十八味消白丸的質量測定方法探討

肖瓊

（山西省中西醫結合醫院 山西 太原 030013）

十八味消白丸是由當歸、黃芪、熟地黃、白術等十八味中藥組成的復方。主治白癜風。本次使用的高效液相色譜法對西洋參中所含有的人參皂苷Rb1 進行含量鑒定，實驗過程如下。

1.實驗儀器與試藥

WATERS2695 高效液相色譜儀；AlltechELSD2000ES 檢測器；DiamosilC18 色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；超聲波清洗器；恒溫水浴鍋；JM-B10002 千分之一電子天平；HANGPING-FA2104萬分之一電子分析天平；微量進樣器。

人參皂苷Rb1 對照品、川芎對照藥材、當歸對照藥材、石菖蒲標準品、黃芪甲苷、大黃素標準品均購自中國藥品生物制品檢定所。十八味消白丸，陰性對照品（自制）；乙腈為色譜純，水為超純水，其他均為分析純。

2.定性鑒別

2.1 當歸、川芎的定性鑒別

準確提取本品5g 研細，加甲醇15mL，超聲處理15 分鐘，然后過濾，將濾液蒸干，將試驗殘渣加入甲醇幫助溶解，以此為供試品溶液；另取當歸、川芎對照藥材各0.5g，按照上述同樣方法制作對照溶液；提取、當歸各5g，按照供試品溶液制作方法制作，作為陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗，提取上述溶液各5μL，分開點在同一個硅膠G 薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯（4:1）為展開劑，先展開，后取出，再晾干，放置在紫外光燈（365nm）下觀察，供試品色譜中，在與對照藥材相對的地方上出現類似的熒光斑點，圖譜清晰可見，陰性對照無干擾。

2.2 何首烏的定性鑒別

提取本品5g，研磨，先加入2.5mol/L 硫酸15mL，再加入氯仿15mL，然后進行加熱回流15 分鐘，離心，取上清液放置于分液漏斗中，分取氯仿層，蒸干，試驗殘渣加氯仿1mL 使溶解，作為供試品溶液[1]。再提取大黃素對照品，加入甲醇制成每3mL中需含3mg 的溶液，作為對照品溶液。取何首烏陰性藥材10g，同供試品溶液制備方法制備，作為陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各2μL，區分點在同一硅膠G 薄層板上，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇（30:10:0.5）為展開劑[2]，先展開，然后取出，晾干，放置在紫外光燈（365nm）下進行檢查。供試品色譜中，在和對照品色譜相對應的地方，顯示相同顏色的熒光斑點，圖像清晰，陰性對照無干擾。

2.3 石菖蒲的定性鑒別

取本品20g 研細，加石油醚（60 ～90oC）30mL，然后進行加熱回流半個小時，再濾過，將濾液蒸干，最后加入石油醚1mL進行溶解，作為供試品溶液；再取石菖蒲的對照藥材1g，使用同樣的方法制成石菖蒲對照藥材溶液；取石菖蒲陰性對照藥材10g，同供試品溶液制作方法進行制作，用作石菖蒲陰性對照溶液。依據薄層色譜法為展開劑[3]，分別展開、取出和晾干，常規放置1 小時，再放置于紫外光燈下（365nm）下進行觀察，供試品色譜中，在和對照品色譜相對應的位置上，呈現相同的顏色的熒光斑點，圖像清晰，陰性對照無干擾。

2.4 黃芪的定性鑒別

提取本品5g 研磨，然后加甲醇15mL，進行回流半個小時小時，濾過，濾液蒸干，加水10mL 將其溶解，用水飽和正丁醇萃取1 次，一次10mL，取正丁醇液，用氨水萃取1 次，一次10mL，取正丁醇層，使其揮干，加甲醇1mL 使其溶解，作為供試品溶液。另外提取黃芪甲苷對照品，加入甲醇制成每1mL 含1mg的對照品溶液；提取黃芪陰性藥材10g，和供試品溶液制作方法制作，為黃芪陰性對照溶液。依照薄層色譜法進行試驗，分別展開、取出和晾干，提取上述三種溶液各4μL，區別點在同一硅膠G 薄層板上，用三氯甲烷-甲醇-水（13:7:2）的下層作為展開劑，展開、取出和晾干，供試品色譜中，在和對照品色譜相對應的位置上，顯示相同的顏色的熒光斑點，圖譜清晰，陰性對照無干擾。

3.含量測定

3.1 色譜條件

使用十八烷基硅烷鍵合硅膠作為填充劑;使用乙腈-水（30:70）作為流動相；柱溫度：30℃；流動相對流速：1.0mL/min；載氣流速：2.1L/min；漂移管溫度：110℃；理論塔板數：使用人參皂苷Rb1 峰進行計算應不得低于5000。

3.2 對照品溶液的制作

精密稱取人參皂苷Rb1對照品劑量，加入甲醇制作成每1mL含有人參皂苷Rb11mg 的溶液，得到對照品溶液。

3.3 供試品溶液的制作

提取本品2g 研磨，精密稱定計算，置于具塞錐形瓶中，精確加入水飽和正丁醇50mL，封閉，稱其質量，超聲處理45 分鐘，使其冷卻，再稱定重量，用水飽和正丁醇彌補減少的重量，過濾，精確量取20mL 置分液漏斗中，加入氨試液20mL 萃取2 次，棄掉氨試液，正丁醇液蒸干，加入甲醇定容至4mL，即得。

3.4 陰性對照溶液的制作

處方中除去西洋參，根據供試品溶液的制作方法制作陰性對照品溶液。

3.5 陰性干擾試驗

提取上述溶液各5μL，區別按照上述色譜條件進樣進行分析，觀察色譜圖變化，試驗結果顯示，陰性對照圖譜與對照品、供試品圖譜中西洋參相對應的保留時間如果無色譜峰，表示選擇性良好，陰性無干擾。

3.6 線性關系考察

見表1。

表1 線性關系

3.7 精密度實驗

吸取同一份對照品溶液（0.916mg/mL），持續進樣6 次，根據上述色譜進行測試。結果，RSD=2.18%（n=6），表示儀器精密度很準確。

3.8 重復性實驗

見表2。

表2 重復性實驗

3.9 穩定性試驗

提取一樣的供試品溶液，依據上述色譜分別在2、4、6、8、10、12 小時測定人參皂苷Rb1 峰面積積分值。結果，RSD=2.06%（n=6），表示在12 小時內供試品溶液穩定性較為良好。

3.10 加樣回收率實驗

取已知含量的十八味消白丸粉末6 份，每份約1.0g，精密稱定，分別精確加入人參皂苷Rb1 對照品（0.912mg/mL）2mL，混合后按供試品的制備方法提取，各進樣10μL 檢測，記錄相關數據，計算結果，人參皂苷Rb1 平均回收率為100.42%，RSD為1.69%（n=6）。

3.11 含量測定

照3.3 項下方法平行提取兩份供試品溶液，分別精密吸取對照品溶液（0.912mg/mL）5μL、10μL,供試品溶液20μL，依照上述色譜條件進行測試，以外標法計算，結果為1.666mg/g、1.419mg/g，平均含量為1.52mg/g。

4.討論

藥典中西洋參人參皂苷Rb1的含量測定方法為高效液相色譜法，采用紫外檢測器，但是由于人參皂苷Rb1在紫外檢測條件下為末端吸收，靈敏度低，干擾較大，重復性較差，故本方不采用藥典的方法。因用HPLC-ELSD 法測量人參皂苷Rb1的含量具有簡便、準確、靈敏度高、現性好等特點，是一種良好的測定含參皂苷Rb1制劑的含量測定方法，故采用此法測定人參皂苷Rb1的含量。

本文使用的對于十八味消白丸的定性和定量檢測方法，本文方法具有準確穩定性、重現性良好，并且陰性無干擾，各項指標皆達到滿意的效用，可用于十八味消白丸的質量控制。