菌種活化操作方法

菌種是我國重要的生物資源，保藏適當的菌種需要正確的活化方法來獲得純培養物，本文結合多年從事食品微生物檢驗的工作經歷，簡要介紹常規的菌種活化操作方法。

菌種活化就是將保藏狀態的微生物菌種放入適合其生長繁殖的的培養物中進行培養，通過逐級擴大培養進而獲得活力旺盛、數量足夠的純培養物。通常我們工作中使用的工作菌種需經過要2-3代的復壯過程，因為菌種的保存條件以及培養條件不盡相同，所以需要活化讓菌種逐漸適應培養環境[1]。

一般菌種臨時存放及活化方法

采用低溫保存管保存菌種，應存放于－20℃ ～ －80℃的低溫條件下。準備36±1℃的70-75%酒精浴槽（若以水浴取代，應確保所用水中微生物污染得到控制），事先應在浴槽放置小試管架或保存管架等，液面要低于管塞或管蓋。將低溫保存管從低溫保存條件中取出，置于36±1℃的浴槽內的管架上。不斷輕微搖動低溫保存管，液面不可高至管塞，直至冰完全溶解（大概需要2min左右）。

無菌培養操作方法

用無菌微量吸管，從已溶解的低溫保存管中吸取1-2 滴菌液，滴入指定的固態培養基一邊緣附近，以劃線或涂布法接種于培養基。也可用滅菌金屬環蘸取菌液后，以劃線或涂布法接種于培養基。

待菌液吸收完全后，將接種好的培養基倒置放于指定溫度的培養箱中進行培養。

平板劃線分離操作方法

平板劃線分離法是指把混雜在一起的微生物用接種環在平板培養基表面通過分區劃線稀釋，經培養后生長繁殖成單菌落，通常把這種單菌落當作待分離微生物的純種。有時這種單菌落并非都由單個細胞繁殖而來的，所以要反復分離多次才可得到純菌種。

手持金屬接種環，將接種環（共約5 公分）置于酒精燈外焰燒至火紅，并不斷來回燒烤金屬固定桿之前約10 公分，等待幾秒鐘后，將接種環前端輕觸培養基邊緣凝膠，待接種環徹底冷卻后，沾黏菌滴，由培養基邊緣向中央輕輕橫劃，直到涵蓋1/3培養基為止。

灼燒接種環，冷卻后，旋轉培養基自1 區涂布的邊緣再橫劃數條線到未接種的區域。

重復2的動作完成。

灼燒接種環，將接種環歸位。

一般操作過程

以無菌操作，用無菌微量吸管，從已溶解的管中吸取50μL（或1-2 滴）的菌液，滴入固態指定培養基某一邊緣附近，以劃線法接種于培養基。

將接種好的培養基置于指定溫度的培養箱中培養。

對于常規細菌應用無菌吸管，吸取0.3-0.5mL 指定的液體培養基，滴入內管中，并輕微震蕩（也可用該吸管反復吹打協助），直至均勻懸浮。

對于霉菌、酵母菌應用無菌吸管，吸取0.3-0.5mL 無菌水，滴入內管中，待干燥粉末溶解后，以無菌吸管吸取并滴入約含有5mL無菌水的小試管內，輕微震蕩均勻后，靜置30-60min。

取0.1-0.2mL 菌體懸浮液滴于平板培養基上，劃線分離培養或做成一系列的稀釋，用無菌L 棒均勻涂布，檢驗菌種的純度及活化情況，剩余的菌液則全部移入相應的液體培養基內，按指定的溫度進行培養。

某些菌種經過冷凍干燥保存后，遲滯期可能較長，必須培養二倍時間后才可長出，且再經過一、二次繼代培養后才能正常生長。若經以上方法處理后仍培養失敗，則視為不能活化。