第二代與第三代羅氏游離甲狀腺素試劑的可比性驗證和偏倚評估

熊茂程，李良敏△，黃 芮，畢冬明，李 楊

1.成都中醫藥大學附屬醫院核醫學科，四川成都 610000；2.四川省成都市華陽社區衛生服務中心檢驗科，四川成都 610000

游離甲狀腺素(FT4)是甲狀腺功能體外試驗的靈敏指標，測定不受血清結合蛋白(主要是甲狀腺結合球蛋白)的影響，即使生理及病理情況引起血清甲狀腺結合球蛋白濃度和結合力改變時，其也能較準確地反映甲狀腺的功能[1]。動態監測FT4的濃度可作為臨床用藥及療效監測的重要指標[2-3]。

本實驗室對FT4的評估建立在原羅氏全自動電化學發光第二代FT4(FT4Ⅱ)基礎上，廠商把FT4Ⅱ升級為FT4Ⅲ可能是由于降低臨床反應的參考區間臨界值出現了假陽性的情況。由于兩種試劑使用時產生的偏倚會對臨床用藥及療效監測產生影響，因此在將FT4Ⅱ試劑升級為FT4Ⅲ試劑前，需參考美國臨床實驗室標準化協會(CLSI)文件EP9-A3《用患者樣本進行方法學比對及偏倚評估》對二者檢測結果進行對比分析[4]，預先對兩種試劑的偏倚進行評估，通過與臨床進行有效溝通、解釋說明，從而降低試劑換代對臨床診斷的影響。現報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 連續4 d，每天收集20例患者新鮮血清標本，共80例，2～8 ℃低溫保存(羅氏試劑說明書標本保存要求，2～8 ℃可穩定保存7 d)。依據FT4Ⅱ的兩點定標信號值對應的濃度范圍(8～39 pmol/L)[5]和參考范圍(12～22 pmol/L)將收集的80例血清標本分為3個水平：3～<12 pmol/L，12～<22 pmol/L，22～<39 pmol/L，分別為20、37、23例。納入標準：非心腦血管、肝、腎、肺等機體重要器官器質性病變和功能障礙的患者；非妊娠期及哺乳期女性；年齡18～48歲；剔除溶血、脂血、黃疸標本。

1.2儀器與試劑 羅氏全自動化學發光免疫分析系統Cobas e601。使用的試劑包括：(1)FT4Ⅱ試劑盒及其配套的輔助試劑(校準品，質控品)。(2)FT4Ⅲ試劑盒及其配套的輔助試劑(校準品，質控品)。兩代試劑具體參數見表1。

表1 兩代試劑參數

1.3方法

1.3.1比對方案 參照 EP9-A3文件《用患者樣本進行方法學比對及偏倚評估》，以原FT4Ⅱ試劑盒作為比較方法，使用FT4Ⅱ試劑盒配套的校準品、質控品及其輔助試劑；升級后的FT4Ⅲ試劑盒作為試驗方法，使用FT4Ⅲ試劑盒配套的校準品、質控品及其輔助試劑。

1.3.2標本測定 收集的80例臨床標本在羅氏全自動化學發光免疫分析系統Cobas e601上分別用FT4Ⅱ試劑和FT4Ⅲ試劑檢測，每份標本平均平行測定兩次。

1.4統計學處理 運用SPSS23.0對數據進行統計分析。(1)設比較方法FT4Ⅱ試劑檢測的結果為X值，試驗方法FT4Ⅲ試劑檢測的結果為Y值，數據以線性回歸式Y=bX+a表示，b和a分別表示兩方法間的比例偏倚和系統偏倚[6-8]。(2)計算每份標本兩次測定差值絕對值DXi、DYi(i為測定標本序號)，剔除離群值[9]。(3)3個水平數據分別以FT4Ⅱ試劑盒檢測的平均值Xi對應FT4Ⅲ試劑盒檢測的平均值Yi得出3組數據作3組散點圖，并以全部數據作總體數據散點圖。(4)計算兩種檢測方法平均值的百分偏倚，(Yi-Xi)÷Xi×100(Y值)對應比較方法測定的平均水平值(X值)作散點圖，得出百分比偏倚圖。

2 結 果

以總的檢測數據繪制Yi對Xi的散點圖，(Yi-Xi)÷Xi×100對X的百分比偏倚圖見圖1～4，以FT4Ⅱ平均值Xi與FT4Ⅲ平均值Yi的差值分布圖見圖5。總體數據的線性方程為Y=0.946 5X-0.337 4，R2=0.992 5>0.95。此方程線性良好，則認為X范圍合適，線性回歸的斜率和截距可靠，FT4Ⅲ試劑盒檢測結果與原FT4Ⅱ試劑盒檢測結果具有高度的一致性。從圖2～4的百分比偏倚圖可知整個數據呈單側偏倚，具有一致性，偏倚在1%～16%，平均偏倚為-7.56%，符合美國臨床實驗室改進修正法規88(CLIA′88)能力比對檢驗的分析質量要求，但在各水平偏倚有所不同：3～<12 pmol/L水平，偏倚范圍較大，在1%～16%；12～<22 pmol/L水平，偏倚在4%～12%；22～<39 pmol/L水平，偏倚范圍較大，在1%～12%。從圖5的FT4Ⅱ均值Xi與FT4Ⅲ均值Yi的差值分布圖可得出差值基本分布在0～2.5。同時，各水平數據R2>0.95，X取值范圍合適，直線回歸統計的斜率和截距可靠。高于臨界水平20%(即>26.4 pmol/L)的樣品檢測結果為20次，低于臨界水平20%(即<9.6 pmol/L)的檢測結果為20次。臨界值驗證通過，滿足要求。比較平均值Xi、平均值Yi兩組數據，以羅氏試劑說明書健康人群參考區間12～22 pmol/L為依據，大于參考區間(即>22 pmol/L)即為健康人群參考區間水平共9例，占所有標本的11.25%，即為假陽性率。各水平回歸方程見表2。

表2 4組數據的回歸方程

圖1 3～<12 pmol/L的百分比偏倚圖

圖2 12～<22 pmol/L的百分比偏倚圖

圖3 22～<39 pmol/L的百分比偏倚圖

圖4 3～<39 pmol/L的百分比偏倚圖

圖5 FT4Ⅱ平均值Xi與FT4Ⅲ平均值Yi的差值分布圖

3 討 論

CLSI一直致力于制訂評價臨床試驗方法的文件，于2013年8月修訂最新版EP9-A3文件[10]，為生產廠家和臨床實驗室提供了最新的方法學比對和偏倚評估指南。臨床實驗室常以此指南作為檢測系統之間可比性分析和偏倚評估的依據[11-12]。然而對于不同試劑，雖然檢測的是相同物質，但是檢測中所用抗體親和力、特異度、檢測步驟、檢測時間可能有所改變[13]，檢測結果也會有所不同，所以需要參照指南EP9-A3文件進行偏倚評估，降低FT4試劑換代對甲狀腺功能檢測和甲狀腺治療療效監測的干擾。

FT4作為臨床用藥及療效監測的重要指標，其檢測結果的穩定性極其重要[14]。試劑升級換代對檢測結果可能造成較大的影響，本研究對兩種試劑檢測結果進行了比對，全部數據的線性方程為Y=0.946 5X-0.337 4，R2=0.992 5>0.95，線性良好，表明精密度達到要求。依據CLIA′88能力驗證計劃的分析質量要求(允許總誤差)，FT4的系統誤差在接受范圍靶值±3s[15]。本研究為臨床醫生評估試劑換代對診療造成的影響大小提供依據，并且通過試劑升級換代有效降低臨床和廠家提出的正常參考區間上限出現的假陽性的概率，為甲狀腺功能紊亂等甲狀腺疾病患者治療療效的監測提供了更為準確的檢測數據。