混勻不充分致糖化血紅蛋白色譜圖基線斜升2例報道

吳學(xué)兵，朱 峰，王君鋒，任芳芳

上海市松江區(qū)泗涇醫(yī)院檢驗科，上海 201602

糖化血紅蛋白(HbA1c)是目前臨床診治糖尿病的參考指標(biāo)之一，目前HbA1c的測定方法主要有色譜法、電泳法、免疫法和化學(xué)法等，各種方法檢測結(jié)果的差異和影響因素是臨床關(guān)注和探討的課題[1-2]，每個方法都有其局限性，目前國內(nèi)較多實驗室采用美國Bio-Rad公司離子交換高效液相法檢測，本文報道2例因貧血血細(xì)胞沉淀過快致混勻不充分，從而使吸取紅細(xì)胞過少導(dǎo)致HbA1c色譜圖基線斜升，現(xiàn)報道如下。

1 病例資料

病例1，女，84歲，因高血壓收治入院，相關(guān)實驗室檢查如下：血紅蛋白86 g/L，紅細(xì)胞計數(shù)3.02×1012/L，血細(xì)胞比容26.9%，血清總蛋白57 g/L，清蛋白28.7 g/L，清蛋白/球蛋白(A/G)1.0，空腹血糖6.14 mmol/L。圖1為HbA1c首次檢測結(jié)果為4.1%，圖譜基線向上斜升，HbA1a面積比40.1%，天然(非糖化)血紅蛋白(HbA0)為56.7%；圖2為充分顛倒混勻后復(fù)查HbA1c為6.0%，圖譜基線始于Y軸的0.0點(diǎn)，穩(wěn)定而不斜升，HbA1a的面積比3.0%，HbA1b為0.9%，HbF為1.3%，HbLA1c為2.0%，p3為4.5%，p4為1.3%，HbA0為82.1%。

圖1 病例1 HbA1c首次檢測圖譜

圖2 充分顛倒混勻后復(fù)查病例1 HbA1c檢測圖譜

病例2，男，92歲，冠心病伴心律失常收治入院，相關(guān)實驗室檢查如下：血紅蛋白72 g/L，紅細(xì)胞計數(shù)2.05×1012/L，血細(xì)胞比容20.3%，血清總蛋白56.7 g/L，清蛋白22.9 g/L，A/G 0.7，空腹血糖4.3 mmol/L。圖3為HbA1c首次檢測結(jié)果為7.2%，圖譜基線向上斜升，HbA1a的面積比20.7%，HbA1b為5.6%，p3為4.9%，HbA0為63.0%。圖4為充分顛倒混勻后復(fù)查HbA1c為6.4%，圖譜基線始于Y軸的0.0點(diǎn)，穩(wěn)定而不斜升，HbA1a的面積比為2.4%，HbA1b為1.9%，HbLA1c為1.7%，p3為4.1%，p4為1.5%，HbA0為83.1%。

圖3 病例2 HbA1c首次檢測圖譜

圖4 充分顛倒混勻后復(fù)查病例2 HbA1c檢測圖譜

采用上海科華科技有限公司真空采血管取患者靜脈血2 mL，乙二胺四乙酸三鉀(EDTA-K3)抗凝，立即充分顛倒混勻5次，采用美國Bio-Rad公司VARANTⅡ TURBO HbA1C色譜離子交換高效液相法檢測，上海市臨床檢驗中心室內(nèi)質(zhì)控及室間質(zhì)評均在控合格。本文兩例患者因同時檢測空腹血糖發(fā)現(xiàn)病例1空腹血糖為6.14 mmol/L，病例2空腹血糖為4.30 mmol/L，與相應(yīng)的首次HbA1c檢測結(jié)果為4.1%和7.2%審核報告時有不符合現(xiàn)象，再觀察標(biāo)本及分析色譜圖等情況、再復(fù)檢。

2 討 論

HbA1c檢測的方法涉及層析技術(shù)、電泳技術(shù)、免疫技術(shù)、生化(酶學(xué))技術(shù)、快速檢測技術(shù)，所有方法的被分析物HbA1c都是自我定義的，而實際HbA1c值是不同的，由于受各種干擾，如紅細(xì)胞生存期的改變、異常血紅蛋白、黃疸和高脂血癥、乙酰化血紅蛋白、氨基甲?；t蛋白等因素均可造成HbA1c值出現(xiàn)假性升高或降低[3]；美國Bio-Rad高效液相色譜儀檢測HbA1c的原理是層析站雙泵預(yù)先將設(shè)置的離子濃度遞增的緩沖液推進(jìn)分析柱，血紅蛋白通過柱中物質(zhì)的離子相互作用而分離，分離的血紅蛋白通過濾色光度計在415 nm波長變化測定各峰含量，但在實際操作中吸取紅細(xì)胞量過少導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)，文獻(xiàn)中鮮有提出，臨床這類標(biāo)本并不少見，但有學(xué)者建議患者連續(xù)2次檢測HbA1c的結(jié)果的差異>0.5%為臨床上有顯著改變需要進(jìn)行治療方案的調(diào)整，實驗室檢測的精密度要小于2.4%才能滿足上述改變的檢測要求[4]。美國Bio-Rad公司VARANTⅡ TURBO HbA1c離子交換高效液相法是采用臨床數(shù)據(jù)管理軟件(CDM)生成每個標(biāo)本檢出峰的保留時間和一張色譜圖，HbA1c峰以陰影表示，正常典型色譜圖應(yīng)是HbA1c峰形尖銳和均衡(無肩峰和拖尾峰)，基線始于Y軸的0.0點(diǎn)，穩(wěn)定而不斜升[2]。而Bio-Rad公司的色譜圖可能在峰型、峰分辨率、基線等方面8種非典型色譜圖影響HbA1c結(jié)果的準(zhǔn)確性[5]，不應(yīng)報告結(jié)果，但造成非典型色譜圖對應(yīng)的具體因素未能指明，需要在實際工作中總結(jié)和探索；本文兩例患者因同時檢測空腹血糖發(fā)現(xiàn)病例1空腹血糖為6.14 mmol/L，病例2空腹血糖為4.30 mmol/L，與相應(yīng)的首次HbA1c為4.1%和7.2%審核報告時有不符合現(xiàn)象，再觀察標(biāo)本情況、復(fù)檢。從兩例患者的檢查結(jié)果看，第1例HbA1c首次檢測結(jié)果為4.1%，復(fù)查后為6.0%，第2例HbA1c首次檢測結(jié)果7.2%，復(fù)查后6.4%，分析原因可能為臨床標(biāo)本多而批量檢測時間長，兩例均因貧血導(dǎo)致血細(xì)胞下沉過快，混勻不及時而致吸取紅細(xì)胞濃度不足，均出現(xiàn)非典型基線斜升圖譜，而再經(jīng)充分混勻后復(fù)查，均呈正常典型色譜圖。雖然實驗室每天室內(nèi)質(zhì)控均在控，但只注意中文檢驗信息系統(tǒng)數(shù)據(jù)，如本文2例觀察到色譜圖的基線斜升，可采取混勻后不放在批量里而即刻上機(jī)單獨(dú)檢測等處理方法，提示今后注意查對每個樣本色譜圖，將其寫入規(guī)范操作和報告審核流程，對有疑問時注意其他相關(guān)檢測指標(biāo)對照(如血糖)或加強(qiáng)臨床溝通，確保報告結(jié)果的準(zhǔn)確性；在對此類樣本復(fù)檢時無論是充分顛倒混勻還是即刻上機(jī)單獨(dú)檢測都是確保此類樣本能吸取一定量的紅細(xì)胞為目的，本文對血紅蛋白低于何濃度會出現(xiàn)基線斜升的臨界點(diǎn)未深入探討，有等待于今后進(jìn)一步探索。

(致謝：本文得到上海市臨床檢驗中心居漪主任的幫助和指導(dǎo)，在此深表謝意！)