H型高血壓與亞甲基四氫葉酸還原酶基因的關系①

范巧菊，徐 男，隋小芳，費秀斌，黃佳濱，陳尚君(.佳木斯大學附屬第一醫院，黑龍江 佳木斯 54003；.珠海市人民醫院，廣東 珠海 59000)

高血壓是一種十分常見的疾病，是冠心病、腦卒中、周圍血管疾病、心力衰竭、腎功能不全、視網膜出血、視力障礙的重要影響因素[1]。9.78億成年人(約占據全球成年人的28%)罹患高血壓[2]。遺傳基因是誘發高血壓疾病發生的因素之一[3]。H型高血壓是伴有高同型半胱氨酸血癥，即Hcy≥10 μmol/L[4]。血漿同型半胱氨酸升高是許多不良事件發生的危險因素，如癡呆、阿爾茨海默病、骨折，尤其是心血管疾病[5]。一項來自中國卒中一級預防試驗的多社區隨機研究顯示，在20,702名成人中，只有19.7%的高血壓患者沒有發生H型高血壓[6]。

1 資料與方法

1.1 研究對象

所有研究對象是2018-01～03于佳木斯大學附屬第一醫院就診的高血壓患者279例，其中有139例H型高血壓患者(H組)和140例原發性高血壓患者(HT組)。原發性高血壓組標準納入標準參照2017年《高血壓防治指南》；H型高血壓組納入標準，即符合原發性高血壓且Hcy≥10μmol/L。所有以上研究對象是長期居住在佳木斯地區且沒有血緣關系的漢族人，本研究已經通過佳木斯大學附屬第一醫院倫理委員會的認可，且已經獲得研究對象的知情同意書，同意提供外周靜脈血做基因型檢測分析。

1.2 實驗方法

采集研究對象外周血2mL放入EDTA真空抗凝管中，貯藏于-20℃冰柜中。用鹽析法從冷凍EDTA外周血中提取基因組DNA。采用聚合酶鏈式反應限制片段長度多態性對SNP進行基因型分析，采用高分辨率HRM進行基因型分析。為了保證基因分型的質量，我們隨機選取了三種基因型樣本進行直接測序，結果沒有區別。

1.3 統計學方法

采用SPSS22.0軟件處理。Hardy-Weinberg平衡檢驗驗證樣本的群體代表性，P>0.05為符合HWE。研究樣本均值的組間比較使用成組t檢驗。分類變量用頻數表示，不同基因型間比較采用χ2檢驗。

2 結果

2.1 H組、HT組臨床基本資料的比較

H組、HT組研究對象的臨床基本資料比較，見表1，H組、HT組在年齡組成、性別比例方面無差異，具有可比性(P>0.05)。與HT組比較，H組中Hcy高于HT組，差異有統計學意義，其他臨床指標無明顯差異(P>0.05)。

表1 H組、HT組一般臨床資料的比較

2.2 MTHFR C677T變異位點在兩組間的基因型和等位基因頻率的分布比較

兩組間MTHFR C677T基因多態性的基因型和等位基因頻率分布，見表2。與HT組相比，H組中CC、CT基因型頻率均低于HT組(15.11% vs. 34.28%，43.16% vs.47.86%)；TT基因型頻率明顯高于HT組(41.73% vs. 17.86%)，差異具有統計學意義(P=0.00001)。等位基因C頻率低于HT組(36.70% vs. 58.21%)，等位基因T頻率高于HT組(63.30% vs. 41.79%)，無統計學差異(P=0.85)。

表2 H組、HT組MTHFR C677T基因多態性的基因型及等位基因頻率分布

2.3 不同基因型(CC、CT、TT基因型)的患者Hcy的分布比較

根據MTHFR C677T基因多態性在高血壓患者中的分布，將其分為3組(CC、CT、TT組)來觀察患者Hcy的水平。攜帶TT基因型的患者與CC、CT基因型患者Hcy水平的比較，差異有統計學意義(P<0.05)；攜帶CC基因型與CT基因型患者Hcy水平的比較，差異無統計學意義(P>0.05)。見圖1。

圖1 不同基因型(CC、CT、TT基因型)患者中Hcy的水平

3 討論

臨床研究表明，75%的中國高血壓患者伴有高同型半胱氨酸血癥(HHcy)，即為H型高血壓[7]。Hcy在人體內是含硫氨基酸的中間代謝產物，其中亞甲基四氫葉酸還原酶和半胱氨酸β合成酶的變化可以影響Hcy水平[8]。MTHFR是Hcy代謝途徑中的關鍵酶，MTHFR C>T的錯義突變導致了TT和CC基因型載體的正常酶活性分別降低了70%和35%左右，使得體內同型半胱氨酸水平升高[9]，Hcy濃度的升高會增加對血管內皮的損傷和促進氧化，這將導致血管內皮的損傷和抗氧化劑的不均衡性，促進平滑肌細胞增殖、分化和鈣離子的沉積，減少彈性膠原蛋白，使動脈壁彈性和順應性降低，誘導血管收縮，繼而導致高血壓的發生。本研究顯示H型高血壓患者群體中TT基因型、T等位基因頻率明顯高于原發性高血壓患者，表明攜帶TT基因型人群罹患H型高血壓的風險顯著增高。然而，影響血壓變化的因素較多，MTHFR C677T基因多態性對高血壓患病影響的比重易被其他因素稀釋，因此可能在不同的人群、種族、環境變化中難得出一致的結論。

綜上，本研究證實MTHFR C>T基因與H型高血壓密切相關，同時明確了攜帶TT基因型高血壓患者的Hcy水平比CC和CT基因型顯著增高，為H型高血壓的早期發現提供了臨床基礎。