微生物檢驗(yàn)之病原性真菌檢驗(yàn)

文丨曾凡英（眉山市仁壽縣人民醫(yī)院）

真菌是一種真核細(xì)胞性微生物，它沒有葉綠素，沒有根莖葉，由一個細(xì)胞或者多個細(xì)胞組成。真菌中的很大一部分是對我們有好處的，但是也有一部分真菌可以讓我們生病，主要是一些淺部真菌和深部真菌等病原性真菌，醫(yī)生需要使用病原性真菌檢驗(yàn)來檢測是否有病原性真菌的存在。那么關(guān)于病原性真菌檢驗(yàn)?zāi)懔私舛嗌倌兀黄饋砜匆豢窗伞?/p>

常見單細(xì)胞真菌的形態(tài)觀察

（1）新型隱球菌：通過新型隱球菌墨汁負(fù)染色片，可以觀察到其菌體呈現(xiàn)球形，大小并不一致，菌體的四周被特別厚的莢膜所包圍，形體透明發(fā)亮，能切能夠看到發(fā)芽的菌體。

（2）白色念珠菌：使用病人的棉拭子標(biāo)本進(jìn)行常法涂片，使用革蘭氏進(jìn)行染色，在顯微鏡下檢查。能夠看到白色念珠菌的菌體呈現(xiàn)卵圓形，比葡萄球菌大了二到五倍左右，菌體出芽伸長形成了假菌絲，在假菌絲的生長點(diǎn)上出現(xiàn)芽生孢子，有厚膜孢子沿著假菌絲的頂端生長，厚膜孢子較大且呈現(xiàn)圓形。

皮膚絲狀菌的檢查

檢查材料：

患者的指甲屑、皮屑或者毛發(fā)、10%的氫氧化鉀溶液、載玻片、蓋玻片、鑷子、普通光學(xué)顯微鏡等等。

檢查方法：

采集標(biāo)本。使用較鈍的刀在手、腳、癬等地方將皮屑輕輕地刮下來，對于甲癬可以使用小刀來獲取指甲深處的甲屑。

制作玻片。使用鑷子夾取少量的皮屑或者甲屑標(biāo)本放在載玻片的中間，在上面滴一到兩滴的10%氫氧化鈉溶液，然后蓋上蓋玻片，為加快角質(zhì)的溶解速度，將載玻片在火焰上慢慢加熱，當(dāng)標(biāo)本變得透明時，在蓋玻片上稍微施加壓力使標(biāo)本變成薄片，去除氣泡并將周圍溢出來的溶液吸取干凈。

鏡檢：先使用低倍鏡觀察有沒有真菌菌絲或者孢子，然后使用高倍鏡仔細(xì)觀察菌絲和孢子的形態(tài)。在進(jìn)行鏡檢的時候應(yīng)該將光線調(diào)整的比較弱，讓視野稍微暗一點(diǎn)。對于陽性的標(biāo)本，經(jīng)常可以看到分支菌絲或者孢子。

真菌的培養(yǎng)

培養(yǎng)材料：真菌菌種、沙保氏培養(yǎng)基、平皿、載玻片、蓋玻片。

培養(yǎng)方法：

一般培養(yǎng)方法。把白色念珠菌、新型隱球菌、絮狀表皮癬菌分別接種到沙保氏培養(yǎng)基上，再放在22到28攝氏度的溫度下培養(yǎng)，深部真菌可以在37攝氏度的環(huán)境下培養(yǎng)，培養(yǎng)一個星期之后查看菌落的特征。真菌菌落按形態(tài)分類可以分為三類：一是酵母型菌落，它類似于細(xì)菌菌落，整體為圓形，顏色為白色，并且邊緣比較整齊，菌落表面顯得濕潤且光滑；二是類酵母型菌落，它與酵母型菌落相同，整體為圓形，顏色為白色，但不同的是菌落根部會有假菌絲向培養(yǎng)基內(nèi)生長；三是絲狀菌落，多細(xì)胞真菌會表現(xiàn)為這種形式，菌落由很多疏松的菌絲體所組成，整體呈現(xiàn)棉絮狀、絨毛狀或者粉末狀，在絲狀菌落的中央部位會出現(xiàn)皺褶，外圍有放射狀溝，菌落的正面和背面顏色不一定相同，可以呈現(xiàn)出各種不同的顏色。

小培養(yǎng)法：小培養(yǎng)法也就是玻片法，其培養(yǎng)方法為將10到15毫升的沙保葡萄糖瓊脂倒入無菌平皿之中，在瓊脂凝固之后，使用無菌操作將瓊脂切成大小約0.5厘米的小塊，然后把瓊脂小塊轉(zhuǎn)移到已經(jīng)滅菌的載玻片上，之后將已經(jīng)分純的真菌菌種接種在瓊脂小塊四周，在上面蓋上無菌的蓋玻片，轉(zhuǎn)移到無菌平皿內(nèi)，無菌平皿內(nèi)保持一定的濕度，放置在22-28攝氏度的環(huán)境中培養(yǎng)，動態(tài)地觀察其生長過程，然后根據(jù)菌絲以及孢子的特征對真菌的種類進(jìn)行鑒定。

經(jīng)過上面對于單細(xì)胞真菌形態(tài)觀察、皮膚絲狀菌檢查以及真菌培養(yǎng)的介紹，大家對于病原性真菌檢驗(yàn)已經(jīng)有了一個初步的了解。但是在實(shí)際檢驗(yàn)過程中，還是要注意很多細(xì)節(jié)操作，才能做出準(zhǔn)確的病原性真菌檢驗(yàn)。