金匱腎氣丸與補中益氣丸聯用對自然衰老C57小鼠運動及代謝的影響

葉蓉 唐春鳳 劉道光 朱明慧 姚薇 田順亮 劉承偉 于蘭

(1桂林醫學院基礎醫學院人體解剖學教研室，廣西 桂林 541004；2柳州市中醫醫院；3桂林醫學院臨床醫學院；4菏澤醫學?？茖W校人體解剖學教研室；5桂林醫學院藥學院；6桂林醫學院附屬醫院)

隨著我國人口老齡化的進一步加劇，老化和衰老所帶來的運動能力降低、血糖升高、能量的向心性分布、基礎代謝降低、抵抗力低下及生命力減弱等問題將進一步加速機體的老化，給我國社會的發展帶來巨大壓力〔1〕。中醫認為，人到老年，腎氣衰退，則不足以滋養五臟六腑，而臟腑功能衰退，氣血陰陽虧虛，最終導致老年期疾病發生〔2〕。金匱腎氣丸出自東漢張仲景的《金匱要略》，功效是補益腎中精氣，是溫補腎陽的經典名方〔3〕。臨床研究表明，金匱腎氣丸具有增強免疫、改善代謝水平、增強神經體液調節等作用〔4，5〕。補中益氣丸出自金代醫學家李東垣的《脾胃論》，主要功效為補中益氣，升陽舉陷，能有效調理脾胃〔6〕。現代醫學證實，補中益氣丸具有調節胃腸運動、抗胃潰瘍及胃黏膜損傷、影響消化分泌、調節免疫功能等作用〔7～9〕。二者單獨在臨床的運用較多，但二者聯合作用對衰老小鼠運動能力及代謝水平的研究未見報道。課題組前期研究發現，隨著年齡的增加，小鼠消化道和內臟高級中樞邊緣葉的突觸核蛋白表達量增加，內臟功能紊亂，并且運動能力出現增齡性下降〔10〕。本課題通過建立自然衰老小鼠模型，并予以金匱腎氣丸合補中益氣丸溫補腎陽、調理脾胃，通過觀察老年小鼠活動能力、體重、血糖、不同部位體溫變化和生存時間的變化，評價金貴腎氣丸與補中益氣丸聯用的抗衰老效應，進一步闡明衰老狀態方證相關的生物學基礎。

1 材料與方法

1.1藥物 金匱腎氣丸〔地黃、山藥、酒萸肉、茯苓、牡丹皮、澤瀉、桂枝、附子(炙)、牛膝(去頭)、鹽車前子〕，北京同仁堂科技發展股份有限公司制藥廠；補中益氣丸〔炙黃芪、黨參、炙甘草、白術(炒)、當歸、升麻、柴胡、陳皮、生姜、大棗〕，仲景宛西制藥股份有限公司。

1.2動物 健康SPF級C57BL/6J小鼠，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，實驗動物許可證號：SCXK(湘)2016-0002。飼養于溫度22～24℃，12/12 h光照/黑暗周期，相對濕度(55%±20%)環境，自由攝食與飲水，自然飼養至24月齡。

選取10只小鼠，按照體重(20～30 g)隨機分為對照組(n=5)、實驗組(n=5)，每組內雄性為2只、雌性為3只。分組后實驗組每天上午定時灌胃金匱腎氣丸10 mg和補中益氣丸5 mg的溶液0.5 ml，給藥4 w；對照組同等時間灌胃0.5 ml的純凈水。

1.3方法 存活天數：給藥當天為第1天到小鼠死亡當天，為小鼠存活天數；體重變化：用電子水平(可精確到0.01 g)每隔4 d測量小鼠體重1次；血糖變化：用優利特血糖試紙每周于固定時間檢測小鼠的尾靜脈血糖1次；體溫變化：用紅外線溫度測試儀于上午固定時間測試小鼠頭、頸、上肢、下肢、腹部、背部、尾根部體溫。頭部測試部位為兩瞳孔連線的中點；頸部為頸前正中線中點；上肢為左、右腋窩；下肢為左、右腹股溝中點；尾部測試部位為尾根部；胸部為劍胸結合處；腹部在臍部；背部為第一腰椎棘突處。

1.4行為學測試 平衡桿試驗反映小鼠平衡力及行走能力。爬桿試驗反映小鼠在克服自身重力情況下展現出的抓力及爬行能力。懸掛試驗反映小鼠四肢肌力及抓握能力。曠場試驗反映小鼠在一個空曠環境的運動能力及狀態。每7 d通過平衡桿試驗、爬桿試驗、懸掛試驗、曠場試驗檢測小鼠行為變化。

1.5統計學方法 通過GraphPad Prism8.0軟件分析數據并繪圖，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多個樣本均數間的比較采用單因素方差分析。

2 結 果

2.1觀察指標結果

2.1.1生存曲線 隨著年齡的增加，老年小鼠逐漸衰老死亡，實驗組的存活時間明顯高于對照組〔(18.00±1.414)d vs(9.60±7.301)d；P<0.05〕。見圖1。

圖1 對照組與實驗組小鼠的生存曲線

2.1.2體重變化 給藥前，兩組體重差異無統計學意義(P>0.05)；給藥后，實驗組體重明顯高于對照組(P<0.05)。見表1。

2.1.3血糖變化 給藥前，兩組血糖差異無統計學意義(P>0.05)；給藥后，兩組血糖均明顯升高(P<0.001，P<0.01)，但實驗組血糖明顯低于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 對照組與實驗組給藥前后體重和血糖的比較

2.1.4不同部位體溫變化 隨著年齡的增加，老年小鼠頭、頸、胸、腹部近心端體溫較高，四肢和尾部體溫較低，尤以左下肢和尾部體溫最低，體溫呈向心性分布。實驗組給藥后四肢體溫升高，右上肢、左下肢及右下肢體溫明顯高于對照組(P<0.05，P<0.001)。見表2。

表2 兩組給藥前后的各部位體溫比較

2.2行為學結果

2.2.1平衡桿試驗 與給藥前比較，對照組平衡桿所用時間明顯增加(P<0.05)，實驗組給藥后平衡桿所用時間明顯減少(P<0.05)，與對照組相比，實驗組平衡桿所用時間顯著減少(P<0.01)。見表3。

2.2.2爬桿試驗 對照組一直以下滑方式爬桿，與給藥前比較所用時間無明顯改變(P>0.05)，實驗組給藥后無下滑，爬桿所用時間顯著增加(P<0.01)，與對照組相比，實驗組爬桿所用時間顯著增加(P<0.01)。見表3。

2.2.3懸掛試驗 與給藥前比較，對照組懸掛所用時間減少(P>0.05)，實驗組給藥后懸掛所用時間顯著增加(P<0.01)，與對照組相比，實驗組懸掛所用時間明顯增加(P<0.05)。見表3。

2.2.4曠場試驗 與給藥前比較對照組曠場運動速度顯著下降(P<0.01)，實驗組給藥后曠場運動速度有升高的趨勢(P>0.05)，與對照組相比，實驗組曠場運動速度顯著升高(P<0.01)。見表3。

表3 對照組與實驗組平衡桿試驗、爬桿試驗、懸掛試驗所用時間及曠場試驗運動速度的比較

3 討 論

隨著年齡的增加，機體逐漸老化衰老，衰老所帶來的一系列生理代謝功能紊亂包括血糖異常、身體溫度的向心性分布、運動功能的下降，進一步加重全身功能的衰退〔11〕。中醫理論著作《黃帝內經》〔12〕曰：“腎為先天之本，主藏精，腎精是生命的原始物質和臟腑運作的原始動力；脾胃為后天之本，氣血生化之源，是保養生之氣、延年益壽之關鍵”。明代虞摶《醫學正傳》〔13〕又指出：“腎氣盛則壽延，腎氣衰則壽夭”。脾胃虛，則氣血生化不足，腎中精氣不得以補充，加速機體衰老〔14〕。而老年人存在臟腑功能衰退現象〔15〕，故影響氣血生化，從而使身體健康受到威脅，壽命減短。因此，減緩老年人臟腑功能衰退，促進氣血生化，可有助于提高老年人生活質量，延長壽命〔16〕。金匱腎氣丸有溫補腎陽功效，可提高老年人腎中精氣〔17〕；而補中益氣丸有補中益氣、健脾胃之功效。因此，補中益氣丸與金匱腎氣丸聯用，可進一步提升老年人腎中精氣，調節氣血。

本課題通過給予老年小鼠金匱腎氣丸和補中益氣丸干預，結果顯示，老年小鼠體重增加、四肢體溫升高、血糖相對穩定，可維持正常，推測金匱腎氣丸和補中益氣丸聯用可能通過調節老年小鼠的脂肪代謝、基礎代謝、糖代謝，從而提高了老年小鼠整體代謝水平。

老年小鼠的行為學結果顯示，給予金匱腎氣丸和補中益氣丸干預后的老年小鼠行走、爬行、抓握能力增強，運動速度增快，推測金匱腎氣丸和補中益氣丸聯用可能通過調節老年小鼠的免疫功能，從而增強了老年小鼠的運動能力。

另一方面，觀察到實驗組老年小鼠存活時間明顯高于對照組，表明金匱腎氣丸和補中益氣丸聯用可能通過提高老年內臟功能，改善小鼠代謝水平，增強其運動能力，從而有效延長壽命。然而金匱腎氣丸和補中益氣丸聯用如何提高老年小鼠代謝水平及增強運動能力的機制尚不清楚，本課題后期將針對這方面進行相關實驗。