十味止癢洗劑的質量標準研究

肖麗麗，潘磊

江西省皮膚病專科醫院，南昌 330001

十味止癢洗劑來源于醫院協定方開發的制劑，主要用于風濕熱毒蟲所致濕疹、神經性皮炎、丘疹性蕁麻疹、夏季皮炎、瘙癢癥、體股癬、手足癬、疥瘡等瘙癢性皮膚病。該方臨床使用多年，療效確切，無明顯不良反應，但協定方不便攜帶，無質量標準控制，故將該方開發為院內制劑。十味止癢洗劑主要由苦參、地膚子、蛇床子、黃柏、烏梢蛇、千里光等十味中藥組成，方中君藥苦參性寒味苦，長于清熱燥濕、祛風殺蟲［1］；方中地膚子性味苦寒，清熱利濕、祛風止癢，蛇床子性溫味辛苦，祛風燥濕、殺蟲止癢，黃柏性味苦寒，清熱燥濕，解毒療瘡，三藥合用，助君藥清熱燥濕，祛風殺蟲之功，俱為臣藥。筆者通過查閱文獻［2-6］和試驗研究［7-9］，建立了十味止癢洗劑的質量標準。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

1260高效液相色譜儀［Agilent公司，Agilent Chemststion B.04.01（中文）工作站，1260 Quat Pump VL泵，1260 VWD VL檢測器］；Sartorius BT125D型電子天平（d=0.01/0.1 mg，賽多利斯科學儀器北京有限公司）；HHS-21-4數顯恒溫水浴鍋（室溫+5 ℃～100 ℃，上海博迅實業有限公司醫療設備廠）；UV-1800紫外分光光度計［江蘇島津（中國）有限公司］。

1.2 試劑

苦參堿對照品（批號：110805-201503）、蛇床子對照藥材（批號：121148-201507）、蛇床子素對照品（批號：110822-201609）、鹽酸小檗堿對照品（批號：110713-201613）、地膚子對照藥材（批號：111522-201602）均購自中國食品藥品檢定研究院；十味止癢洗劑（批號：20170526、20170527、20170528，自制）；甲醇、乙腈為色譜純；水為純化水；其余試劑為分析純。

2 方法

2.1 薄層鑒別

2.1.1 苦參鑒別 樣品溶液：取十味止癢洗劑10 mL，加20 mL三氯甲烷萃取，重復三次，蒸干萃取后的三氯甲烷液，溶解于1 mL甲醇中；對照溶液：取苦參堿對照品3 mg，溶解于3 mL甲醇中；陰性溶液：取9味藥材（苦參除外）按工藝制成樣品，其余制法同樣品溶液。照薄層色譜法點樣在硅膠 G板上，展開劑為乙酸乙酯系統，適量加入甲醇和濃氨試液，溶液比例為20∶1∶0.5，噴稀碘化鉍鉀試液。結果與苦參堿色譜對應的位置上樣品色譜顯同樣橙色點，陰性溶液未見，結果見圖1。

圖1 苦參薄層色譜圖

2.1.2 蛇床子鑒別 樣品溶液：取十味止癢洗劑20 mL，加20 mL乙醚萃取，重復3次，揮干萃取后的乙醚液，溶解于1 mL甲醇中；對照藥材溶液：取對照藥材（蛇床子）0.5 g，加純化水30 mL，加熱煮沸30 min，濾過，取濾液加20 mL乙醚萃取，重復3次，揮干萃取后的乙醚液，溶解于1 mL甲醇中；對照溶液：取蛇床子素對照品3 mg，溶解于3 mL甲醇中；陰性溶液：取9味藥材（蛇床子除外）按工藝制成樣品，其余制法同樣品溶液。展開劑以甲苯和乙酸乙酯為溶液，溶液加入比例為9∶1，在紫外光燈254 nm下檢視。結果對應位置對照藥材、對照品與樣品色譜斑點一致，陰性溶液未見，結果見圖2,。

圖2 蛇床子薄層色譜圖

2.1.3 黃柏鑒別 樣品溶液：同苦參鑒別樣品溶液；對照溶液：取鹽酸小檗堿對照品3 mg，溶解于3 mL甲醇中；陰性溶液：取9味藥材（黃柏除外）按工藝制成樣品，其余制法同樣品溶液。展開劑以飽和正丁醇和水為溶液，再適量加入冰醋酸調節，溶液比例為7∶2∶1，在紫外光燈365 nm下檢視。結果樣品色譜對應位置上光點與鹽酸小檗堿色譜一致，陰性溶液未見，結果見圖3。

圖3 黃柏薄層色譜圖

2.1.4 地膚子鑒別 樣品溶液：取十味止癢洗劑20 mL，加30 mL飽和正丁醇萃取，重復三次，蒸干萃取后的飽和正丁醇液，溶解于1 mL甲醇中；對照藥材溶液：取對照藥材（地膚子）0.5 g，加純化水30 mL，煮沸20 min，濾過，濾液同樣品溶液制法；陰性溶液：取9味藥材（地膚子除外）按工藝制成樣品，其余制法同樣品溶液。照薄層色譜法點樣在硅膠G板上，展開劑以三氯甲烷和甲醇為溶液，再適量加入水調節，溶液比例為16∶9∶2，顯色劑噴10%硫酸乙醇試液碳化，日光下檢視。結果顯色劑未干時，樣品色譜對應位置上顯乳白色斑點與對照藥材色譜一致，斑點吹風熱干后，顯色，陰性溶液未見。結果見圖4。

圖4 地膚子薄層色譜圖

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件 Agilent C18反相色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相為乙腈-甲醇-磷酸鹽緩沖液（pH6.8）（16∶16∶68）；檢測波長為220 nm；進樣10 μL。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取苦參堿對照品12.51 mg，放置到50 mL容量瓶中，用甲醇溶解稀釋，再從中吸取5 mL放置25 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至終濃度。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密量取十味止癢洗劑3 mL至分液漏斗中，加純化水20 mL，再加氨試液約4～5滴（pH=9～10），搖勻，再加三氯甲烷25 mL提取，重復提取5次，收集下層三氯甲烷液約70 ℃水浴上蒸干，用甲醇溶解蒸干后的殘渣，放置25 mL容量瓶中至刻度。

2.2.4 陰性實驗 先制成處方投料量（苦參除外）的陰性樣品，其余制法同2.2.3項下制備。按2.2.1項下色譜條件，單獨吸取上述三種液體用高效液相儀器測定。結果顯示，陰性溶液中在苦參堿紫外吸收峰位置上未出現吸收峰，供試品溶液中苦參堿紫外吸收峰與對照品溶液相一致。色譜圖見圖5。

圖5 溶液色譜圖

2.2.5 精密度試驗 取對照品溶液（50.04 μg/mL），按2.2.1項下色譜條件，重復測定7次，其峰面積的相對偏差RSD=1.53%，說明儀器精密度良好。

2.2.6 線性范圍 取配制的對照品溶液（250.2 μg/mL）；從中精密量取1、3、5、10、25 mL，分別制成10.008、30.024、50.04、100.08、250.2 μg/mL濃度的對照品溶液，注入儀器測定，分別以苦參堿對照品的濃度（μg/mL）、峰面積為橫坐標及縱坐標進行線性回歸，回歸方程為：Y=6.211 05X＋1.210 30（R2=1.000 00），表明苦參堿在10.008 μg/mL～250.2μg/mL濃度范圍內與峰面積呈線性關系。

2.2.7 穩定性試驗 取供試品溶液，按2.2.1項下色譜條件每隔2 h左右進樣一次，記錄峰面積并計算苦參堿含量，RSD=1.60%（n=7）結果表明十味止癢洗劑中苦參堿在12 h內無明顯變化、穩定性好。

2.2.8 重復性試驗 分別精密量取十味止癢洗劑（批號：20170526）樣品制成6份供試品溶液測定，結果RSD為0.79%。

2.2.9 回收率試驗 取十味止癢洗劑（批號：20170526）樣品0.608 55 mg，精密加入苦參堿對照品0.636 0 mg，按2.2.3項下制成6組溶液測定。數據詳見表1。

表1 回收率試驗結果

2.2.10 樣品測定 取十味止癢洗劑（批號：20170526、20170527、20170528），按照供試品的制備方法制成6組溶液，每個批號平行做2組，按2.2.1項下色譜條件進行測定，計算結果。見表2。

表2 樣品的含量測定結果

3 討論

薄層色譜法進行定性鑒別時，處方中連翹由于色譜上斑點不清晰，故放棄。在含量測定方法確定時，進行了不同色譜條件的比較、含量主成份的確定、檢測波長的選擇、不同萃取次數的比較、萃取液蒸干溫度的考察等研究，最終確定了測定方法。為了能使臨床使用多年、療效確切的中藥協定方可以更安全、有效、便捷的為廣大患者使用，制定可行的質量標準勢在必行。