早期2型糖尿病患者血清miR-125b表達與頸動脈內-中膜厚度的相關性*

李江雁, 陳玉鳳, 吳蘇豫, 張瑩, 周艷紅

新鄉市中心醫院內分泌科(河南新鄉 453000)

2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus，T2DM)又稱成人發病型糖尿病，約占糖尿病患病人數的90%，其主要表現為胰島素功能受損，血糖升高[1]。近年來我國T2DM患病人數呈逐年上升趨勢，其中以動脈粥樣硬化為病理基礎的大血管病變是引起T2DM患者死亡的重要并發癥，嚴重威脅人們的身體健康[2]。研究表明，頸動脈內-中膜厚度(carotid intima-media thickness，CIMT)是評價早期動脈粥樣硬化的重要指標，與T2DM患者動脈損傷程度及范圍密切相關[3]。因此，對早期血管病變影響因素的篩查對于預測早期T2DM患者心血管事件的發生十分重要。miR-125b是miRNA的一種，越來越多的研究表明[4]，miR-125b參與T2DM發病，可能是診斷T2DM的潛在新型生物標志物。然而miR-125b在早期T2DM患者血清中的表達情況，及其與CIMT的關系仍不明確。基于此，本研究通過檢測早期T2DM患者血清中miR-125b表達水平，并探討其與頸動脈內-中膜厚度的相關性，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年5月至2018年10月本院收治的230例早期T2DM患者為研究對象，男124例，女106例，年齡40～80歲，平均(50.81±15.18)歲，納入標準：(1)符合早期T2DM疾病診斷標準[5]；(2)經空腹血糖水平、葡萄糖耐量試驗確診；(3)年齡40～80歲；(4)患者自愿配合本次研究，并已簽署知情同意書。排除標準：(1)1型糖尿病患者；(2)嚴重心肝腎疾病患者；(3)有自身免疫疾病患者；(4)有糖尿病微血管并發癥患者；(5)有惡性腫瘤疾病患者。根據頸動脈內-中膜厚度將早期T2DM患者分為CIMT正常組(CIMT<0.9 mm)104例，男59例，女45例，年齡40～78歲，平均(50.06±10.22)歲，CIMT增厚組(CIMT≥0.9 mm)126例，男65例，女61例，年齡41～80歲，平均(51.43±12.08)歲。同期選擇78例來本院體檢的正常人作為對照組，男43例，女35例，年齡40～79歲，平均(50.24±12.37)歲，兩組性別、年齡等一般資料相比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 臨床資料收集 (1)對受試者均進行性別、年齡、體質指數(BMI)、腰臀比(WHR)等一般資料的調查，收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、心率等生病體征檢測與登記。(2)于受試者清晨空腹時，抽取靜脈血4 mL，分別完成空腹胰島素(FINS)、空腹血糖(FPG)、胰島素抵抗指數(HOMA-IR)、糖化血紅蛋白(HbA1C)、血清肌酐(Scr)、總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)等實驗室指標的檢測。

1.3 血清miR-125b水平檢測 采集血液標本后，在離心機(3 000 r/min)上離心5 min，分離血清，按照miRNA提取試劑盒說明書，提取miRNA，按照TaqMan? MicroRNA逆轉錄試劑盒將提取的miRNA進行逆轉錄合成cDNA，采用miScript SYBR Green PCR Kit檢測血清miR-125b相對表達水平，miRNA提取試劑盒購自天根生化科技(北京)有限公司，TaqMan? MicroRNA逆轉錄試劑盒購自美國應用生物系統公司，miScript SYBR Green PCR Kit購自北京冬璞泰和科技有限責任公司，具體步驟參見試劑盒說明書，反應體系20 μL，反應條件：95℃ 30 s；60℃ 30 s；75℃ 10 s，共35個循環。miR-125b及內參U6的引物序列見表1。采用2-ΔΔCT法對miR-125b表達水平進行定量分析。

表1 qRT-PCR引物序列

1.4 統計學方法 采用SPSS 20.0統計軟件，計數資料以“%”表示，兩組或多組間比較采用2檢驗，計量資料以表示，兩組間比較采用t檢驗，多組間比較F檢驗，采用Pearson對早期T2DM患者CIMT與糖脂代謝指標及miR-125b的相關性分析，采用多元線性回歸分析方法分析早期T2DM患者CIMT的影響因素，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 一般資料與生化指標比較 3組受試者性別、年齡、SBP、SBP、心率、Scr、TC、TG、HDL-C與LDL-C相比，差異無統計學意義(P>0.05)。與對照組相比，CIMT正常組、CIMT增厚組T2DM患者BMI、WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C顯著升高(P<0.05)，其中CIMT增厚組T2DM患者WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C顯著高于CIMT正常組(P<0.05)。見表1。

2.2 受試者血清miR-125b表達比較 與對照組相比，CIMT正常組與CIMT增厚組T2DM患者血清中miR-125b表達水平顯著升高(P<0.05)，且CIMT增厚組T2DM患者血清中miR-125b表達水平顯著高于CIMT正常組(P<0.05)。見表2。

表1 兩組患者一般情況比較

表2 受試者血清miR-125b表達比較

2.3 CIMT與其他指標的相關性分析 Pearson相關分析顯示，CIMT與WHR、FPG、HOMA-IR、HbA1C、miR-125b呈正相關(P<0.05)，與BMI、FINS等其他指標無顯著相關性(P>0.05)。見表3。

表3 CIMT與其他指標的相關性分析

2.4 多元線性回歸分析影響CIMT的相關因素 以CIMT為因變量，以BMI、WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C、miR-125b為自變量，進行多元線性回歸分析，結果顯示，WHR、FPG、HOMA-IR、miR-125b均是T2DM患者CIMT影響因素。見表4。

表4 CIMT影響因素的多元線性回歸分析

3 討論

糖尿病是一種涉及基因之間復雜的相互作用的多因素內分泌代謝疾病。據國際糖尿病聯盟統計結果顯示，2011年全球糖尿病患病人數已超過3.7億，預計2030年，糖尿病患者將發展至5.5億[6]。T2DM是一種常見的糖尿病類型，約占糖尿病患者總人數的90%，由于肥胖、活動少和應激等誘因的影響，導致患者胰島素分泌能力及自身對胰島素的敏感性降低，引發疾病[7]。調查顯示，受人們飲食結構及生活習慣的改變的影響，我國T2DM發病率及病死率有呈不斷上升的趨勢。其中大血管病變是導致糖尿病患者死亡的主要原因，而動脈粥樣硬化是大血管病變的基礎[8]。因此及早發現T2DM患者的動脈粥樣硬化相關的危險因素，對于診斷及控制糖尿病患者大血管病變的發展十分重要。CIMT是動脈粥樣硬化的早期標志物，與心血管事件的發生、發展密切相關。本研究結果顯示，與對照組相比，CIMT正常組與CIMT增厚組T2DM患者BMI、WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C顯著升高，其中CIMT增厚組T2DM患者WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C顯著高于CIMT正常組，提示BMI、WHR、FINS、FPG、HOMA-IR、HbA1C在早期T2DM患者血清中表達上調，可能影響T2DM患者CIMT，可能為早期T2DM患者動脈粥樣硬化的危險因素，但仍需進一步篩查。

微小RNA(microRNA，miRNA)是一類單鏈非編碼RNA分子，平均長約22 nt，通過與3′非翻譯區(3′-UTR)結合調節mRNA表達，每種miRNA都能夠靶向多種mRNA[9]。已有多項研究表明miRNA可參與T2DM疾病的發展[10]。王昱等[11]研究表明，miRNA-296、miRNA-9在T2DM患者血漿中均表達下調，且與胰島素水平呈負相關。有研究表明,miR-125能夠參與調節胰島素信號通路，其表達水平增加可能與T2DM患者胰島素抵抗有關。Shen等[4]研究表明miR-125b在T2DM患者外周血單核細胞中表達上調，可能參與了T2DM的發病機制。本研究結果顯示，與對照組相比，CIMT正常組與CIMT增厚組T2DM患者血清中miR-125b表達水平顯著升高，且CIMT增厚組T2DM患者血清中miR-125b表達水平顯著高于CIMT正常組，提示miR-125b與CIMT增厚有關，可能參與早期T2DM患者動脈粥樣硬化的發生，可能是診斷T2DM的潛在新型生物標志物。

T2DM患者動脈粥樣硬化是多種因素作用的結果，其中血糖及HOMA-IR升高是其發生的高危因素。血管內皮障礙及糖代謝、脂代謝異常是其發病的重要原因[12]。周夢云等[13]研究表明，CIMT與患者年齡及SBP呈正相關。陳超等[14]研究表明，CIMT與糖尿病病程、FPG及HOMA-IR呈正相關，多元線性回歸顯示，FPG是CIMT的影響因素。孫振杰等[15]研究表明，CIMT與糖尿病病程、SBP、HbA1C、WHR呈正相關，其中糖尿病病程、HbA1C是CIMT的影響因素。本研究結果顯示，CIMT與WHR、FPG、HOMA-IR、HbA1C、miR-125b呈正相關，多元線性回歸分析結果顯示，WHR、FPG、HOMA-IR、miR-125b均是T2DM患者CIMT的影響因素。提示miR-125b可能參與T2DM疾病的發展，可能在一定程度上影響T2DM患者頸動脈粥樣硬化的程度。

綜上所述，早期T2DM患者血清中miR-125b表達上調，且其表達水平與患者CIMT正相關，是影響T2DM患者CIMT的因素，可能參與早期T2DM患者動脈粥樣硬化過程。然而本研究僅探究了早期T2DM患者血清中miR-125b的表達情況，具體作用機制還不清楚，仍需進一步深入研究。