芒果中有機(jī)酸含量及對小鼠和大鼠消化功能的影響

（攀枝花學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，四川 攀枝花 617000）

芒果是著名的熱帶水果，在我國南方地區(qū)農(nóng)業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展中占有重要地位[1]。芒果入藥在我國有悠久的歷史，中醫(yī)認(rèn)為其有“益胃，生津，止咳”等作用，可用于“食少，咳嗽”等癥[2-3]。現(xiàn)代科學(xué)相關(guān)研究表明，芒果葉、果皮、果核等都具有各自不同的藥用價(jià)值[4-6]。近年來，雖然國內(nèi)外對芒果食品加工的研究主要集中在果實(shí)上[7-8]，但對芒果藥用價(jià)值的研究則主要集中在芒果葉及所含的活性成分上[9-13]，對果實(shí)的藥用價(jià)值研究較少。事實(shí)上，果實(shí)中的有機(jī)酸不僅是決定果實(shí)品質(zhì)和風(fēng)味的重要因素[14-15]，而且可對多種動(dòng)物起到促進(jìn)胃蛋白酶分泌、消化、礦物質(zhì)吸收和抑制病原菌等多方面的積極作用[16-18]。已有研究表明，芒果果實(shí)中的有機(jī)酸屬于檸檬酸型，其含有的有機(jī)酸種類以檸檬酸和蘋果酸為主，此外，還含有少量沒食子酸、酒石酸、琥珀酸、莽草酸、奎尼酸、富馬酸、甲酸等多種有機(jī)酸成分[19-21]，但目前對不同成熟度芒果中有機(jī)酸成分含量的變化及其功效還缺乏研究。本試驗(yàn)對不同成熟度芒果果實(shí)中有機(jī)酸的總量進(jìn)行測定比較，并研究不同成熟度果實(shí)對小鼠和大鼠消化功能的影響，對芒果新型食品或保健品的開發(fā)和深度利用具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

BS250S精密天平：北京賽多利斯天平有限公司；S500數(shù)顯式電熱恒溫水溫箱：南京曉曉儀器設(shè)備有限公司；800D電動(dòng)離心機(jī)：江蘇金怡儀器科技有限公司；CX40生物顯微鏡：日本奧林巴斯公司；150L消毒冷藏冰柜：河南新飛電器有限公司。

復(fù)方地芬諾酯：江蘇平光制藥有限責(zé)任公司；伊文思藍(lán)、NaOH、HCl、乙醚（均為分析純）：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；中藥材梔子：攀枝花同心堂藥業(yè)有限公司，粉碎過20目篩；芒果葉為采自攀枝花的凱特芒果的嫩葉，烘干，粉碎過20目篩。測定用水為去離子水。

蛋白管：攀枝花市醫(yī)學(xué)研究中心實(shí)驗(yàn)室自制，將內(nèi)徑2 mm的毛細(xì)玻管截成10 cm長，取蛋清適量充分打勻，紗布過濾，利用虹吸原理將毛細(xì)玻璃管灌滿蛋清，然后將毛細(xì)玻管置于85℃熱蒸氣中使蛋白質(zhì)凝固，冷卻即成[22]。

1.2 試驗(yàn)材料及處理

1.2.1 測定樣品處理

以攀枝花當(dāng)?shù)刂髟悦⒐贩N——?jiǎng)P特作為研究對象，分別取生果、綠熟果、熟果進(jìn)行測定。生果指已經(jīng)完全膨大，但未達(dá)成熟采收標(biāo)準(zhǔn)的果實(shí)（手指用力按無彈性，果肉白色，果核脆嫩）；綠熟果指剛達(dá)成熟采收標(biāo)準(zhǔn)，但還沒有變軟達(dá)到食用標(biāo)準(zhǔn)的果實(shí)（手指用力按有輕微彈性，果肩渾圓，果肉黃白色，果核變硬）；熟果指綠熟果采收后、經(jīng)后熟達(dá)到食用標(biāo)準(zhǔn)的果實(shí)（手指輕按感覺發(fā)軟，果肩渾圓，果肉黃色，果核硬而堅(jiān)韌）。將3種果實(shí)分別切片，55℃烘干，粉碎過20目篩，然后分別取樣進(jìn)行測定。

1.2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)樣品制備

供試樣品分4組。A組：生果干片1 000 g；B組：綠熟果干片1 000 g；C組：熟果干片1 000 g；D組：綠熟果干片1000g，梔子粉150g；E組：綠熟果干片1000g，芒果葉粉150 g；F組：綠熟果干片1 000 g，芒果葉粉75 g，梔子粉75 g。各組樣品加水煮沸提取3次，每次30 min，3次提取液合并，加入5%三氯蔗糖溶液5 mL、山梨酸鉀4 g溶解后，定容到8 L，滅菌，分別得到供試液 A、B、C、D、E 和 F，冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

6周齡 ～8周齡SPF級昆明系小鼠和60只幼年SPF級SD大鼠由長沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號：SCXK（湘）2014-0011。小鼠80只，雌、雄各半，體質(zhì)量18 g～22 g。大鼠 70只，雌雄各半，4周齡～5 周齡，體質(zhì)量（140±25）g。雌鼠群養(yǎng)，雄鼠單籠飼養(yǎng)，室溫（22±3）℃，相對濕度（60±10）%，室內(nèi)噪聲＜55dB，光照時(shí)間每日 7：00 ～18：00，飼喂普通飼料，自由采食和飲水，實(shí)驗(yàn)前于實(shí)驗(yàn)環(huán)境適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

1.3 有機(jī)酸測定

按照GB/T 12456—2008《食品中總酸的測定》標(biāo)準(zhǔn)[23]測定芒果樣品中有機(jī)酸含量。精密稱取約20 g樣品粉末，倒入250 mL容量瓶中，加入200 mL約80℃的沸水，置沸水浴中煮沸30 min（搖動(dòng)2次～3次），取出冷卻到室溫（25℃ ～30℃），定容到250 mL，用快速濾紙過濾，收集濾液進(jìn)行測定。取40 mL濾液，置250 mL三角瓶中，加50 mL水和0.2 mL 1%酚酞指示劑，用0.1 mol/L NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定液滴定至微紅色30 s不褪色，記錄消耗的NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定液體積（Va，mL）。另用水代替樣品溶液，相同方法進(jìn)行空白滴定，記錄消耗的NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定液體積（Vb，mL），按照下列公式計(jì)算芒果中有機(jī)酸含量：

式中：c為NaOH標(biāo)準(zhǔn)滴定液的摩爾濃度，mol/L；K為酸的換算系數(shù)，以檸檬酸計(jì)，值為0.064；F為試液稀釋倍數(shù)；m為樣品質(zhì)量，g。

1.4 小鼠小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)

參考文獻(xiàn)[22，24]方法，取小鼠80只，隨機(jī)均分為空白對照組、模型對照組和6個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組10只。6個(gè)實(shí)驗(yàn)組每日1次分別灌胃給予供試液A、B、C、D、E、F，灌胃量為1 mL/100 g BW，空白對照組和模型對照組小鼠灌胃給予同等劑量無菌水，連續(xù)灌胃30 d。小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)前，小鼠禁食不禁水12 h。末次給藥0.5 h后，空白對照組給無菌水，模型對照組、實(shí)驗(yàn)組分別按1 mL/100 g BW劑量灌胃給予0.05%復(fù)方地芬諾酯進(jìn)行便秘模型造模。0.5 h后，各組小鼠分別按1 mL/100 g BW劑量灌胃給予0.5%伊文思藍(lán)溶液指示劑。25min后，乙醚麻醉下頸椎脫臼處死小鼠，打開腹腔分離腸系膜，剪取幽門至回盲部的腸管，置于托盤上拉直，測量腸管長度為“小腸總長度”，測量幽門至墨汁前沿為“墨汁推進(jìn)長度”。按下式計(jì)算墨汁推進(jìn)率：

1.5 大鼠總增重、攝食量、食物利用率及消化酶測定

參考文獻(xiàn)[24-25]方法，取SD大鼠50只，隨機(jī)均分為空白對照組和6個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每組10只。6個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別灌胃給予 A、B、C、D、E、F 6 種不同的供試液，灌胃量為1 mL/100 g BW，空白對照組給予同等劑量無菌水灌胃，連續(xù)灌胃30 d。每周1次記錄各組大鼠體質(zhì)量和攝食量，并按照下式計(jì)算食物利用率：總食物利用率/%=總增重（g）/總攝食量（g）×100。

消化酶測定[25]：測定前，各組大鼠禁食不禁水24 h，乙醚麻醉后，幽門結(jié)扎收集各組大鼠4 h內(nèi)分泌的胃液，并計(jì)算每小時(shí)胃液量。取1 mL胃液放人試管中，加人0.05 mol/L鹽酸溶液15 mL，混勻，放入2根蛋白管，封口，放人37℃恒溫箱內(nèi)孵育24 h，再取出蛋白管，測量蛋白管兩端透明部分的長度（mm），并以四端的結(jié)果計(jì)算平均值，按照下式計(jì)算胃蛋白酶活性和胃蛋白酶排出量：胃蛋白酶活性單位（U）=四端蛋白管透明部分長度均值的平方×16，胃蛋白酶排出量/（U/h）=胃蛋白酶活性×每小時(shí)胃液量。

1.6 數(shù)據(jù)處理

用SPSS 19.0對試驗(yàn)數(shù)據(jù)做差異顯著性分析，采用最小顯著差異法（least-significant difference，LSD）。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同成熟度果實(shí)中有機(jī)酸含量比較

不同成熟度果實(shí)中有機(jī)酸含量測定結(jié)果見表1。

表1 不同成熟度果實(shí)中有機(jī)酸含量（n=3，±s）Table 1 Content of organic acids in fruits with different maturity（n=3，±s）

表1 不同成熟度果實(shí)中有機(jī)酸含量（n=3，±s）Table 1 Content of organic acids in fruits with different maturity（n=3，±s）

注：不同字母表示差異顯著，P＜0.05。

樣品 有機(jī)酸含量/%生果 1.02±0.15b綠熟果 1.63±0.31a熟果 0.12±0.06c

不同成熟期果實(shí)中有機(jī)酸含量存在顯著差異，綠熟期果實(shí)分別是生果和熟果的1.6倍和13.6倍，說明芒果中有機(jī)酸的累積在綠熟期達(dá)到最高，之后隨著后熟過程大幅度降低。

2.2 小鼠小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

小鼠小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

表2 小鼠小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=10，±s）Table 2 Results of intestinal movement in mice（n=10，±s）

表2 小鼠小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=10，±s）Table 2 Results of intestinal movement in mice（n=10，±s）

注：同列數(shù)據(jù)帶不同字母表示差異顯著，P＜0.05。

組別 小腸全長/cm 墨汁前沿距幽門距離/cm 墨汁推進(jìn)率/%空白對照組 43.8±2.6 25.1±2.3 57.3±4.7a模型對照組 45.4±2.9 12.2±1.9 26.9±5.2f A 實(shí)驗(yàn)組 46.2±3.6 16.2±2.2 35.1±5.6d B 實(shí)驗(yàn)組 45.2±3.3 17.6±2.7 38.9±8.5c C 實(shí)驗(yàn)組 44.8±2.8 14.2±3.2 31.7±4.8e D 實(shí)驗(yàn)組 44.9±2.1 19.4±3.1 43.2±6.8b E 實(shí)驗(yàn)組 42.5±4.4 18.6±2.7 43.8±6.2b F 實(shí)驗(yàn)組 45.4±3.7 20.0±3.4 44.1±7.2b

模型對照組小鼠墨汁推進(jìn)率顯著低于空白對照組，表明便秘模型造模成功。與模型對照組小鼠比較，各實(shí)驗(yàn)組小鼠墨汁推進(jìn)率都顯著增加。A、B、C 3個(gè)實(shí)驗(yàn)組之間存在顯著差異，說明成熟度對墨汁推進(jìn)率有顯著影響，墨汁推進(jìn)率由高到低依次為綠熟果>生果>熟果。D、E、F實(shí)驗(yàn)組間的墨汁推進(jìn)率無顯著差異，但都顯著高于B實(shí)驗(yàn)組，說明梔子粉和芒果葉粉都可顯著提高芒果的墨汁推進(jìn)率。

2.3 大鼠總增重、攝食量、食物利用率測定結(jié)果分析

大鼠不同時(shí)期的體重變化見表3，大鼠總增重、攝食量和食物利用率測定分析結(jié)果見表4。

無論從總增重來看，還是從總食物利用率來看，A、B實(shí)驗(yàn)組與空白對照組相比均沒有顯著差異，而C實(shí)驗(yàn)組顯著低于空白對照組，這說明生果和綠熟果對大鼠總增重和食物利用率都沒有顯著影響，但熟果會(huì)降低總增重和食物利用率。和B實(shí)驗(yàn)組相比，D實(shí)驗(yàn)組總增重顯著增加，總食物利用率沒有顯著差異，說明綠熟果加入梔子粉后可提高大鼠總增重，但對總食物利用率沒有影響。和B實(shí)驗(yàn)組相比，E實(shí)驗(yàn)組的總食物利用率顯著增加，而總增重沒有顯著差異，說明綠熟果加入芒果葉粉后可提高大鼠總食物利用率，但對總增重沒有影響。和B實(shí)驗(yàn)組相比，F(xiàn)實(shí)驗(yàn)組的總食物利用率和總增重都顯著增加，說明綠熟果加入芒果葉和梔子的混合物后，既可提高大鼠的總增重（與D相當(dāng)），又可提高總食物利用率（與E相當(dāng)）。

表3 大鼠體質(zhì)量變化（n=10，±s）Table 3 Changes of body weight in rats（n=10，±s） g

表3 大鼠體質(zhì)量變化（n=10，±s）Table 3 Changes of body weight in rats（n=10，±s） g

組別 實(shí)驗(yàn)前 灌胃第7天 灌胃第14天 灌胃第21天 灌胃第30天空白對照組 134.4±4.6 192.2±6.4 242.6±8.6 298.6±12.2 337.9±14.8 A 實(shí)驗(yàn)組 135.6±5.8 196.2±7.2 248.6±11.2 288.4±10.4 340.0±18.2 B 實(shí)驗(yàn)組 136.4±5.3 197.6±5.7 245.2±7.6 292.4±13.2 340.6±14.8 C 實(shí)驗(yàn)組 135.2±4.8 194.2±6.2 247.4±12.2 296.6±14.8 316.4±12.6 D 實(shí)驗(yàn)組 129.9±5.1 189.2±7.4 254.8±8.2 285.9±15.2 364.5±18.8 E 實(shí)驗(yàn)組 131.2±4.5 191.5±8.2 247.2±10.4 285.4±8.6 334.0±12.4 F 實(shí)驗(yàn)組 139.2±2.9 188.7±5.6 244.8±9.5 299.6±11.6 376.6±16.5

表4 大鼠總增重和食物利用率比較（n=10，±s）Table 4 Comparison of total weight gain and food utilization rate in rats（n=10，±s）

表4 大鼠總增重和食物利用率比較（n=10，±s）Table 4 Comparison of total weight gain and food utilization rate in rats（n=10，±s）

注：同列不同字母表示差異顯著，P＜0.05。

組別 總增重/g 總攝食量/g 總食物利用率/%空白對照組 203.5±13.4b 788.8±35.6 25.8±1.4b A 實(shí)驗(yàn)組 204.4±16.8b 780.2±42.2 26.2±1.6b B 實(shí)驗(yàn)組 204.2±20.2b 800.8±46.2 25.5±1.9b C 實(shí)驗(yàn)組 181.2±16.4c 808.9±38.6 22.4±1.5c D 實(shí)驗(yàn)組 234.6±13.6a 942.2±23.8 24.9±0.8b E 實(shí)驗(yàn)組 202.8±12.8b 685.1±32.8 29.6±1.8a F 實(shí)驗(yàn)組 237.4±18.2a 758.5±31.6 31.3±1.6a

2.4 大鼠胃蛋白酶活性及排出量測定結(jié)果分析

各組大鼠測得的胃液量、胃蛋白酶活性及胃蛋白酶排出量見表5。

表5 大鼠胃液量、胃蛋白酶活性及排出量比較（n=10，±s）Table 5 Gastric juice volume，pepsin activity and output in rats（n=10，±s）

表5 大鼠胃液量、胃蛋白酶活性及排出量比較（n=10，±s）Table 5 Gastric juice volume，pepsin activity and output in rats（n=10，±s）

注：同列不同字母表示差異顯著，P＜0.05。

組別胃液量/（mL/h）胃蛋白酶活性/U胃蛋白酶排出量/（U/h）空白對照組 0.85±0.22d 92±21d 78±22e A 實(shí)驗(yàn)組 1.14±0.31c 116±25c 132±34d B 實(shí)驗(yàn)組 1.31±0.26b 135±34b 177±42c C 實(shí)驗(yàn)組 0.88±0.18d 90±24d 79±26e D 實(shí)驗(yàn)組 1.49±0.35a 137±41b 204±58b E 實(shí)驗(yàn)組 1.30±0.32b 157±37a 204±32b F 實(shí)驗(yàn)組 1.52±0.24a 161±28a 245±24a

和空白對照組相比，C實(shí)驗(yàn)組的胃液量、胃蛋白酶活性和排出量差異都不顯著，而A、B實(shí)驗(yàn)組的這3個(gè)指標(biāo)都顯著增加，說明熟果并不能顯著提高大鼠的胃液量、胃蛋白酶活性和排出量，而生果、綠熟果都能使其顯著增加。和B實(shí)驗(yàn)組相比，D、E、F實(shí)驗(yàn)組的胃液量、胃蛋白酶活性或胃蛋白酶排出量存在顯著差異，這說明綠熟果中加入梔子或芒果葉后會(huì)顯著影響大鼠的胃液量、胃蛋白酶活性或胃蛋白酶排出量。加入梔子粉后（D實(shí)驗(yàn)組），雖不能提高綠熟果對大鼠的胃蛋白酶活性，但可顯著提高胃液量，從而顯著提高胃蛋白酶排出量。加入芒果葉粉后（E實(shí)驗(yàn)組），雖不能提高綠熟果對大鼠的胃液量，但可顯著提高其胃蛋白酶活性，從而顯著提高胃蛋白酶排出量。加入芒果葉和梔子的混合粉后（F實(shí)驗(yàn)組），則既可提高綠熟果對大鼠的胃液量，又可顯著提高胃蛋白酶活性，從而較大幅度提高胃蛋白酶排出量。

3 結(jié)論與討論

不同成熟度果實(shí)中有機(jī)酸含量存在顯著差異，綠熟果有機(jī)酸含量分別是生果和熟果的1.6倍和13.6倍。不同成熟度果實(shí)在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胃腸動(dòng)力、胃液量、胃蛋白酶活性及胃蛋白酶排出量、總增重和食物利用率等方面存在顯著差異。熟果雖然可以顯著增加胃腸動(dòng)力，但對胃液量、胃蛋白酶活性及胃蛋白酶排出量沒有顯著影響，并且顯著降低動(dòng)物的總增重和食物利用率。生果和綠熟果都能顯著增加胃腸動(dòng)力、提高胃液量、胃蛋白酶活性及胃蛋白酶排出量，但二者對動(dòng)物的總增重和食物利用率卻都沒有顯著影響。綠熟果中加入梔子粉后，可顯著提升其對動(dòng)物的胃腸動(dòng)力、胃液量、胃蛋白酶排出量和總增重，但對胃蛋白酶活性和總食物利用率沒有顯著影響。綠熟果中加入芒果葉粉后，可顯著提升其對動(dòng)物的胃腸動(dòng)力、胃蛋白酶活性和胃蛋白酶排出量、總食物利用率，但對胃液量和總增重沒有顯著影響。綠熟果中減半加入芒果葉和梔子混合粉后，可對上述全部功能指標(biāo)都起到顯著提升作用。

胃腸道是營養(yǎng)物質(zhì)攝取、消化與吸收的器官，胃腸動(dòng)力和消化酶活性是評價(jià)消化系統(tǒng)功能的主要指標(biāo)。在此實(shí)驗(yàn)進(jìn)行期問，各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物均未出現(xiàn)拒食現(xiàn)象，生長活動(dòng)正常。參照《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003版）》有關(guān)規(guī)定，動(dòng)物體重增重、食物利用率，小腸運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)和消化酶測定指標(biāo)中任2個(gè)結(jié)果陽性，即可判定該受試樣品實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性[24]。按此標(biāo)準(zhǔn)可判定，熟果沒有促進(jìn)消化功能作用，而生果和綠熟果都有促進(jìn)消化功能作用，并且綠熟果的效果顯著優(yōu)于生果。結(jié)合不同成熟度芒果有機(jī)酸含量測定結(jié)果分析來看，芒果對動(dòng)物消化功能的促進(jìn)作用，呈現(xiàn)隨著果實(shí)中有機(jī)酸含量的增加而增強(qiáng)的趨勢，這與以往相關(guān)研究中有機(jī)酸可提高動(dòng)物消化功能和生長能力的類似分析一致[16-18]。

本試驗(yàn)，梔子粉和芒果葉粉都能提高綠熟果對大鼠消化功能的促進(jìn)作用。這可能和芒果果實(shí)本身的藥性有關(guān)系。中醫(yī)普遍認(rèn)為，芒果果實(shí)性溫，且“性帶濕毒”，因此，長期食用果實(shí)很容易產(chǎn)生“上火”等現(xiàn)象；而芒果葉則藥性寒涼，有清熱解毒、化痰止咳作用[2-3]。因此，本試驗(yàn)中為減少芒果果實(shí)的溫?zé)嶂院筒涣挤磻?yīng)，特別設(shè)計(jì)了將梔子、芒果葉等寒涼之品與芒果果實(shí)配合使用的試驗(yàn)，并取得了良好效果。沒有加梔子或芒果葉粉的實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物大都具有大便干結(jié)等現(xiàn)象，并且飼喂時(shí)間越長越嚴(yán)重，而加梔子或芒果葉粉的實(shí)驗(yàn)組大便則始終較為松軟正常。梔子清火燥濕，芒果葉中含有豐富的芒果苷，具有良好的抗炎、抗氧化和清除自由基等作用[9-13]，二者和芒果果實(shí)配合使用，正好可以抑制芒果的溫?zé)岷蜐穸局裕嗟靡嬲谩Ｒ酝难芯孔C實(shí)，芒果葉對魚類、禽類等動(dòng)物的生長都具有良好的促進(jìn)作用[26-27]，這也與本試驗(yàn)研究得到的結(jié)果類似。本試驗(yàn)初步證實(shí)，芒果綠熟果與梔子和芒果葉相配應(yīng)用，能更顯著地提高其對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的消化功能、總增重和食物利用率，這為芒果進(jìn)行飼料或藥用開發(fā)提供了新的啟示，但具體應(yīng)加入多少比例為最優(yōu)，還有待進(jìn)一步研究。