血紅蛋白電泳聯合地貧基因檢測在地中海貧血診斷中的應用

李愛麗，陳瑞芬，吳麗娜，黃麗芳

廣東省韶關市第一人民醫院檢驗科，廣東 韶關 512000

地中海貧血是東南亞地區及我國南方地區最常見、危害最大的遺傳病，常以易疲勞和輕度貧血為主要臨床表現，極易誤診或漏診［1］。現代臨床醫學尚缺乏特效診斷技術，并且預后效果不理想。由于珠蛋白生成障礙性貧血多導致甲狀腺、腎上腺等功能下降，嚴重者多因繼發感染、心力衰竭而死亡。因此，及早進行地中海貧血篩查，并且融合一系列的有效方式進行診斷，以此控制地中海貧血新生兒發生率是目前臨床上研究的重點［2］。但關于血紅蛋白電泳聯合地貧基因檢測在地中海貧血診斷中的應用研究鮮見相關報道。本研究旨在深入探討血紅蛋白電泳聯合地貧基因檢測在地中海貧血診斷中的應用療效，進一步為地中海貧血患者提供理論依據。

1 資料與方法

1.1 研究對象

隨機收集2017年3月—2019年2月在韶關市第一人民醫院診治的210例地中海貧血，按隨機數字表法分為兩組，每組為105例，同期入院體檢患者210例為（陰性對照組）。其中觀察組：男63例，女42例；年齡22～58歲，平均年齡（32.93±8.11）歲；病程1～53年，平均病程（27.32±8.57）年。對照組：男63例，女43例；年齡25～58歲，平均年齡（31.23±8.43）歲；病程1～51年，平均病程（26.64±8.29）年。兩組患者的基本情況相較差異無統計學意義（P＞0.05），有可比性。

1.2 納入及排除標準

納入標準：（1）結合臨床特點及實驗室檢查（血常規檢查、血涂片檢查、地貧基因診斷等）已被證實為地中海貧血［3］；（2）年齡20～59歲，性別不限；（3）經院倫理委員會審核同意研究，所有患者均知曉，愿意積極配合檢查。排除標準：（1）患有精神意識障礙疾病；（2）伴有語言意識障礙及惡性腫瘤者（3）臨床資料不完整者。

1.3 治療方法

（1）對照組：只采用血紅蛋白電泳方法，在患者早晨空腹的狀態下抽取其外周靜脈血2 ml，作為檢測標本，添加至EDTA抗凝管中。采用離心機（白洋）按照4 000 r/min的速度離心5 min，去除上層血漿采取0.9%氯化納注射液對10μL紅細胞洗滌3次，將洗滌的紅細胞取出后與130 μL溶血液混合均勻。在室溫環境下予以培育5 min待測，用全自動血紅蛋白血泳儀（海倫娜Spife-3000）相關技術檢測HbA2、HbA及HbF的血紅蛋白指標。（2）觀察組：則在血紅蛋白電泳基礎上加用地貧基因檢測治療，抽取外周血2～3 ml，添加至EDTA抗凝管中。對全血標本中的DNA主要使用多重聚合酶鏈式反應（PCR）技術予以檢測，主要檢測α-地中海貧血缺失型基因（3種）和β-地中海貧血基因突變點（17種）。

1.4 試劑及儀器

全血DNA提取和地中海貧血基因檢測選取深圳亞能生物技術有限公司生產的試劑盒，操作嚴格按照說明書。PCR擴增儀（廣東珠海黑馬，Hema9600）,恒溫雜交儀（深圳亞能生物技術有限公司，型號：YN-H16)。

1.5 觀察指標

（1）觀察α-地中海貧血、β-地中海貧血患者的總有效檢測率；（2）比較三組不同標本中血紅蛋白指標HbA2、HbA及HbF。

1.6 統計學方法

通過SPSS 23.0對所有數據進行分析，其血紅蛋白指標等以均數±標準差（±s）表示計量資料，行t檢驗，α-地中海貧血、β-地中海貧血等以例數和百分比（%）表示計數資料，行χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組不同地貧基因診斷

觀察組α-地中海貧血、β-地中海貧血的總有效檢測率（96.19%）明顯高于對照組（47.61%），差異有統計學意義（χ2=61.310,P＜0.001）。

2.2 不同標本中血紅蛋白指標

α-地中海貧血組和β-地中海貧血組HbF的含量明顯高于陰性對照組（P＜0.05）；β-地中海貧血組HbA2的含量高于陰性對照組（P＜0.05），并且陰性對照組HbA的含量均明顯高于α-地中海貧血組和β-地中海貧血組（P＜0.05），見表1。

3 討論

地中海貧血廣泛分布于我國南方地區，人群發生率高達10%以上，以廣東、廣西為主。地貧主要分為α-地中海貧血和β-地中海貧血兩種，以α-地中海貧血較常見。本病的發生是由于某一種或幾種珠蛋白肽鏈合成障礙，以致珠蛋白肽鏈合成失平衡而導致的溶血性貧血，本組疾病的臨床癥狀輕重不一，大多表現為慢性進行性溶血性貧血。據流行病學調查顯示，地貧在我國南方具有較高的發病率，嚴重影響患者的生活質量，甚至危及生命安全［4］。因此，找尋合適的檢測方法對疾病診斷十分關鍵。

表1 各組不同標本中血紅蛋白指標的對比（±s） %

表1 各組不同標本中血紅蛋白指標的對比（±s） %

注：與陰性對照組比較，a P＜0.05

組別α-地中海貧血組(n=105)β-地中海貧血組(n=105)陰性對照組(n=105)HbA2 2.56±0.42 6.55±1.29a 3.75±0.76 HbA 95.04±25.48a 92.49±22.15a 97.15±23.15 HbF 2.45±0.42a 6.89±1.58a 2.15±0.29

隨著醫療水平的提高及醫療技術的發展，地中海貧血的檢測技術不斷完善，使用簡單、方便的血液學方法中的血紅蛋白電泳進行地中海貧血的篩查，但單獨使用對于輕度地中海貧血會出現漏診的情況。隨著多重PCR技術逐漸走向成熟，所以采用聯合地貧基因明確診斷，其效率較高，且準確率高，篩查范圍廣，有利于臨床中地中海貧血基因的篩查，國內外現已廣泛應用于各級醫院。眾多研究指出［5］，在篩查實施過程中，血紅蛋白電泳聯合地貧基因檢測在地中海貧血診斷中至關重要。故本次研究筆者選取血紅蛋白電泳聯合地貧基因檢測治療結果中顯示，觀察組患者的α-地中海貧血、β-地中海貧血的總有效檢測率比對照組更顯著，并且α-地中海貧血者、β-地中海貧血者及陰性對照組患者的HbA2、HbF及HbA濃度差異均具有顯著性差異，由此可知，使用血紅蛋白電泳聯合地貧基因檢測對地中海貧血患者檢出率作用顯著，與夏六和等［6］研究結果一致。

綜上所述，地中海貧血患者診斷中，實施血紅蛋白電泳聯合地貧基因檢測診斷效果確切，特別是早期診斷地貧具有重大臨床意義，具有一定的臨床應用推廣價值。