茶炭疽病菌的生物學特性研究

劉 榮，周爽爽，韋玲冬，李永波

（黔南民族師范學院-生物科學與農學院，貴州都勻 558000）

茶是貴州地區主要的經濟作物之一，在貴州都勻、遵義、石阡等多地都有種植，隨著今年來溫室效應影響，茶炭疽病菌的發生越發嚴重，是茶樹的主要病害之一，在福建、浙江等產茶區也發生較為嚴重。調查發現，該病發生嚴重地區，茶樹會大量落葉，對來年春茶的產量帶來影響。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

單孢分離茶炭疽病菌病葉，獲得茶炭疽病菌菌株C6，用PDA試管斜面培養保存于4℃冰箱[1]。

1.2 試驗方法

1.2.1 溫度對茶炭疽病菌生長的影響

設置溫度梯度時，采用10℃、15℃、20℃、25℃、30℃和35℃等6個溫度梯度。25℃培養到菌絲未長滿培養皿時，打取菌落邊緣菌絲[2]，用十字交叉法劃線，每個溫度5個重復，放置于25℃培養箱中培養，每隔24h測一次菌落直徑，直至有生長最快的長滿皿。

1.2.2 pH對茶炭疽病菌生長的影響

用滅過菌KCl-HCl，Na2HPO4-NaOH的緩沖溶液將培養基調成4、5、6、7、8和9等6個pH梯度，方法同上1.2.1。

1.2.3 碳源對茶炭疽病菌生長的影響

以PDA培養基作為對照，以等質量碳元素的蔗糖、乳糖、麥芽糖置換PDA中的等質量碳源葡萄糖，配制成四種培養基[3]，方法同上1.2.1。

1.2.4 氮源對茶炭疽病菌生長的影響

以查氏培養基為基礎，其中加入等質量氮元素的氮源為牛肉膏、蛋白胨、硝酸銨、酵母浸膏，制成四種不同氮源培養基[3]，方法同上1.2.1。

1.2.5 光照對茶炭疽病菌生長的影響

③健康教育:選擇自制問卷方式對患者的相關病情和知識的認知情況進行調查,要結合調查的結果對患者開展相關干預,根據患者的文化程度和性格特點等,為患者制定合乎患者自身實際的健康教育方案。靈活的選擇健康教育的形式,比如為患者進行面對面的交流,幫助患者發放健康教育手冊,通過QQ和微信等方式推送,也可為患者選擇采用講座的形式進行健康教育。健康教育的內容,須使患者了解病情出現的機制,對于患者進行管理方法、行為矯正等相關的宣教,要是患者明確對于鼻出血的相關預防措施,做好相關用藥指導,還要積極構建良好和諧的護患關系,以便于可以最大程度上促進患者的康復和保健。

設置光照分別為全光照、全黑暗以及12h光暗交替條件下培養[4][5]。方法 1.2.1。

1.2.6 溫度對茶炭疽病菌孢子萌發的影響

用無菌水配制孢子懸浮液，濃度大約為104/ml，放置于10、15、20、25、30和35℃6個溫度條件培養，5個重復，觀察孢子的萌發，每2h觀察1次，每次取200ul制片選100個孢子，記錄萌發率[6][7]。

1.2.7 濕度對茶炭疽病菌孢子萌發的影響

以蒸餾水中孢子的萌發率為對照，分別控制為60%、70%、80%、90%、95%和100%等6個[6][7][8]，方法同1.2.6。

1.2.8 pH對茶炭疽病菌孢子萌發的影響

用Na2HPO4-NaH2PO4緩沖液配制4、5、6、7、8和9等6個不同pH，用相應的緩沖液制孢子懸浮液[6][7][9]，方法同1.2.6。

2 結果與分析

2.1 溫度對茶炭疽病菌生長的影響

5天后數據統計表明（圖1），炭疽病菌在6個溫度下均能夠生長，其在25℃生長速度最快，5天菌落平均直徑7.78cm；在10℃下生長最慢，5天僅1.34cm；表明其最適溫度為25℃。

圖1 不同溫度茶炭疽病菌生長速度

2.2 pH對茶炭疽病菌生長的影響

25℃恒溫培養，茶炭疽病菌在6個pH下均能夠生長（圖2），5天后數據統計表明，pH6時生長最快，5天菌落平均直徑7.32cm；在pH 7生長速度次之，5天菌落平均直徑為6.39cm；在pH5，pH8時生長也較好，表明pH6為其最適生長酸堿度。

圖2 不同pH茶炭疽病菌生長速度

2.3 碳源對茶炭疽病菌生長的影響

25℃培養箱中培養，5天后的菌落直徑（圖3），在PDA上長的最快，可以達到7.48cm，在PSA上次之，7.12cm，對乳糖的利用率最低；表明PDA和PSA都是比較適合其生長的培養基。

圖3 不同碳源茶炭疽病菌生長速度

2.4 氮源對茶炭疽病菌生長的影響

5天后數據統計表明（圖4），在酵母浸膏的培養基生長的菌落平均直徑為6.68 cm，生長速度最快；牛肉膏的培養基6.26 cm，次之；兩種沒有顯著差異，在以硝酸銨的培養基上生長最慢，為4.42 cm；其它三種氮源培養基生長相比差異顯著。表明酵母浸膏和牛肉膏都是比較適合的氮源。

圖4 不同氮源茶炭疽病菌生長速度

2.5 光照條件對茶炭疽病菌生長的影響

三組光照試驗，生長速度差異不顯著，表明光照對其生長沒有影響。

2.6 溫度對茶炭疽病菌孢子萌發的影響

茶炭疽病菌孢子在6個溫度均能萌發（圖5），觀察計數后發現25℃萌發最多，萌發率為82%；而35℃萌發率最低，僅10%；20℃和30℃萌發率較高，分別為70%和67%，根據數據統計分析孢子在這兩個溫度下的萌發率無明顯差異；10℃萌發率較低才22%。這些統計數據表明25℃為其萌發的最適溫度，且茶炭疽病菌孢子的萌發率低溫略高于高溫。

圖5 不同溫度下茶炭疽病菌孢子的萌發率

2.7 濕度對茶炭疽病菌孢子萌發的影響

試驗結果，在試驗的空氣相對濕度中，茶炭疽病菌孢子僅能夠在空氣濕度為95%或以上才能萌發，且萌發率較低，12h后，空氣濕度為95%萌發率僅6%，空氣濕度為100%萌發率15%；但其在水中萌發率可達80%，表明濕度對茶炭疽病菌孢子萌發的影響極大。

2.8 pH對茶炭疽病菌孢子萌發的影響

茶炭疽病菌的孢子在6個pH下均能萌發（圖6），數據統計表明，在pH6時萌發率最高，可以達到95%；pH7時次之，可達到92%；在pH5和pH8時，孢子的萌發率也較高，均超過80%；表明中性偏微性條件孢子萌發的很好。

圖6 不同pH下茶炭疽病菌孢子的萌發率

3 結論與討論

炭疽病為植物上一類重要病害，在茶、蘋果、辣椒等植物上均有報道，但由茶炭疽菌引起的茶炭疽病，該病原菌菌絲生長受碳源、氮源、pH和溫度等的影響，該菌最適碳源和氮源培養基分別為PDA和酵母浸膏培養基；茶炭疽病在25℃生長最快，表明25℃為其最適生長溫度；在pH6生長最快，表明pH6為其最適生長酸堿度；其生長以及孢子的萌發均不受光照條件或黑暗條件的影響。其孢子萌發率最高的溫度為25℃，為其最適萌發溫度，且孢子萌發在低溫比偏高溫的萌發率高；但孢子對濕度要求極高，需在空氣濕度達到95%以上才能萌發，在液態水中萌發率較高；說明雨季適合茶炭疽病菌孢子的萌發；中性至微堿性或微酸性條件下有較高的萌發率；根據對茶炭疽菌生物學特性研究結果在綜合防治中有參考價值，研究表明在選擇茶園時應該選擇疏松肥沃、排水良好的土壤，避免排水不暢造成茶園濕度過大有利于茶炭疽病病菌孢子的萌發，從而加重病害的發生為害程度；另外，在茶樹的種植過程中要避免過度密植，讓茶樹間有合適的通風透光條件，降低濕度；第三，雖然酸性條件有利于孢子萌發，但不利于菌落生長，特別不利于產孢，可能酸性土壤種植茶樹有利于控制炭疽病的發生。本研究對茶炭疽病病原菌的生長以及孢子萌發等生物學特性進行了研究，為推測其發生、流行規律以及防治提供了一定的理論依據，但該病具體的田間防治方法還需進一步研究。