密花豆的保育學研究進展△

朱艷霞，林楊，黃燕芬，秦雙雙，韋坤華

廣西壯族自治區藥用植物園 廣西藥用資源保護與遺傳改良重點實驗室，廣西 南寧 530023

雞血藤是豆科密花豆屬（Spatholobus）植物密花豆Spatholobus suberectusDunn 的干燥藤莖，具有補血活血、調經止痛、舒筋活絡的功效，主治月經不調、痛經、經閉、風濕痹痛、麻木癱瘓、血虛萎黃[1]，始載于清代《本草備要》[2]。近代研究表明，雞血藤主要化學成分包括黃酮類（如芒柄花素、黃苷草苷、芒柄花苷、染料木素等）、萜類、甾醇類、蒽醌類、木脂素類、香豆素類、酚酸類等成分，具有調節血液系統、抗腫瘤、抗氧化、抗病毒、抗菌、抑制黑色素沉著等多種藥理活性[3]。雞血藤顆粒、花紅片、正天丸、婦科千金片等200 多個中成藥的原料中均包含雞血藤，市場用量較大[4]。隨著醫藥行業對雞血藤相關產品的開發，其市場需求量不斷加大，過度采挖導致我國野生資源十分短缺，商品藥材多從越南、緬甸、柬埔寨進口。因此，了解密花豆資源現狀、掌握其生長發育規律、加強保育學研究，對促進雞血藤產業健康發展、實現資源可持續利用具有重要意義。

1 資源現狀

密花豆屬植物約40 種，其中密花豆為我國特產，主要分布于云南、廣西、廣東和福建等地海拔800～1700 m 的山地疏林、密林溝谷或灌叢中[5]。廣東境內野生資源主要分布于粵北、粵東北、粵中及粵西山區；廣西境內主要分布于賀州、玉林、梧州、防城港等南部地區的山地林中；云南主要分布于云南南部地區；福建也有少量分布。其中，廣東、廣西境內野生種群多生長于不易到達的深山林中，資源已瀕臨枯竭；云南的野生種群保存較好，但資源蘊藏量較少[6]。

經市場調查，目前我國安國、亳州、荷花池、玉林四大藥材市場上的雞血藤藥材主要從越南、緬甸、柬埔寨等東盟國家進口，統貨批發價為9～10 元/kg，選貨為11～12 元/kg，大貨主要供應華潤三九醫藥股份有限公司、北京同仁堂股份有限公司、廣西靈峰藥業有限公司等藥品生產企業，市場年需求量約1～2萬t。

2 遷地保育

2.1 密花豆生物學特性

密花豆為大型木質藤本，喜纏繞，不耐寒，稍耐陰，喜歡深厚、肥沃、濕潤、疏松、排水良好的林間熟地，但在貧瘠干旱的地方也能夠生長，適應性比較強，具有較好的抗逆性能力。其幼年生長較慢，3～4年后可迅速生長[7]。花期6月，果期11—12月，結實率低，莢果近鐮形，長8～11 cm，含種子1 粒，種子扁長圓形，長約18.19 mm，寬約8.93 mm，厚5.06 mm，千粒質量537.53 g[8]。新鮮種子含水量27.27%，發芽率96.70%，隨種子含水量的降低其發芽率逐漸降低，當含水量為12.08%時，發芽率降至70.00%[9]。

2.2 引種馴化

2.2.1 引種材料 采用種子繁殖的密花豆于12 月采收成熟種子，隨采隨播；采用扦插繁殖的密花豆全年均可進行繁殖，從生長健壯、無病蟲害的母株上剪取長20～25 cm 且帶2～3 個芽的木質化枝條作插穗。

2.2.2 物候期觀察 通過對引種到廣西藥用植物園的密花豆長期觀察得出，扦插苗苗期生長比較緩慢，扦插后約20～30 d 插條陸續生根及萌芽，50～60 d 插條平均生根可達3 條以上。育苗3～6 個月后，在苗高>40 cm 時移栽。移栽后第一年，植株灌木狀，主藤莖長1～2 m，人工輔助牽引使其纏繞上高大喬木或藤架，全年生物量積累為1～2 kg/株。移栽后第二年，主藤莖長3～4 m，側枝增至2～4 條，生物量積累至4～6 kg/株。移栽后第三年，生長速度加快，主藤莖徒長，長可達10 m 以上，基部莖粗2 cm 左右，生物量積累至10 kg/株以上。移栽后第四至十年，側枝數不斷增加，主莖優勢不明顯，每年5—9 月為快速生長期，11 月至次年2 月為緩慢生長期，基部莖粗2～5 cm，藤莖長20～40 m，生物量積累至40 kg/株以上，樹冠面積可達20 m2以上。

2.2.3 生態適應性 密花豆的生態適應性較強，山林間、溪邊及灌叢均可生長。席飛飛等[10]研究表明，在火龍果和荔枝樹下栽培5 年的雞血藤植株表現出良好的適應性，但火龍果樹下栽培的雞血藤存活率、生物量、生理生化指標等均明顯高于荔枝樹下栽培的雞血藤。葉面噴施25 mg·L-1硫酸鋅+50 mg·L-1硼砂能促進黃酮類化合物的積累[11]。施用添加適量硼砂的農家肥較有利于醇溶性浸出物、總黃酮、原兒茶酸、兒茶素、表兒茶素的含量的形成與積累[12]。李斌等[13]研究表明，隨著栽培年限的增加，總黃酮的含量有逐漸增加的趨勢，但均低于廣西野生品。呂惠珍等[14]研究表明，隨著栽培年限的增加，水浸出物含量也有逐漸增加的趨勢。

2.3 種苗繁育

2.3.1 扦插繁殖 由于密花豆結實率低，難以獲得大量種子，因此生產上常用無性繁殖。密花豆插穗生根類型為皮部生根型，生根較容易。扦插繁殖是密花豆最常見的繁殖方式。黃雪彥等[15]研究表明，扦插最佳條件為300 mg·L-1的ABT1 號生根粉浸泡2 h，選用具有2～3 個芽體的木質化硬枝，于春季扦插于珍珠巖或砂壤質黃心土，生根率>87%。謝金蘭等[16]研究表明，以1～3 年生粗度>0.8 cm 的木質化枝條做插穗，用500 mg·L-1雙吉爾生根粉（GGR）浸泡插穗基部1 h，于春季扦插于黃心土的育苗基質上，生根效果最好。曲芬霞等[17]研究表明，利用8年生以下、莖粗為0.7～1.0 cm 的木質化枝條做插穗，100 mg·L-1的吲哚丁酸（IBA）和200 mg·L-1ABT2號生根粉混合溶液浸泡2 h，于12 月下旬至次年1 月中旬扦插效果最佳。蘇輝蘭等[18]研究表明，育苗基質以泥炭土-蛭石（1∶1）為佳，50 mg·L-1吲哚乙酸（IAA）浸泡插穗1 h后生根率最好，可達4.36條/株。榮廣天等[19]研究表明，選擇木質化程度高的枝條為插穗，用300 mg·L-1萘乙酸（NAA）浸泡30 min，能較大程度的提高成活率。蘆進財[20]對雞血藤扦插苗的質量進行了分級，初步得出以苗高、分枝數、莖粗為分級指標，一等苗苗高>7.4 cm、分枝數>3、莖粗>3.49 mm，二等苗苗高1.6～7.3 cm、分枝數2～3、莖粗2.38～3.48 mm，不合格苗苗高≤1.5 cm、分枝數≤1、莖粗≤2.37 mm。

2.3.2 壓條繁殖 密花豆藤莖長，分枝多，且多年生植株的匍匐枝條較多，適于壓條繁殖。盧沅沅等[21]選用當年生木質化枝條于11 月作壓條處理，15～30 d可見白色細嫩的根系，次年開春即可剪下枝條栽植，壓條繁殖的生根速度較快，但繁殖效率較低。

2.3.3 組培繁殖 密花豆枝條的汁液多，組織培養時材料易發生褐化。吳桂容等[22]以嫩葉為材料，篩選出愈傷組織誘導的理想培養基為MS 培養基+1.0 mg·L-16-芐氨基嘌呤（6-BA）+0.5 mg·L-1NAA+30 g·L-1蔗糖+0.1 g·L-1維生素C，誘導率達95%，此培養基也具有防止愈傷組織褐化的效果。張亞芳[23]研究表明，愈傷織誘導的最適外植體是嫩葉，愈傷組織誘導培養基為MS 培養基+0.9 mg·L-16-BA+0.5 mg·L-1NAA+0.2 mg·L-1激動素（KT）+30 g·L-1蔗糖+8 g·L-1瓊脂，誘導率達88.3%，不定芽分化的最適培養基為MS 培養基+2.5 mg·L-16-BA+0.4 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1赤霉素（GA3）+30 g·L-1蔗糖+8 g·L-1瓊脂，生根誘導的最適培養基為1/2MS培養基+0.1 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-1IBA+30 g·L-1蔗糖+8 g·L-1瓊脂，內源激素動態調節愈傷組織誘導和芽分化過程，IAA 含量增加有利于愈傷組織形成，GA3含量增加有利于芽分化[24]。

2.4 種質資源保存

密花豆為大粒種子，成熟時含水量較高，保存前需將種子含水量干燥至10%以下，密封貯藏于0～10 ℃。

3 回歸保育

3.1 回歸保育的適宜區域

適合密花豆回歸引種的區域是亞熱帶水源充足的常綠闊葉林或次生毛竹林，還應滿足以下條件：1）遠離城市、公路，人跡罕至，生長環境不易被破壞；2）區域內有或曾有野生密花豆分布，生態環境與密花豆的適生環境相似；3）生態環境良好，附近沒有污染源；4）植被覆蓋良好，以適合密花豆生長的森林類型為佳，物種較完善，具有一定數量的密花豆伴生植物。

3.2 回歸保育實踐

3.2.1 選地與整地 育苗地選擇有遮陰設施的平整地塊，排水良好，土層肥沃深厚。種植基地宜選擇氣候溫暖、潮濕陰涼、海拔800～1700 m、坡度40°～80°的山地疏林或密林溝谷或灌叢。結合林地春季除草進行，依山勢、坡度及林木生長的密度挖穴，穴深20 cm，將雜草和枯枝落葉埋入土中進行漚制以作基肥，有條件的可以施充分腐熟的有機肥。定植密度50～100株/畝（1畝≈666.67 m2）。

3.2.2 扦插育苗 每年11 月至次年2 月，選擇1～2年生無病蟲害、健壯的木質化枝條，剪成帶2～3節、長約20 cm 的莖段，莖段基部要斜剪約45°，頂部剪平。將其下端4～5 cm 浸入150 mg·L-1ABT1 號生根粉溶液中，浸泡30 min 取出稍晾干，也可用已有虛根的莖進行扦插。莖段60°角斜插入直徑10～15 cm的營養袋中，壓緊，澆足水。營養土配質量比為本土∶有機肥（9∶1）。有機肥可選擇腐熟的雞糞肥、牛糞肥、綠肥、餅肥等。苗期合理澆水保濕，避免積水爛根。育苗前期遮陰度80%；苗高≥10 cm 后，遮陰度為50%；苗高≥20 cm，可除去遮陰物；苗高≥40 cm即可出圃移栽。

3.2.3 移栽 每年4—6 月，雨后移栽。移栽時苗高以40～50 cm 為宜，過高應修剪枝葉，并剪掉大部分葉片。移栽時，去除營養袋，每穴1 株，覆土壓緊，澆足定根水。

3.2.4 伴生植物 根據雞血藤的生長需人為創造其生長條件，在水、肥、光照達到要求的同時，還可搭配種植一些伴生植物，如兩面針Zanthoxylum nitidum(Roxb.) DC.、羅傘樹Ardisia quinquegonaBlume、鵝掌柴Schefflera heptaphylla(Linnaeus)Frodin、草珊瑚Sarcandra glabra(Thunb.)Nakai、蘿芙木Rauvolfia verticillata(Lour.) Baill.等灌木，日常管理上需要避免伴生植物長勢過于強盛。

3.2.5 人工管理 補苗移栽30 d 后，發現死亡的及時補種。結合林地除草，在移栽后30 d，對小苗周圍的雜草進行拔除。水分管理因林下植被豐富，空氣濕度高、土壤保水性好，正常的降水已可滿足雞血藤的生長用水需求，無需人工澆水。中耕除草視雜草生長情況，進行拔除，每年除草2～3 次。結合除草，適當在苗基部進行培土。每年追肥1～2 次（施肥時期為3—4 月和8—10 月），可在雨后進行撒施復合肥，有條件的可以施充分腐熟的有機肥。

4 采收加工

4.1 采收期

雞血藤藥材一般于秋、冬兩季采收[1]。通過分析廣西桂林野生密花豆中黃烷醇、異黃酮、黃酮醇等21 種活性成分的動態積累規律可知，11 月上旬至12 月上旬采收的雞血藤藥材綜合質量較好[25]，通過測定人工栽培于廣西賀州和南寧的4～10 年密花豆中浸出物含量，得出4 年生以上枝條浸出物含量均達到《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《中國藥典》）2005 年版標準[14]。通過分析人工栽培于廣東清遠的密花豆中浸出物、總黃酮、原兒茶酸、兒茶素和表兒茶素的含量與生長年限的變化規律得出，活性成分含量均隨著生長年限的增加呈遞增，7—9 月采收的4～6 年生枝條浸出物含量均達到《中國藥典》2010年版標準[26]。

4.2 加工

雞血藤質地堅硬，一般趁鮮切成橢圓形、長矩圓形或不規則的斜片，再干燥，切片的厚度為0.3～1.0 cm。研究表明，鮮片中異黃酮和水浸出物含量高于蒸片高于浸片[27]。

5 展望

目前，我國密花豆野生資源逐漸減少，開展遷地保育研究與實踐對資源保護和可持續利用具有重要意義。雖然已經開展的密花豆資源調查、引種馴化、種苗繁育、回歸保育等方面的研究取得了豐碩成果，但諸多方面還有待深入研究。首先，種子貯藏特性研究，即種子貯藏對低溫的耐性如何，對脫水的耐性如何，安全貯藏的臨界含水量是多少，種子壽命有多長，如何改善貯藏條件、延長種子壽命，達到長期安全保存種質的目的？第二，組培快繁技術研究，包括對組培苗快速生產各個環節，外植體選擇、滅菌、初代培養、增殖培養、生根培養、煉苗等的參數條件優化，建立組培苗質量標準，制定組培苗移栽技術規程等。第三，藥效成分形成的機理研究，一方面通過基因測序，挖掘次生代謝途徑的功能基因，一方面利用功能基因組學、蛋白質組學、代謝組學和系統生物學的方法研究生態環境因子（溫度、光照、水分、土壤等）和人為因素（修剪、搭架、施肥等）對次生代謝產物合成積累的影響規律。