化學發光法檢測HBsAg臨界值結果的研究及處理

南京市高淳人民醫院（211300）孫穎

血液中乙肝標志物的種類較多，其中表面抗原（HBsAg)是最主要的，HBsAg陽性是確診乙型肝炎的基本條件。由于人類個體差異及感染時間長短等因素，人體內HBsAg含量存在高低差異，我國低濃度的 HBsAg人群在乙肝患者中，占有一定的比例，約占陽性的23%，因此，不能輕視這部分人群，如未及時檢出，乙肝病毒可能會通過輸血、手術等途徑擴散開來，造成疾病的傳播，低濃度HBsAg患者的發現對臨床選擇正確治療手段甚至醫生自我保護有重大意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2016年6月～12月HBsAg 定量結果為臨界值(0.05 IU/ml≤HBsAg≤2IU/m1)的樣本共30份。

1.2 試劑與方法

1.2.1 儀器試劑 美國雅培的ARCHITECT IR2000全自動化學發光微粒子免疫分析儀，原裝配套HBsAg試劑及確認試劑，按保養手冊進行儀器的保養及維護，每日檢測質控，使用安圖專用發光定量質控品。

1.2.2 測定方法 采用化學發光微粒子免疫檢測技術測定HBsAg，當出現結果0.05～2IU/ml時，將標本用最大離心力重新離心10min以上，再次測定HBsAg，如結果<0.05IU/ml，則報告HBsAg陰性；如檢測結果仍落在0.05～2之間，則進行HBsAg抗體中和確認試驗，HBsAg確認試驗是利用CMIA技術，同時測定中和及未中和標本的HBsAg的S/CO值，如果未中和標本信號S/CO≥0.70，且中和標本的RLU與未中和標本相比減少了>50%時，即可確認HBsAg陽性。

2 結果

3 0 例H B s A g 定量檢測初次結果為0.06～1.43，平均0.55，均為臨界結果，標本經重新離心10min以上，再次檢測HBsAg，結果為0.07～1.87，平均0.54，用抗體中和確認試驗進行HBsAg確認，按照判斷標準中和率下降>50%為確認試驗陽性，30例標本中有28例符合標準，HBsAg確認為陽性，2例未確認，確認試驗陽率高達93%。

3 討論

乙肝是我國最常見的肝臟疾病，臨床常常應用抗原抗體特異性結合原理的方法來測定HBsAg及相關抗體，其檢測結果是診斷乙肝的基礎。由于檢測方法的靈敏度各有差異，導致一些低濃度HBsAg不能被檢測出，尤其是臨界值。據研究[1]低濃度HBsAg的出現原因較復雜，可能是以下3個方面：①患者處于乙肝感染的隱匿期、急性乙肝恢復期、感染后自身痊愈的后期攜帶者，此時病毒是低水平復制，并且可能存在血清學轉換，出現抗體[2]。②病毒的變異會使HBsAg的抗原性發生改變，導致靈敏度不夠，結果表現為弱陽性，體內的HBsAg含量實際很高。③因機體的免疫系統對病毒的應答反應表現為免疫耐受，導致表面抗原水平表達較低。

日常工作中，本院每月檢測的近2000例HBsAg約有3～5例為低濃度，約占總數的1%～2%，比例雖不高，日積月累，將是一份大數據，怎樣準確報告，避免引起糾紛，是我們必須面對的問題，按照檢驗操作規程，當結果存在疑問時，應該進行抗體中和確認試驗或HBV-DNA檢測以驗證結果的可靠性。但是，由于進口試劑成本以及標本數量不能滿足日常檢測的需要，HBsAg確認試驗未能開展，我們與試劑廠家聯系，最終予以檢測。

本次研究結果顯示，30例標本大多數能被特異性抗體吸附，證明患者體內確實存在病毒抗原，HBsAg陽性為真實結果；2例不能進行確認者，具體原因不能查明，有研究[3]提出可能是因為血中難以消失的物質的干擾以及抗體中和試驗的本身敏感性對檢測的干擾，在HBsAg濃度很低時，會導致中和試驗呈假陰性。同時，雅培試劑說明書上也特別提出：因為早期感染或早期恢復，非特異性結合可能掩蓋樣品中低濃度的HBsAg，導致假陰性，對此，我們建議對HBsAg定量結果為陽性而確認試驗陰性者，應建立跟蹤隨訪記錄，掌握HBsAg在病情變化中的改變。

隨著時代的發展，人們法律意識日益增強，CMIA法檢測HBsAg結果為弱陽性的標本，換一種靈敏度不及CMIA的方法來檢測，很可能會出現陰性結果，這種時陰時陽的結果容易引起醫患糾紛，必須引起足夠的重視。所以本次研究建議在條件允許的情況下，特別是當HBsAg為低濃度值(<2IU/ml)時，應進行HBsAg抗體中和確認試驗，以保證結果的準確性，避免差錯的發生。