雞血藤地榆黃酮提取物清除羥自由基作用的研究

林弘 林國衛(wèi)

摘要：以雞血藤和地榆為材料，采用超聲波輔助浸提法提取黃酮，并用分光光度法測定其含量，將提取的黃酮進行羥自由基清除作用試驗。結果表明雞血藤黃酮提取率為3.49%，雞血藤地榆混合物黃酮的提取率為4.56% ，羥自由基的清除率的IC50值分別是0.4188mg/ml和0.1448mg/ml。雞血藤地榆黃酮的提取液具有更好的羥自由基的清除效果。

關鍵詞：雞血藤;地榆;黃酮;羥自由基

【中圖分類號】R97 ? ? ? ? ? ? 【文獻標識碼】A ? ? ? ? ? ? 【文章編號】2107-2306（2021）13--01

雞血藤為豆科植物，其干燥藤莖是一味中國傳統(tǒng)活血化瘀的中草藥。它味苦微甘，具有降血壓和抗脂質過氧化的雙重功效，其根及莖具有活血舒筋，養(yǎng)血調經的功效[1] 。地榆是薔薇科植物，屬多年生草本植物，根入藥，性微寒、味苦，它具有止血涼血、清熱解毒 、收斂止瀉及抑制多種致病微生物和腫瘤的作用[4]。因黃酮類化合物是雞血藤和地榆的主要生理活性物質，所以研究其黃酮類化合物具有重要意義。

在黃酮類化合物的提取研究方法中因為超聲提取法具有速度快、能耗低、不破壞有效成分的特點，所以文以超聲波輔助乙醇浸提法提取黃酮，并進一步探討它們對羥自由基的清除作用。

1.材料與試劑

1.1材料：雞血藤、地榆購于百草堂中藥店。

1.2試劑與儀器

蘆丁標準品（BR 上海展云化工有限公司） 無水乙醇（AR 西隴化工股份有限公司 ）、硫酸亞鐵（AR 西隴化工股份有限公司 ）、水楊酸（AR 中國醫(yī)藥集團上?；瘜W試劑公司）、亞硝酸鈉（AR國藥集團化學試劑有限公司）、硝酸鋁（AR上海實驗試劑有限公司）。

RE-52AA旋轉蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）、DHG-914DA電熱恒溫鼓風干燥箱（上海精宏實驗設備有限公司）、UV-2012PC紫外可見分光光度計（尤尼柯儀器有限公司）、SHB-III循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿有限公司）、AL104電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）、HH-6數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華有限公司）。

2方法

2.1標準曲線的制作

標準溶液配制：精密稱取蘆丁標準品10mg，用75%的乙醇定容至100ml容量瓶中。得到0.1mg/ml的標準溶液。采用Rice-Evans C.A.的方法制作標準曲線[5]。在510nm的波長下測定吸光值，以對照蘆丁濃度c（mg/ml）為橫坐標，以吸光度（A）作為縱坐標，得到標準曲線。

2.2黃酮的提取

將材料粉碎，雞血藤地榆按4：3混合，恒溫干燥后待用。稱取材料10g于三角瓶中，按料液比1：20（w/v）加入200ml 60%的乙醇，超聲波提取條件為200W 60℃ 2hr。過濾后將濾渣重新提取一次。合并兩次濾液，用旋轉蒸發(fā)儀回收乙醇，得到浸膏，用95%的乙醇稀釋定容至100ml，即為樣品液[6-7]。

2.3黃酮的測定

取上述樣品液1mL用60%乙醇定容至10ml。將樣品液替代標準溶液按2.1的方法測定，得到OA值，代入標準曲線方程中，計算樣品液質量濃度C[8]?？傸S酮提取率計算公式為：W=C·F·V/（1000·M）·100% ? ? ? （1）

其中C為樣品液質量濃度，F(xiàn)為溶液的稀釋倍數(shù)，V為溶液的體積，M為樣品的質量。

2.4 回收率實驗

精密量取樣品液1.0 ml，加入蘆丁標準品1.0 ml，參照樣品測定方法，測定吸光度，求出回收率為99.94%。

2.5羥自由基的清除率

根據(jù)fenton反應體系：H202+Fe2+ ? ?Fe3++OH-+.OH ?來進行試驗，得出數(shù)據(jù)。先取8根試管分別加入硫酸亞鐵，水楊酸，乙醇，樣品液，蒸餾水，過氧化氫，放在37℃下反應30分鐘，在510nm的波長下測吸光度[9]。清除率計算公式如下：

清除率=[A0-（AX-AX0）]/A0*100% ? ? ? ? ? （2）

其中A0為空白對照溶液吸管度，AX為樣品液吸光度，AX0為不加過氧化氫樣品液的本底吸光度[10]。

3、結果與討論

3.1蘆丁標準曲線

根據(jù)測定不同濃度蘆丁對照品的吸光度值，繪制出標準曲線圖，試對數(shù)據(jù)進行分析，測得濃度與吸光度的關系曲線的回歸方程式：y=8.7286x - 0.0016，相關系數(shù)R2=0.9989。

3.2黃酮的提取率

根據(jù)標準曲線的回歸方程和提取率的公式（1），經計算雞血藤樣液總黃酮含量為0.349mg/ml，提取率為3.49%;雞血藤地榆總黃酮含量為0.456mg/ml，提取率為4.56%。

3.3羥自由基的清除率

依照2.5的方法，測得A0、AX、AX0，根據(jù)計算公式（2），得到樣液羥自由基的清除率以及IC50 值[2-3]。

樣液濃度0.1396mg/ml時，清除率為19.7%，樣液濃度0.2792mg/ml）時，清除率為34.5%，樣液濃度0.4188mg/ml時，清除率為 50.1%。雞血藤黃酮提取液清除羥自由基的半效值IC50=0.4188mg/ml。

混合物黃酮樣液為0.0228mg/ml時，清除率為8.3%;樣液為0.0684mg/ml時，清除率為24.3%;樣液為0.2052mg/ml時，清除率為70.5%。樣液濃度為0.1448mg/ml時，清除率為50%，即IC50值=0.1448mg/ml。

4討論

采用超聲波輔助乙醇浸提法提取黃酮的效果顯著，雞血藤地榆提取物中含有豐富的黃酮類化合物，提取率為4.56%。

雞血藤黃酮提取液清除羥自由基的半效值為0.4188mg/ml，雞血藤地榆黃酮提取液清除羥自由基的半效值為0.1448mg/ml。與維生素C的IC50值0.23mg/ml[11] 比較：雞血藤黃酮的IC50>維生素C的IC50值>雞血藤地榆黃酮IC50，說明雞血藤地榆混合物具有優(yōu)于Vc 的清除羥自由基的功效。以上研究結果為中藥雞血藤地榆的應用提供了科學依據(jù)。

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課題 江西省教育廳科技項目，編號：GJJ13709