甲狀腺激素免疫學檢測研究的新進展

肖立嬌（天津市北辰醫院,天津 300400）

1 概述

RIA技術的發展主要分為五代，第一代為Yalow、Berson創建，主要應用了競爭抑制免疫反應原理，使醫學檢驗史進入了新紀元；第二代的主要標志為游離標記抗原分離技術、抗原-抗體復合物；第三代的主要標志為半抗原制備抗體技術；第四代的主要標志為單克隆技術、固相載體材料；第五代的主要標志為抗體固相化，為全自動分析打下了基礎[1]。此外，以RIA理論為基礎，還陸續出現了電化學發光免疫法（ECLIA）、酶聯免疫分析法（EIA）等檢測分析技術，不僅提高了檢測靈敏度、特異性，且制備簡易、無污染、有效期長、自動化程度高，在臨床上得到了廣泛的應用[2]。

2 免疫學檢測方法分析

2.1 RIA技術 RIA技術為1959年由Yalow等人建立，成為臨床檢驗及定量分析的革命性技術，為生物醫學發展做出了重要貢獻。RIA主要通過對抗原或抗體應用放射性核素標記，并使其與待測抗原或抗體結合，檢測其復合物。目前，國內部分實驗室仍應用RIA試劑盒進行游離三碘甲狀腺原氨酸（FT3）、游離甲狀腺素（FT4）、促甲狀腺激素（TSH）等指標測定[3]。該檢測方法不僅靈敏度、特異性高，且精密度好，對多種微量蛋白、激素、腫瘤標志物均能進行準確檢測[4-5]。同時，由于其設備要求不高、操作簡單、成本低廉，因此，它是基層醫療機構應用最多的超微量物質檢測方法，也是部分激素檢測的“金標準”。但該檢測方法也存在一定不足，主要表現為自動化程度低、試劑盒不易儲存、放射性污染等，因此，該技術也逐漸被其他新檢測技術所取代[6]。

2.2 EIA技術 EIA技術最早出現于1966年，在酶的高效催化作用下，促使抗原和抗體特異性免疫反應，并使用特定的酶標記，形成可用于示蹤的免疫酶，通過觀察其顯色程度，對待測物進行分析。與RIA技術相比，EIA技術不僅設備簡單，操作安全，同時也克服了其放射性污染的問題。但該技術測量范圍窄、酶穩定性不足、不易定量分析、靈敏度偏低，因此限制了其臨床應用。直到1971年，有學者對EIA技術進行了改進，使用酶代替核素標記，即酶聯免疫吸附試驗（ELISA），該技術的特點在于操作簡單、穩定性及安全性好、靈敏度及特異度高、自動化程度高[7]。有研究利用ELISA法進行抗甲狀腺過氧化物酶抗體的定量分析，結果顯示靈敏度、特異度較高，適合基層實驗室應用[8]。也有學者對比了化學發光免疫分析（CLIA）與ELISA在檢測促甲狀腺素受體抗體方面的價值，結果并無明顯差異，但認為與ELISA相比，CLIA的重復性更好，檢測速度更快，自動化程度更高，且檢測范圍較寬[9]。ELISA雖然設備要求不高，成本低廉，但操作相對較為繁瑣，自動化程度低于CLIA。

2.3 CLIA技術 CLIA技術最早出現于1977年，是基于RIA原理形成的檢測技術，將高特異性免疫反應以及高靈敏化學發光有機結合。早期CLIA的檢測特異度與RIA相當，但靈敏度偏低，主要是由于光信號持續時間限制，無法滿足檢測需求。直至90年代，發光穩定劑的應用，使發光信號持續時間延長，可達到20-30min，使其臨床應用價值明顯提高。1990年，電化學發光反應系統建立，使其正式成為新一代標記免疫測定技術。有研究對比了ECLIA、ELISA對TSH 的檢測結果，結果顯示兩者檢測的結果高度相關，但與ELISA相比，ECLIA的準確度、精密度、線性范圍更佳。有研究分別應用CLIA、RIA檢測甲狀腺球蛋白含量，結果顯示與RIA相比，CLIA的特異度、靈敏度、符合率更高，診斷價值明顯高于RIA[10]。同時，CLIA技術還避免了RIA的放射性污染問題，且試劑有效期更長，是目前超微量檢測的主要方法。

除此之外，CLIA可應用智能化操作程序，具有操作靈活、隨到隨檢、自動化程度高等特點，使檢測效果明顯提高。以往有研究在不同孕期、非孕期女性血清甲狀腺激素水平檢測中應用了CLIA技術，結果顯示不同孕期、非孕期女性差異明顯，提示其可用于孕期甲狀腺疾病的早期篩查及診斷，對改善母嬰結局具有積極意義[11]。

2.4 化學發光酶聯免疫分析（CLEIA） CLEIA也是一種酶免疫分析法，其反應底物為發光劑，操作方法基本與EIA相同。在發光系統中，應用了螢火蟲等熒光素，使發光信號明顯增強，且能夠在一定時間內維持穩定，使檢測的靈敏度、準確性均明顯提高。同時，該技術與同位素標記技術相似，但可能獲得更佳的檢測結果，因此，在部分實驗室中已經逐步替代了RIA[12-13]。有學者對甲狀腺功能亢進（甲亢）患者應用了CLEIA法檢測，并與健康人群對比，結果顯示甲亢患者的TT3、TT4、TSH 水平均明顯高于健康人群，可用于判斷甲亢病情[14]。

2.5 其他檢測技術 除以上檢測技術外，時間分辨熒光免疫測定法（TRFIA）、ECLIA等也在臨床上得到較多應用，其中，TRFIA是一種特殊分析技術，充分利用了熒光波長、激發波長的差異，提高了檢測的靈敏性[15]。有學者認為，TRFIA是現階段最靈敏的微量檢測技術，具有廣泛的應用前景[16]。而ECLIA為新一代免疫標記技術，綜合了免疫分析、磁微粒技術、生物素-親和素、電化學發光等技術，具有精密度高、回收率高、快速穩定等特點，更適合用于現代醫院的臨床檢測。

3 結束語

目前可用于甲狀腺激素檢測的免疫學檢測技術較多，從早期的RIA技術、EIA技術、CLIA技術，到CLEIA、TRFIA、ECLIA等新型檢測技術，其檢測靈敏度、特異度明顯提高，且自動化程度越來越高，在回收率、精密度、線性范圍方面也有顯著進步。從整體上看，CLIA、ECLIA仍是目前檢測甲狀腺激素的較為理想的方法，值得推廣。