TLR4與IL-23在鼻息肉組織中的表達及其意義①

吳 建,牟基偉,張愛華 (.佳木斯大學研究生學院, 黑龍江 佳木斯 54007;.佳木斯大學附屬第一醫院耳鼻喉科, 黑龍江 佳木斯 54003)

鼻息肉是鼻腔及鼻竇黏膜上皮組織的慢性炎癥性疾病，為耳鼻喉科的常見疾病之一[1]。前鼻鏡示鼻腔可見一個或多個表面光滑、灰白色、半透明的新生物(小的需要進行鼻腔黏膜的收縮方可看到)，狀如新鮮荔枝肉，觸之柔軟，且可移動，觸之不易出血，也無觸痛。多源于中鼻道或鼻竇腔黏膜。主要癥狀:雙側進行性鼻塞伴有清涕或黏性鼻涕、部分患者有嗅覺障礙、頭面部悶脹沉重感、部分嚴重的患者有聽力下降。鼻息肉好發于篩竇、上頜竇、中鼻道、中鼻甲、篩泡等處。中鼻道結構復雜，參與形成中鼻道的中鼻甲黏膜也易與中鼻道外側壁黏膜相互擠貼或向內與中隔黏膜相互接觸，在正常情況下中鼻道黏膜的血供就比鼻腔其他部位的血供明顯減少，中鼻道微環境缺氧狀態時常發生，其環境稍微變化就會為鼻息肉的形成提供有利的條件[2]。采用免疫組織化學技術分析48例實驗組和40例對照組中TLR4、IL-23的表達和分布。現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇佳木斯大學附屬第一醫院耳鼻喉科2018-12～2019-10收治的48例鼻息肉的患者為研究組，其中男29例，女19例，平均年齡(47.9±6.3)歲，排除復發性鼻息肉，真菌性鼻竇炎等。并同期選擇了40例鼻中隔偏曲的患者手術中正常下鼻甲鼻黏膜上皮組織為對照組，排除慢性鼻竇炎，過敏性鼻炎疾病等，其中男23例，女17例，平均年齡(39.1±5.2)歲，所有入組患者都簽署了知情同意書，本研究已通過醫院倫理常委會的批準。

1.2 方法

患者取臥位全麻后常規消毒鋪巾，鼻腔用呋麻滴鼻液、丁卡因浸濕棉片收縮鼻腔黏膜后，鼻內鏡下用切鉗切取鼻息肉和下鼻甲頭端組織，用生理鹽水沖洗組織，用無菌紗布蘸干，放入福爾馬林液中固定后送到病理科進行標本的進一步處理。采用免疫組化DAB法、石蠟切片脫蠟至水、抗原修復、阻斷內源性過氧化物酶、血清封閉、加一抗、加二抗、DAB顯色、復染細胞核、脫水封片、顯微鏡鏡檢圖像采集分析。試劑盒都從Wuhan servicebio technology CO.,LTD購買。按試劑盒的說明進行了免疫組織化學的染色。石蠟切片免疫組化結果的判讀：蘇木素染細胞核為藍色、DAB顯出的陽性表達為淡黃色或深棕黃色顆粒出現在細胞膜或細胞質中。

1.3 觀察指標

用Image-Pro Plus6.0軟件選取相同的棕黃色作為判斷所有照片陽性的統一標準進行分析與處理。研究組(伴鼻息肉的慢性鼻竇炎患者)以及對照組(正常下鼻甲鼻黏膜上皮組織)各組間TLR4、IL-23表達程度的差異。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 TLR4、IL-23免疫反應

TLR4、IL-23主要表達在上皮細胞、腺體細胞、固有層炎性細胞細胞膜或細胞質中。見圖1～4。

2.2 TLR4在研究組與對照組中的表達

在鼻息肉組織中有表達、在正常下鼻甲鼻黏膜上皮組織中也有表達，但是在鼻息肉組織中的陽性表達率遠遠高于正常下鼻甲鼻黏膜上皮組織中，為差異有統計學意義(P<0.05)。見表1。

2.3 IL-23在研究組與對照組中的表達

在鼻息肉組織中有表達、在正常下鼻甲鼻黏膜上皮組織中也有表達，但是在鼻息肉組織中的陽性表達率遠遠高于正常下鼻甲鼻黏膜上皮組織中，為差異有統計學意義(P<0.05)。見表2。

圖1 TLR4在實驗組中的表達(×200) 圖2 TLR4在對照組中的表達(×400) 圖3 IL-23在實驗組中的表達(×200) 圖4 IL-23在對照組中的表達(×400)

表1 TLR4在研究組與對照組中的表達

表2 IL-23在實驗組與對照組中的表達

2.4 TLR4、IL-23在鼻息肉組織的表達

呈正相關(r=0.516，P<0.05)。見表3。

表3 TLR4與IL-23在研究組中的相關性比較

3 討論

鼻息肉的病因比較復雜與病原微生物、遺傳因素、免疫機制、組織重塑、變態反應、鼻部的解剖結構及其炎癥等因素有關[3]。它是一個慢性炎癥性疾病有大量的嗜酸性粒細胞浸潤。藥物治療無效時我們會選擇功能性鼻竇內窺鏡手術將息肉切除，但是由于各種原因導致術后息肉的再次生長復發，據我們的不完全統計術后復發率可以達到40%左右[4]。隨著我們生活水平的提高，人們的意識也越來越深入，患者對此病的治愈心里也越來越強烈，也引起了對這方面比較有研究的專家教授們的高度重視，他們認識到了炎癥因素的長期刺激及一些細胞因子的出現時是導致鼻息肉產生及其復發率的主要原因。在臨床上我們經常會對鼻息肉患者進行鼻腔結構的檢查，我們發現絕大多數的患者存在鼻腔解剖結構的異常，當感冒受涼時加重了鼻竇感染的機率引起了鼻竇的炎癥反應，這些因素加劇了局部缺氧環境的形成和誘發炎癥因子的聚集，它們和鼻息肉的形成和發展密切相關[1]。

IL-23是OppmannB[2]等人發現的, 它與IL-I2一樣，主要作為前炎細胞因子在炎癥反應中發揮作用，都是含有亞單位p40的異源二聚體細胞因子，有調節免疫的活性[5]。IL-23是由P40和IL-12的P19兩個亞單位通過二硫鍵相連接所構成的異二聚體，只有在兩個亞單位共同的表達在同一細胞內時，異二聚體才能發揮它的生物活性，IL-23有復雜的生物學功能，抗感染免疫和自身免疫在疾病的發病中具有很重要的作用[2]。IL-23通過調節JAK/STAT3信號途徑，從而抑制凋亡因子BCL-2和BCL-XL的過渡表達，引起嗜酸性粒細胞的聚集浸潤，導致鼻息肉的形成。IL-23作用于嗜酸性粒細胞促進其凋亡，當IL-23減少時則嗜酸性粒細胞凋亡延遲從而導致嗜酸性粒細胞的浸潤聚集導致鼻息肉的形成。研究還發現了IL-23在T細胞依賴的免疫反應中起了關鍵性的作用[6]。 IL-23作為Th1細胞因子中的一員，在某些致病因素的作用下，可以改變鼻腔微環境中Th1/Th2細胞因子的比例而對鼻息肉的發病起作用。Toll樣受體是近來新發現的一個介導天然免疫的古老家族，它的發現來自于對果蠅蛋白的研究[7]。TLRs是medzhitor等首次在人類細胞中發現的，后被命名為TLR4[8]。鼻腔作為上呼吸道的第一道天然防預屏障，其黏膜可以分泌細胞因子、殺菌物質來參與炎癥反應和宿主防御。TLRs在鼻-鼻竇黏膜防御反應中也有表達,可以識別病原相關分子模式來快速啟動天然免疫應答，起到保護機體和殺傷病原微生物的作用。TLR4在正常的鼻黏膜中也有表達，當它受到病原微生物的侵害時，可以與其表面成分結合，誘導機體產生免疫反應。它的大量激活及表達上調有利也有弊，其利是當機體遭到病原微生物的入侵時可以通過提高免疫應答反應來應對抵御其入侵[9]，其弊是當機體組織有損傷時可出現炎癥瀑布效應加重組織的損傷延緩病情的康復。雖然TLR4是機體固有免疫的重要組成部分，對病原微生物的抵抗入侵方面意義重大,但是在持續的高表達中固有免疫、特異性免疫也觸發了其免疫自身損傷，若持續的炎癥狀態存在，最終會導致鼻息肉的形成。所以、它們在該機制中也扮演著非常重要的角色，缺一不可。