口腔微生物菌群分布與兒童齲病的關系研究

馬 雙,李金義,劉朝基,蘭福升,趙彩霞,呂 婕,楊志偉

人口腔中菌群數量有700多種，其中鏈球菌群、韋榮氏菌群、奈瑟氏菌群是口腔中最常見的菌群，正常菌群過度繁殖會導致齲齒的發生和進展[1-2]。口腔內溫度、濕度適宜，營養來源豐富，為菌斑內細菌生長繁殖提供必要條件，也形成了動態平衡菌斑微生態系統[3]，當這種微生態系統平衡被打破，有致齲能力的產酸耐酸菌等增多，隨之菌斑出現即產生齲病[4]。因此，研究致齲菌與齲病發生發展的關系對預防齲病的發生有重要意義[5]。而致齲菌與兒童齲病發生發展的關系鮮有報道，本文旨在探討口腔微生物菌群分布對兒童齲病的影響。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選取本院2018年5月-2020年5月有齲(dmfs>6)患兒為患齲組，同期無齲(dmfs=0)患兒為對照組，每組30例。患齲組患兒男16例，女14例，年齡3～12歲，平均年齡(7.2±2.3)歲；對照組患兒男15例，女15例，年齡2～12歲，平均年齡(6.9±2.1)歲。2組患者基礎資料比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 樣本采集：指導患兒用清水漱口，采集區域用無菌生理鹽水沖洗，棉卷作隔濕處理后刮取牙菌斑，對照組刮取正常牙面牙菌斑，患齲組刮取齲齒牙面牙菌斑，置放于100 μl TE緩沖液離心管中，經冰浴后轉運至實驗室，-20 ℃環境儲存。

1.2.2 菌斑DNA提取：樣本離心3 min后棄上清液，參照DNA提取試劑盒(Invitrogen公司)說明書方法提取。

1.2.3 16S rDNA PCR擴增(V3～V5)參照該片區引物序列：341f:5’-CCTACGGGAGGCAGCAG-3’；907r：5’-CCGTCAATTCCTTTGAGTTT-3’，培養大腸桿菌相應的PCR產物。PCR程序流程：95 ℃ 5 min預變形，30循環；95 ℃ 30 s變性，58 ℃ 30 s退火，72 ℃ 30 s伸延，72 ℃ 10 min伸延。

1.2.4 DGGE分析：取用5 μl PCR產物經冰乙醇2.5倍體積壓縮沉淀，使用20 μl無菌水進行溶解。運用……