MCV對(duì)不同方法血小板計(jì)數(shù)結(jié)果的影響

張 澤,趙強(qiáng)元

解放軍總醫(yī)院第六醫(yī)學(xué)中心檢驗(yàn)科，北京 100048

血細(xì)胞分析儀是臨床檢驗(yàn)應(yīng)用最為普遍的儀器，具有快速、重復(fù)性好等特點(diǎn)，為臨床提供準(zhǔn)確、有效的血細(xì)胞參數(shù)[1]。血小板計(jì)數(shù)檢測(cè)是臨床血細(xì)胞計(jì)數(shù)檢驗(yàn)中的一項(xiàng)重要的分析指標(biāo)，對(duì)多種臨床疾病的診斷及治療具有重要意義，并且與疾病的發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)[2-6]。而臨床血小板檢測(cè)中易受溶血、脂血、紅細(xì)胞碎片等因素影響導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)假性減低和假性增高[7]。Sysmex公司XN-2000血細(xì)胞分析儀可采用電阻抗法(PLT-I)和熒光染色法(PLT-F)對(duì)血小板進(jìn)行計(jì)數(shù)分析，其中PLT-I具有快速、重復(fù)性好等特點(diǎn)，但易受小紅細(xì)胞和紅細(xì)胞碎片的影響；PLT-F應(yīng)用血小板特異性染料結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行血小板計(jì)數(shù)，對(duì)非血小板顆粒具有較強(qiáng)的抗干擾能力。本次研究分析不同范圍MCV這兩種方法計(jì)數(shù)血小板結(jié)果的差異，并結(jié)合直方圖及散點(diǎn)圖，對(duì)其準(zhǔn)確性及干擾因素進(jìn)行分析，為實(shí)驗(yàn)室準(zhǔn)確檢測(cè)血小板計(jì)數(shù)提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源 隨機(jī)收集本院門診、住院患者及體檢者286份標(biāo)本，根據(jù)MCV結(jié)果分為3組：A組124例，MCV<72 fL；B組62例，72 fL≤MCV≤82 fL；C組106例，MCV>82 fL。

1.2儀器與試劑 Sysmex XN-2000全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及其配套試劑、質(zhì)控品，XN-2000血細(xì)胞分析儀定期校準(zhǔn)，在相關(guān)監(jiān)測(cè)指標(biāo)在控的前提下完成標(biāo)本檢測(cè)。

1.3方法 患者晨起空腹?fàn)顟B(tài)時(shí)，采集肘正中靜脈血2 mL，以乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)實(shí)施抗凝，以Sysmex XN-2000全自動(dòng)血液分析儀分別采用PLT-I和PLT-F在2 h內(nèi)完成檢測(cè)。記錄A組標(biāo)本PLT-I通道血小板直方圖和PLT-F通道熒光散點(diǎn)圖結(jié)果。

2 結(jié) 果

2.1兩種檢測(cè)方法血小板計(jì)數(shù)比較 見(jiàn)表1，A組PLT-I與PLT-F兩種檢測(cè)方法比較，血小板計(jì)數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；B組與C組這兩種檢測(cè)方法比較，血小板計(jì)數(shù)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表1 兩種檢測(cè)方法血小板計(jì)數(shù)結(jié)果比較

2.2PLT-I血小板直方圖和PLT-F散點(diǎn)圖分析 觀察PLT-I血小板直方圖，MCV<72 fL時(shí)PLT-I血小板直方圖曲線尾部抬高，同時(shí)紅細(xì)胞直方圖左側(cè)出現(xiàn)曲線抬高，提示碎片或小紅細(xì)胞增多(圖1A)。PLT-F通道使用半導(dǎo)體激光的流式細(xì)胞計(jì)數(shù)法，描畫出二維散點(diǎn)圖，X軸表示側(cè)向熒光強(qiáng)度(SFL)，Y軸表示前向散射光強(qiáng)度(FSC)，可較好區(qū)分血小板、紅細(xì)胞、白細(xì)胞和碎片各組分(圖1B)。

注：A為PLT-I血小板直方圖；B為PLT-F散點(diǎn)圖。

3 討 論

血小板是由骨髓造血組織中的巨核細(xì)胞產(chǎn)生，具有維持血管內(nèi)皮完整性以及黏附、聚集、釋放、促凝和血塊收縮等功能，在止血、傷口愈合、炎性反應(yīng)及器官移植排斥等生理和病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用[8]。有研究報(bào)道，血小板計(jì)數(shù)結(jié)果可為血液性疾病、腫瘤、炎性腸病、燒傷、肝病等疾病的治療及預(yù)后提供重要診療信息，同時(shí)也是診斷血栓及出血性疾病的重要指標(biāo)之一[2-6]。臨床血小板計(jì)數(shù)檢測(cè)主要有血液分析儀、顯微鏡及流式細(xì)胞儀等方法，顯微鏡法及流式細(xì)胞儀法由于操作復(fù)雜，耗費(fèi)大，不適于臨床常規(guī)檢測(cè)；血液分析儀方法重復(fù)性好，自動(dòng)化程度高，精密度和準(zhǔn)確性高，是目前臨床檢測(cè)血小板最常用的方法[1]。臨床血液分析儀檢測(cè)血小板大多數(shù)采用PLT-I原理，即根據(jù)血細(xì)胞相對(duì)非導(dǎo)電的性質(zhì)，懸浮于電解質(zhì)溶液中的血小板顆粒在通過(guò)計(jì)數(shù)小孔時(shí)引起電阻的變化，以此為基礎(chǔ)對(duì)血小板進(jìn)行計(jì)數(shù)，該方法具有快速、重復(fù)性好的特點(diǎn)，但易受細(xì)胞碎片及小紅細(xì)胞的干擾，導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)假性增高。PLT-F是對(duì)血小板核酸成分進(jìn)行熒光染色，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)前向散射光和側(cè)向熒光強(qiáng)度，分別檢測(cè)細(xì)胞大小和細(xì)胞內(nèi)容物及顆粒，根據(jù)檢測(cè)數(shù)據(jù)繪制出二維散點(diǎn)圖進(jìn)行計(jì)數(shù)，對(duì)非血小板顆粒具有較強(qiáng)的抗干擾能力，可較好區(qū)分血小板、紅細(xì)胞、白細(xì)胞和碎片各組分，準(zhǔn)確對(duì)血小板進(jìn)行計(jì)數(shù)[7,9]。

臨床多種疾病可導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)假性升高，如小細(xì)胞貧血、溶血性貧血患者血液中出現(xiàn)小紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片，血小板直方圖易與紅細(xì)胞直方圖重疊，干擾血小板計(jì)數(shù)；影響臨床疾病的判斷，需要對(duì)血小板計(jì)數(shù)結(jié)果進(jìn)行校正[10-12]。實(shí)驗(yàn)室目前將MCV正常范圍定為82～100 fL，MCV<72 fL定為推片復(fù)檢規(guī)則，其判斷的依據(jù)參考我國(guó)血液學(xué)專家小組提出的12條血細(xì)胞自動(dòng)計(jì)數(shù)顯微鏡復(fù)檢陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)，但手工操作繁瑣不適于大批量標(biāo)本檢測(cè)。研究證明PLT-F具有較強(qiáng)的抗紅細(xì)胞碎片干擾能力，準(zhǔn)確性高，可正確計(jì)數(shù)血小板。本研究結(jié)合實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢規(guī)則，根據(jù)MCV結(jié)果將血常規(guī)標(biāo)本分為3組，記錄PLT-I及PLT-F兩種方法計(jì)數(shù)血小板結(jié)果，統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，A組PLT-I和PLT-F血小板計(jì)數(shù)結(jié)果之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，B組和C組PLT-I和PLT-F血小板計(jì)數(shù)結(jié)果之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；觀察A組血小板直方圖中可發(fā)現(xiàn)尾部抬高，熒光染色圖示可見(jiàn)碎片及紅細(xì)胞各組分，說(shuō)明紅細(xì)胞對(duì)PLT-I和PLT-F計(jì)數(shù)檢測(cè)方法具有一定影響，小紅細(xì)胞及紅細(xì)胞碎片增多時(shí)PLT-I血小板計(jì)數(shù)假性增高，通過(guò)PLT-F血小板計(jì)數(shù)可以得到校正，與報(bào)道相符。因此，可用PLT-I進(jìn)行常規(guī)檢測(cè)，當(dāng)MCV<72 fL時(shí)應(yīng)用PLT-F進(jìn)行復(fù)檢可有效避免小紅細(xì)胞和紅細(xì)胞碎片增多導(dǎo)致的血小板計(jì)數(shù)假性增高。