG2表達，從而逆轉(zhuǎn)其耐藥性[28]。

虎杖提取物（aloysiapolystachya，AP）是一種藥用植物的提取物，已被廣泛用于治療各種疾病。腫瘤的侵襲性、化療耐藥性及細胞死亡與CSC高度相關(guān)。在實驗中發(fā)現(xiàn)與對照組相比，AP降低了HCT116和CT26細胞系的侵襲性，也減少了這兩種細胞系腫瘤球體的數(shù)量；在用5-FU和AP處理HCT116和CT26細胞時發(fā)現(xiàn)，AP顯著增加了兩種細胞對低濃度5-FU的敏感性。這表明AP對CSC的抑制能力可能是逆轉(zhuǎn)5-FU耐藥的機制之一[29]。

9.2 抑制劑

雷戈拉非尼（Regorafenib）是一種經(jīng)過批準的特異性受體多激酶抑制劑，臨床上用于治療轉(zhuǎn)移性CRC。建立耐5-FU的CRC細胞株HCT-116R和DLD-1R，通過實驗證實了HCT-116R和DLD-1R具有較強的形成腫瘤球體的能力，其CSC標志物CD44、β-catenin和Axin-2的表達上調(diào)。用雷戈拉非尼干預(yù)HCT-116R和DLD-1R細胞發(fā)現(xiàn)，雷戈拉非尼濃度達到5 μmol/L時能明顯地抑制HCT-116R和DLD-1R細胞中腫瘤球體的生成，且WNT1、NOTCH1、活化的雷帕霉素靶蛋白（Ser 2448 mechanistic target of rapamycin kinase，p-MTOR）、STAT3、Vimentin的表達降低，Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bcl-2 associated X protein，BAX）的表達升高。而當(dāng)雷戈拉非尼和5-FU聯(lián)合應(yīng)用時，抑制兩種細胞CRC球體生成的作用最為顯著，且ABCG2、β-catenin和WNT1的表達均顯著降低，而BAX的表達顯著升高。這些表明雷戈拉非尼通過調(diào)控CRC中的WNT/β-catenin逆轉(zhuǎn)耐藥和腫瘤細胞表型[30]。

10 小結(jié)與展望

自1994年在白血病中首次發(fā)現(xiàn)CSC以來，這些細胞就被認為是治療癌癥的有前途的靶點[31]。隨后在CRC、乳腺癌、肺癌等實體瘤中也發(fā)現(xiàn)了CSC的存在[32]。而CSC常常在化療過程中不能被完全殺死，對化療藥物產(chǎn)生耐藥性，這是腫瘤復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和患者預(yù)后不良的主要原因[33]。近年來，對CRCSC化療耐藥和致瘤特性的作用機制研究多種多樣，比如通過調(diào)控BGN、Musashi-1、CXCL2、p53、PI3K/AKT信號通 路、lncRNA、miRNA、ST6GAL1、ROS等，而這些機制的研究為早期發(fā)現(xiàn)腫瘤、開發(fā)有效靶向治療、提高患者生存率等方面提供了有效的臨床治療方向[11]。天然植物的提取物如SALB、AP、姜黃素、厚樸酚、葫蘆素等，因其安全性和靶向腫瘤細胞內(nèi)多靶點的優(yōu)勢而受到了極大關(guān)注[34]。有研究證實了相關(guān)酶的抑制劑有助于清除CSC，防止腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)[35]。

然而，要有效地解決CRCSC，還有以下幾個問題。第一，人們普遍認為CSC與胚胎、正常成人干細胞在分子機制上有相似之處，從而限制了靶向治療的潛力，因此需要尋找能區(qū)別出CSC和正常干細胞的標志物[36]。第二，現(xiàn)在的治療方法無法根除CRCSC，是因為給藥方式影響了藥物的靶點識別。有學(xué)者在研究中發(fā)現(xiàn)CXCR4靶向毒素納米粒能夠通過觸發(fā)嗜熱性細胞死亡，有效地殺死來源于CXCR4+結(jié)腸CSC的抗凋亡腫瘤，明顯地提高將有效藥物輸送到靶細胞的效率并減少化療不良反應(yīng)，這為靶向治療CRC提供了新的方向[37]。第三，許多研究發(fā)現(xiàn)天然藥物及其提取物能在常規(guī)化療的基礎(chǔ)上輔助治療CRC，通過調(diào)節(jié)蛋白表達、轉(zhuǎn)錄因子、信號通路等多靶點特異性地針對CRCSC，促使CRCSC化療增敏[38]。因此，亟需尋找更多的天然藥物及其提取物，篩選出最佳的天然藥物、藥物劑量和給藥方式，有效地用于CRC患者的現(xiàn)代治療。第四，實驗?zāi)Ｐ褪翘岣吲R床前研究質(zhì)量和開發(fā)新的治療藥物的關(guān)鍵，但用來研究CRCSC與化療耐藥機制的研究多數(shù)是在體外使用腫瘤細胞系進行的，因此為了更接近人CRC的活體情況，亟需開展使用來源于CRC患者的CSC的臨床研究[3]。第五，CRC是一種“沉默的”疾病，許多患者直到癌癥轉(zhuǎn)移后才會出現(xiàn)腸道出血、腹痛等臨床表現(xiàn)，而多數(shù)CRC患者死于復(fù)發(fā)和化療耐藥，但到目前為止還沒有可用的預(yù)測生物標志物為最有可能復(fù)發(fā)和化療耐藥的CRC病例提供明確的線索，因此尋找有用的預(yù)測指標對于研發(fā)更佳的臨床治療方案更為重要[39]。