死后細菌學檢測在死因鑒定中的作用初探

邵澤花

摘要：目的：評價死后細菌學檢測在死因鑒定中的作用。方法：取健康SD大鼠30只，10只采用頸椎脫臼法處死納入A組，10只制作缺氧缺血模型20min確認死亡納入B組，10只注射金黃色葡萄球菌納入C組，不給于治療，待死亡，分別在死后3、6、9日，取后肢深部肌肉，采用化學發(fā)光法檢測ATP水平，另取30只SD大鼠，同法處死，分別在死后第1-10日，采樣取后肢深部肌肉、肝臟、脾臟、腎臟組織，進行細菌學培養(yǎng)鏡檢。結果：以ATP濃度對數(shù)值作為橫坐標，以相對發(fā)光單位的對數(shù)值作為橫坐標，呈一元線性方程Y=0.815X+9.015，R2=0.998，P<0.01;A組、B組、C組死后第3日、6日、9日ATP組間與組內(nèi)比較差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;普通培養(yǎng)、厭氧培養(yǎng)，A組、B組、C組肌肉、肝臟、脾臟、腎臟細菌培養(yǎng)陽性出現(xiàn)時間、優(yōu)勢菌類型差存在差異。結論：死后細菌學檢測可用于死因鑒定中，ATP、細菌培養(yǎng)與鑒定等都可作為死因判斷依據(jù)，但檢測結果受觀察時間等因素影響，同時是否適用于野外大型動物死亡尚無明確定論。

關鍵詞：死因;細菌學檢查;司法鑒定

【中圖分類號】R4 ? ? ? ? ? ? 【文獻標識碼】A ? ? ? ? ? ? 【文章編號】2107-2306（2021）13--01

死因鑒定是司法鑒定的基礎工作，是法醫(yī)學鑒定需解決的關鍵問題，重要性僅次于失誤時間。但需注意的是，失誤24h之內(nèi)，尸體尚未發(fā)生腐敗，但死亡24h后，尸體便逐年開始腐敗，出現(xiàn)各種晚期尸體現(xiàn)象，出現(xiàn)各種細菌滋生、繁殖，尸體組織形態(tài)逐漸崩解、內(nèi)源性化學物質(zhì)不斷降解，難以建立相應的死后細菌學檢查體系。目前尚無一個確切、完整、系統(tǒng)的“法醫(yī)微生物學”概念與理論，但法醫(yī)學、微生物交叉融合內(nèi)容已較豐富。

1材料與方法

1.1 實驗動物與材料

取健康SD大鼠30只，雌雄不限，體重150～200g，隨機分為10組，其中10只采用頸椎脫臼法處死納入A組，10只制作缺氧缺血模型20min確認死亡納入B組，10只注射金黃色葡萄球菌納入C組，不給于治療，待死亡。分別在死后3、6、9日，取大鼠尸體，按照無菌操作要求，取后肢深部肌肉，準確稱量成若干份，每份100mg，編號放入滅菌EP管，-70℃凍存待測。設備采用TD-20/20 Luminometer、ATP、APyrase等與相關檢測試劑盒。另取30只SD大鼠，同法處死，分別在死后第1-10日，采樣取后肢深部肌肉、肝臟、脾臟、腎臟組織。

1.2方法

1.2.1 檢測組織中微生物ATP

取樣本0.10g 2ml 無菌均漿器中，加入0.9ml 4℃無菌生理鹽水，均漿，收集5ml放入無菌EP管中，1ml 無菌生理鹽水振洗，3次，混勻3000r/min離心5min。取離心后樣品上層清洗 50μl檢測管內(nèi)，加入50μ Triton X-100與腺苷三磷酸雙磷酸酶混合液，37℃賦予10min，沸水水浴1min，加入100μl BacTier-GloTM檢測液，孵育5min，檢測發(fā)光值，以無菌生理鹽水作為空白，計算ATP標準曲線。

1.2.2 菌種培養(yǎng)鑒定

獲得均漿，接種，以分區(qū)劃線法接種于培養(yǎng)皿中，每份樣品接種2份，分別在37℃有氧條件和37℃無氧條件下培養(yǎng)24h。采用接種環(huán)刮培養(yǎng)菌落，涂抹在栽載玻片中央，酒精燈烤制細菌涂片，采用Granm染色法染色，油鏡下觀察細菌形態(tài)。

1.3統(tǒng)計學處理

收集數(shù)據(jù)建立WPS xls數(shù)據(jù)表，以SPSS18.0軟件進行數(shù)學統(tǒng)計，計量資料以均數(shù)±標準差（）表示，組間比較采用t檢驗或非參數(shù)檢驗，計數(shù)資料以數(shù)（n）或率（%）表示，比較采用檢驗，以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2結果

2.1微生物ATP

以ATP濃度對數(shù)值作為橫坐標，以相對發(fā)光單位的對數(shù)值作為橫坐標，呈一元線性方程Y=0.815X+9.015，R2=0.998，P<0.01。A組：死后第3日、6日、9日，-Log（[ATP]）分別為（10.63±0.14）%、（7.81±0.11）%、（8.17±0.12）%，B組則為（7.82±0.15）%、（6.17±0.12）%、（7.52±0.20）%，C組則為（12.7±1.27）%、（10.6±6.42）%、（11.8±6.20）%，差異具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

2.2 菌種培養(yǎng)鑒定

普通培養(yǎng)，A組與B組1-3日，肌肉、肝臟、脾臟、腎臟均無細菌生長，C組脾臟、腎臟細菌培養(yǎng)陽性。均厭氧培養(yǎng)后，A組3-10日組織均有細菌長出，主要為G-小桿菌，死后7-10日出現(xiàn)G+大桿菌，B組3-5日組織有細菌長出，6-10日見G-小桿菌，C組組織見金黃色葡萄糖球菌，3-5日出現(xiàn)桿菌。

3討論

從本次研究結果來看，不同死因大鼠在不同時間段得到的不同后肢深部組織微生物ATP含量存在顯著差異，不同死因大鼠在不同時間段得到的不同組織細菌培養(yǎng)陽性出現(xiàn)時間、優(yōu)勢菌結果存在一定差異，反映死因、死亡時間對微生物的繁殖存在顯著影響，不僅影響微生物含量還影響微生物含量。但需注意的是，受死亡環(huán)境、尸體所在環(huán)境、尸體大小等因素影響，不同類型尸體腐敗速度、細菌類型定然存在差異[2]，該法是否可作為野外死亡人的死因鑒定尚存在異議，但在發(fā)現(xiàn)較早、醫(yī)院死亡及時冷凍的尸體死因鑒定中有一定價值。

參考文獻：

[1]趙子琴.法醫(yī)病理學[M]北京： 人民衛(wèi)生出版社，2009：1-2.

[2]吳慧清，吳清平，張菊梅，等.肉品新鮮度的ATP生物發(fā)光法檢測研究[J].中國衛(wèi)生檢驗雜志，2006，16（8）：902一903，933