不同月份產羔母羊泌乳期生殖激素與生長激素監測

趙曉娥，張靜，高臻，孫念琴，徐明輝，李延華，馬保華*

(1. 西北農林科技大學動物醫學院/農業部動物生物技術重點實驗室，陜西 楊凌 712100；2. 許昌百益奶山羊養殖場，河南 許昌 461000；3. 富平縣畜牧技術推廣中心，陜西 富平 711700)

在我國北方地區，傳統的奶山羊生產周期是秋季配種、春季產羔，經過6～8個月的泌乳期后，在干奶期之前進入下一年度的繁殖和生產周期。在這種生產模式下，奶山羊每年都有相對固定的配種、產羔、泌乳周期，其中鮮奶供應周期大約固定在每年的1～8月份。為了滿足奶山羊養殖場對市場全年供應鮮羊奶的需求，通過同期發情與誘導發情的方法可以使奶山羊在不同季節妊娠、產羔及產奶。奶山羊的發情、排卵、妊娠和泌乳受體內生殖激素的調控[1]，其泌乳期間激素水平的動態變化對維持正常泌乳及泌乳后期卵巢機能恢復起重要作用。目前，國內對母羊生殖內分泌的研究主要集中在不同品種母羊發情周期內分泌的變化[2-3]，或母羊在不同季節內分泌的變化[4-5]。據報道綿羊、山羊外周血中促黃體生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)濃度均存在著季節性變化，繁殖季節高于非繁殖季節[4-7]。那么，奶山羊在不同季節產羔后，季節性變化是否引起產后母羊生殖激素及生長激素(GH)水平的變化還不清楚。因此，本研究選取1、3、5、8月份生產的關中奶山羊，采集母羊產羔后不同時間的靜脈血，分離血清，使用ELISA試劑盒檢測血清中激素的變化規律，為調控奶山羊在不同季節配種實現全年均衡產奶提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

1.5～4歲的關中奶山羊，選自河南許昌百益奶山羊養殖場，體況良好，無繁殖及傳染性疾病，于當年的8、10、12以及次年3月份分4批同期發情及配種處理，于次年的1、3、5、8月份產羔，每批次隨機抽取10只產羔母羊，共40只用于試驗，舍飼飼養，常規管理。

1.2 試驗方法

試驗羊分別于產羔后的0 d、7 d、1～8個月(每月的第15天)采集靜脈血，1 600 r/min離心12 min，取血清移入2 mL離心管中，-20 ℃冰箱保存待用。分別用上海邦奕生產的羊催乳素(PRL)ELISA試劑盒(BYE80053)、羊FSH ELISA 試劑盒(BYE80199)、羊LH ELISA試劑盒(BYE80054)、羊孕激素(PROG)/孕酮(P4)ELISA試劑盒(BYE80231)和羊雌激素(E2) ELISA試劑盒(BYE93052)測定血清中的生殖激素水平，用羊生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒(BYE80125)對血清中的GH水平進行檢測，由上海邦奕生物科技有限責任公司代測。

1.3 數據統計與分析

試驗數據采用SPSS 17.0軟件進行t檢驗統計分析，P<0.05表示差異顯著。數據以“平均值±標準差”表示。

2 結果與分析

2.1 不同月份產羔母羊泌乳期PRL水平變化

不同月份母羊產后泌乳期PRL水平檢測結果如圖1所示。

相同泌乳期標注不同字母表示差異顯著(P<0.05)，相同字母或無字母表示差異不顯著(P>0.05)。下同

1、3、5和8月份產羔母羊泌乳期間血清中PRL含量的動態變化趨勢一致，PRL濃度從產后0 d開始上升，7 d達到峰值，之后下降，60 d后緩慢下降，逐漸維持在一定水平波動。泌乳期間PRL濃度最高為(446.17±3.74)ng·L-1，最低為(221.72±2.20)ng·L-1。產后0 d，不同月份產羔母羊外周血中PRL濃度差異較大。8月份產羔母羊，在泌乳2個月時，外周血中PRL含量顯著低于1和3月份產羔母羊(P<0.05)；在泌乳3個月時，外周血中PRL含量顯著低于1月份產羔母羊(P<0.05)。在泌乳8個月時，1月份和8月份產羔母羊外周血中PRL含量顯著高于3月份和5月份產羔母羊(P<0.05)。

2.2 不同月份產羔母羊泌乳期FSH水平變化

不同月份產羔母羊泌乳期FSH水平檢測結果如圖2所示。

圖2 不同月份產羔母羊泌乳期FSH水平

1、3、5、8月份產羔母羊在8個月泌乳期間外周血中FSH含量動態變化趨勢一致，FSH濃度從產后0 d開始上升，產后7 d達峰值，隨后下降，1個月后，穩定在一定濃度范圍內浮動。母羊泌乳期間FSH濃度最高為(9.49±0.77)U·L-1，最低為(3.82±0.09)U·L-1。在產后0 d，3月份和8月份產羔母羊外周血中FSH濃度顯著高于1月份和5月份產羔母羊(P<0.05)。

2.3 不同月份產羔母羊泌乳期LH水平變化

不同月份產羔母羊泌乳期LH水平檢測結果如圖3所示。

圖3 不同月份產羔母羊泌乳期LH水平

1、3、5、8月份產羔母羊泌乳期外周血中LH含量的動態變化趨勢一致，產后1個月內LH濃度持續下降，之后上升，2個月時恢復到產后0 d水平，之后緩慢下降。母羊泌乳期間LH濃度最高為(351.17±8.73)pg·mL-1，最低為(218.16±4.41)pg·mL-1。產后0 d，8月份產羔母羊外周血中LH濃度顯著低于其他月份(P<0.05)；產后2個月時，1月份產羔母羊外周血中LH的濃度顯著高于其他月份(P<0.05)。

2.4 不同月份產羔母羊泌乳期P4水平變化

不同月份產羔母羊泌乳期P4水平檢測結果如圖4所示。

圖4 不同月份產羔母羊泌乳期P4水平

從圖4可以看出，1、3、5、8月份產羔母羊泌乳期外周血中P4含量的動態變化趨勢一致，產后1周內P4濃度稍有下降，之后逐漸上升，60 d后再次緩慢下降。母羊泌乳期間P4濃度最高為(4 086.83±114.81)pmol·L-1，最低為(3 568.15±33.50)pmol·L-1。產后8個月時，1月份和8月份產羔母羊外周血中P4含量顯著高于3月份和5月份產羔母羊(P<0.05)。

2.5 不同月份產羔母羊泌乳期E2水平變化

不同月份產羔母羊泌乳期E2水平檢測結果如圖5所示。

圖5 不同月份產羔母羊泌乳期雌二醇水平

1、3、5、8月份產羔母羊泌乳期血清中E2含量的動態變化趨勢一致，產后1周內E2濃度下降，之后直到第7個月E2水平維持在一定濃度范圍內上下浮動，7個月之后開始上升。母羊泌乳期間E2濃度最高為(33.74±1.48)ng·L-1，最低為(22.30±0.83)ng·L-1。產后0 d，1月份產羔母羊外周血中E2濃度顯著低于3月份、5月份和8月份產羔母羊(P<0.05)；產后3個月，8月份產羔母羊外周血中E2濃度低于3月產羔母羊(P<0.05)；產后8個月，8月份產羔母羊外周血中E2濃度低于1月份和3月份產羔母羊(P<0.05)。

2.6 不同月份產羔母羊泌乳期GH水平變化

不同月份產羔母羊泌乳期外周血中GH水平檢測結果如圖6所示。

圖6 不同月份產羔母羊泌乳期GH水平

1、3、5、8月份產羔母羊泌乳期外周血中GH含量的動態變化趨勢一致，GH濃度最高為(30.36±1.67)μg·L-1，最低為(11.57±0.92)μg·L-1。不同月份產羔母羊在產后0 d血清中GH濃度最高，產后7 d最低。1個月后，各批次母羊血清中GH濃度基本穩定在一定范圍內上下浮動。

3 討論

PRL、P4、E2、FSH、LH是母畜產后維持泌乳的主要激素。母羊分娩后開始泌乳，其血清中P4水平開始降低，解除它對PRL的抑制作用使PRL濃度升高，而高水平的PRL及胎盤、卵巢分泌的P4、E2共同作用促進母羊產后泌乳[8]。這與本試驗的結果相符。本試驗中，母羊從產后0 d開始，外周血中PRL濃度開始升高，E2、P4濃度下降，7 d后，PRL濃度開始降低，E2、P4濃度逐漸升高，繼而E2、P4濃度穩定在一定水平上下波動，而PRL仍處于下降趨勢，直到3個月之后穩定下來，此時，3種激素穩定分泌以維持母羊正常泌乳。本試驗中母羊產羔后7 d FSH升高到較高水平，之后下降，1個月后，維持在一定濃度范圍內上下浮動，這符合母畜產后FSH和P4之間的消減規律。母畜在分娩后P4迅速降低解除它對PRL的抑制作用，同時解除丘腦下部對促性腺激素釋放激素(GnRH)的分泌，使FSH釋放增加，而LH沒有像FSH那樣在產后7 d時升高，而是下降，可能與高濃度PRL有關。據報道，母畜產后，吮乳刺激能促進母畜PRL分泌[9-10]，促進初乳的生成與分泌，引起產奶量增加[11]。高濃度的PRL抑制垂體LH的分泌，即產后母畜外周血LH水平同PRL水平負相關[12]。但吮乳刺激對母畜體內E2、P4和FSH分泌都無明顯影響[13]。本試驗中，母羊產后，LH開始下降，7 d后，盡管PRL開始下降，但相對于整個泌乳期而言，PRL仍處在較高水平，負反饋調控使LH濃度繼續緩慢下降。總之，5種激素共同作用維持母羊產后正常泌乳。

奶山羊在不同月份產羔后，同一泌乳期部分激素水平有差異，這可能與4個批次母羊處于不同的季節有關，即產羔月份的不同對奶山羊激素水平有一定的影響。本試驗發現3和5月份產羔母羊從產后7個月開始LH、FSH、P4濃度升高，主要是因為這2個批次母羊在泌乳7個月時，一方面奶山羊進入泌乳后期，另一方面此時正是奶山羊常規繁殖季節秋冬季，母羊處于短日照季節，有利于P4分泌。Suttie等[14]報道，短日照可以加速P4分泌，而長日照明顯抑制P4的分泌。P4是一個重要的內分泌信號，它控制著FSH分泌峰的周期性及母羊新生卵泡的數量[15]。即P4對母羊的發情具有“啟動”作用，可以促使卵巢從相對靜止狀態轉變為活躍狀態，從而使母羊的發情和排卵恢復正常，LH、FSH濃度也上升[16]。因此，這2個批次母羊在泌乳7個月時已恢復正常的發情周期，母羊外周血中FSH、LH和P4濃度升高。

GH的作用是調節母畜的乳腺發育和泌乳活動，反芻奶畜依賴于GH維持其泌乳[17]。家畜GH的分泌受晝夜節律、運動、機體代謝以及應激刺激的影響。本試驗中，母羊產后第7天GH下降到最小值，可能的原因與產房內懸掛白熾燈提供晝夜照明有關。為了更好地護理母羊與羔羊，母羊產羔后，飼養工人將母羊關在懸掛白熾燈的產房內，由于母羊長時間處于光照條件下，抑制GH的分泌，當母羊重新回到圈舍，母羊血中GH濃度上升。本研究中，4個批次母羊GH到達峰值時不在同一泌乳階段，可能的原因是母羊處于不同的季節，晝夜長短不一樣，晝夜節律、光照時間對母羊GH分泌的影響。

4 結論

奶山羊在不同月份產羔后，同一泌乳期部分激素水平有差異，這可能與4個批次母羊處于不同的季節有關，即奶山羊在不同月份產羔后，對其激素水平有一定的影響，但是在整個泌乳期間靜脈血中PRL、FSH、LH、P4、E2及GH濃度的變化趨勢是一致的。因此，奶山羊在不同月份進行配種、產羔對其泌乳期生殖內分泌影響較小，可以對奶山羊進行分批次配種、產羔，實現其全年均衡產奶。