新型冠狀病毒特異性抗體檢測對COVID-19的診斷效果

徐亮

（紹興文理學院附屬醫院/紹興市立醫院，浙江 紹興 312000）

0 引言

COVID-19患者在早期感染過程進行單一病毒核酸檢測的陽性率不高，在一定程度上受到了標本采集手法、體內病毒載量小或者病毒核酸檢測過程中操作失誤等原因的負面影響。通常情況下，單一病毒核酸檢測陰性但是其CT結果和臨床癥狀均滿足《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第五版）》的患者同樣也劃分為臨床診斷分類中[1]。人體內抗體往往是受到外界病毒感染之后，漿細胞對其作出對應反應，同時產生相對抗原結合后生成的免疫球蛋白。分析COVID-19的感染情況，可以得到其在感染前期體內的血清IgM抗體水平較高，在感染后期體內的血清IgG抗體水平較高，由于其在體內往往會存留很長一段時間，所以可以通過檢測血清IgG、IgM抗體進一步輔助分析患者是否感染過COVID-19。本次對114余例檢測血清抗體呈陽性研究對象進行深入分析，進一步分析得到影響其結果為陽性的因素，具體報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料。選取紹興文理學院附屬醫院2020年5月1日至2020年5月31日進行病情檢測的8800例，在其同意參與研究的前提下設為研究對象。分別對其進行COVID-19核酸和血清IgG、IgM抗體的檢測。8800例中所有核酸檢測均為陰性，其中114余例檢測血清抗體呈陽性。114例研究對象中，男69例，女45例，研究對象的年齡范圍為26～89歲，平均（65.55±1.25）歲。

1.2 試劑與儀器。按照《醫療機構新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊（試行第二版）（聯防聯控機制醫療發[2020]）313號開展實驗室檢測工作。核對研究對象的個人信息，收集其咽拭子和血液樣本，進行雙試劑盒平行試驗聯合血清抗體檢測。試劑盒開封后立即取出陽性對照和陰性對隔放置核酸提取間。使用湖南圣湘生物科技股份有限公司生產的實時熒光定量聚合酶鏈反應（qPCR）熒光探針、引物以及試劑；輝瑞制藥生產的病毒RNA提取試劑盒；美國賽默飛世爾公司提供的BI7500型qPCR儀。血清IgM、IgG 檢測試劑盒由珠海麗珠試劑股份有限公司提供，嚴格根據其使用說明書以及相關規范約束具體行為。

1.3 方法。研究對象先使用生理鹽水清潔口腔，采集口咽拭子工作人員使用無菌生理鹽水浸濕拭子，引導研究對象張開口，且保證微仰頭部的姿勢，暴露兩側咽扁桃體。采集口咽拭子工作人員將拭子較為用力的擦拭兩側咽扁桃體表面，然后將拭子頭放在等滲鹽溶液中保存。棄去尾部，旋緊管蓋，避免其被污染。嚴格根據核酸提取試劑盒的說明書操作，將其收集的口咽拭子標本進行總RNA溶液的增殖，保證其至少有50 μL的劑量，然后放置在零下20℃準備后續的檢測使用。同時在檢測過程中收集研究對象的外周空腹靜脈血5 mL，核對研究對象的個人信息，確保信息準確。將血液放置在無抗凝劑分離膠管一段時間后，使用離心機控制其5 min的3500 r/min離心，將分離后的血清標本提取到血清IgG、IgM檢測卡的加樣孔中，分析觀察其15 min之后的結果。工作人員將其根據設置反應要求調整條件以及反應體系溶液，使用熒光定量PCR儀對其進行深入檢測分析。

1.4 指標判定。COVID-19的診斷根據《新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第五版）》中具體要求判定。

1.5 統計學分析。t檢驗用（±s）代表的計量資料，χ2檢驗用n（%）代表的計數資料，統計學軟件為SPSS 18.0。分析兩組數據之間的組間差異，如果P＜0.05，則證明當前研究討論的組間差異具有有統計學意義。

2 結果

8800 例中所有核酸檢測均為陰性，其中114余例檢測血清抗體呈陽性。

3 討論

結合此次試驗結果，進一步分析當前新冠病毒的核酸檢測與血清病毒抗體檢測的診斷鑒別關系，具體情況如下：①核酸拭子診斷為陰性，血清IgM診斷和血清IgG診斷結果均為陽性，被診斷評價為疑似感染者；②核酸拭子診斷為陰性，血清IgM診斷為陽性，血清IgG 診斷結果為陰性，被診斷評價為疑似感染者；③核酸拭子診斷為陰性，血清IgM診斷為陰性，血清IgG診斷結果為陽性，被診斷評價為治愈感染者或者感染抗體獲得者[2]。

隨著當前疫情發展，患者的診斷難度也在不斷上升，部分COVID-19感染患者在發病時期被診斷為陰性，有可能是由于自身病情發展病毒從鼻咽部上處轉移到下呼吸道，所以降低了拭子診斷精準度。分析其COVID-19感染患者的病程變化情況，到現在也沒有明確拭子采集的科學時間[3]。

COVID-19病毒感染的特異性血清IgG抗體的產生時間主要為人群感染之后，通產情況下被檢測對象如果第一次檢測的抗體為陽性而核酸陰性，則需要進行第二次核酸檢測，確保診斷鑒別的精準性，但是其第二次診斷結果依舊為核酸陰性，則證明被檢測對象可能是曾經感染COVID-19病毒。這類對象可能會由于免疫保護的獲得而存在抗體陽性核酸陰性結果，但是其并沒有傳染性[4]。當前新冠肺炎確診病例的鑒別金標準為核酸檢測，血清IgM診斷和血清IgG 診斷并不能作為無癥狀感染者或者病例的診斷標準，血清抗體檢測作為輔助篩查技術為疾病診斷鑒別提供價值，同時還需要聯合CT、血常規等檢查結果持續觀察。

有研究表明IgM/IgG化學發光免疫分析法在COVID-19疑似病例中顯示出高靈敏度和特異性，但是在實際針對核酸檢測陰性而血清抗體陽性人群的后續處理沒有明確的管理制度以及工作思路，在各地面對這類人群需要引起足夠重視[5]。不能單獨依照某一種檢驗鑒別結果進行標準解讀，否則出現誤診結果會給個體人群帶來嚴重負面影響[6]。針對這一情況，需要各醫院專家組成員搜集分析人群病情實際情況，結合影像學、血常規、臨床表現以及不同檢測結果進行綜合分析，不能放過一個疑似患者的同時，降低感染誤診率。

綜上所述，COVID-19病毒感染的鑒別診斷需要從多種角度進行深入分析，結合不同檢測試劑以及檢測方法的對比，篩選出更合理的試劑和方法，為疫情的常態防控更加合理化提供參考。