3 種外源物質對蘋果幼樹新梢抗寒性的影響及評價

張繼祥，聶佩顯，張丁有，路超

（1.山東農業大學園藝科學與工程學院，山東 泰安 271018；2.山東省果樹研究所，山東 泰安 271000）

隨著全球氣候變暖，我國極端天氣日益增多[1，2]，晚霜凍已成為制約我國蘋果產業發展的主要自然災害之一[3，4]。生產上，在霜凍來臨之前噴施具有抗寒效果的外源物質以提高果樹的抗寒性，已有廣泛應用。研究表明，水楊酸（SA）、油菜素內脂（BR）和氯化鈣（CaCl2） 等物質與植物的抗寒性具有一定關系。如，在黃瓜幼苗上葉面噴施1 mmol/L 的SA 溶液，可使黃瓜幼苗的冷害指數較清水對照降低40%[5]；在葡萄幼苗上葉面噴施0.25～5.00 mmol/L 不同濃度梯度的SA溶液，均可提高葡萄幼苗的抗寒性[6]；在草莓上葉面噴施3 mg/L 的BR 溶液，可提高葉片SOD、POD 和CAT 的活性，增強草莓的抗逆性[7]；Ca2+為一種細胞膜保護劑，Ca 處理可減輕自由基對膜系統的損傷，降低膜脂過氧化程度，提高蘋果對逆境的適應性[8]等。但是，這些物質對提高蘋果幼樹抗寒性的效果差異尚未見報道。以2 a 生嘎拉蘋果的新梢為試材，比較了低溫脅迫下CaCl2、SA 和BR 溶液處理對蘋果葉片抗寒性相關指標的影響，并對噴施不同外源物質后的枝條抗寒性進行了綜合評價，旨為有效預防蘋果晚霜凍提供幫助。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

蘋果試材為樹勢健壯、長勢一致的2 a 生嘎拉/M9T337，種植于山東省濟寧市嘉祥縣國家小尾寒羊保種場果園 （北緯 35°36′、東經 116°16′）。果園面積4 hm2，蘋果樹株行距為4.5m×2.5m，高紡錘樹形，南北行向，常規管理。

試劑有CaCl2（天津市大茂化學試劑廠生產）、水楊酸（天津凱通化學試劑有限公司生產）和蕓苔素內酯水劑（碩豐481，有效成分含量為0.007 5%，成都新朝陽生物化學有限公司生產）。

1.2 試驗方法

1.2.1 試驗設計 試驗外源物質設2 g/L 的CaCl2溶液（CaCl2，Ⅰ）、200 mg/L 的水楊酸溶液（SA，Ⅱ）、蕓苔素內酯水劑750 倍液（BR 750 倍液，Ⅲ）、蕓苔素內酯水劑1 500 倍液（BR 1 500 倍液，Ⅳ）、蕓苔素內酯水劑3 000 倍液 （BR 3 000 倍液，Ⅴ） 和清水（CK）6 個處理，單株小區，3 次重復。從蘋果萌芽期開始進行全樹噴施外源物質處理，每7 d 噴施1 次，連噴3 次。第3 次噴施外源物質后第10 天，在樹冠外圍東、西、南、北4 個方向剪取長勢一致的帶葉新梢，將剪口處封蠟，然后帶回實驗室置于人工智能低溫箱內進行低溫脅迫處理，試驗低溫梯度設4、0、-2 和-4 ℃計4 個水平，5 h 后用液氮速凍，備用。

1.2.2 測定項目與方法

1.2.2.1 葉片生理學指標。參考《植物生理學實驗指導》[9]，測定葉片的相對電導率、保護酶（SOD、POD、CAT） 活性和主要滲透調節物質〔丙二醛（MDA）、脯氨酸、可溶性糖〕含量。

1.2.2.2 葉片半致死溫度（LT50）。相對電導率達到50%時的溫度可以作為半致死溫度[10]。為了準確判斷各外源物質處理的葉片LT50，根據其不同低溫脅迫下的相對電導率擬合出相對電導率（Y）與溫度（X）的Logistic 方程，求出曲線拐點所對應的溫度，即為葉片的低溫LT50[11]。

1.2.2.3 枝條抗寒性綜合評價。利用葉片的抗寒性綜合評價結果作為枝條的抗寒性評價結果。利用隸屬函數法，對不同外源物質處理的枝條抗寒性進行綜合評價[12]。首先對各個抗性指標進行分類，與抗寒性呈正相關的指標（脯氨酸含量、可溶性糖含量和3 種保護酶活性）利用公式（1）求隸屬度，與抗寒性呈負相關的指標（MDA 含量、相對電導率） 利用公式（2）求隸屬度：

公式中，Zijk表示噴施第i 種外源物質處理后的植物組織在第j 個溫度脅迫下第k 項指標的隸屬度；Xijk表示噴施第i 種外源物質處理后的植物組織在第j 個溫度脅迫下第k 項指標的測定值，Xmax、Xmin分別表示所有參試材料中第k 項指標的最大值和最小值。將同一外源物質處理下各個指標的抗寒性隸屬值累加起來，求平均值，即為該外源物質處理的抗寒性隸屬度。參照龔月樺等[13]的方法，按照平均隸屬度將枝條的抗寒性進行分級：隸屬度≥0.70 時為強抗，隸屬度為0.6（含）～0.7 時屬抗，隸屬度為0.4（含）～0.6 時屬中抗，隸屬度為0.3（含）～0.4時屬弱抗，隸屬度＜0.3時為不抗。

1.2.3 數據處理與分析 使用Excel 軟件繪制圖表；使用SPSS 17.0 軟件進行數據的差異顯著性分析。

2 結果與分析

2.1 不同外源物質處理對蘋果葉片相對電導率和半致死溫度的影響

2.1.1 相對電導率 隨著低溫脅迫程度的增大，各處理的葉片相對電導率均呈逐漸增大趨勢；但相同溫度下，不同處理的指標值除4 ℃低溫脅迫時差異不顯著外，其他低溫脅迫時差異均較大（圖1）。

圖1 不同外源物質處理對蘋果葉片相對電導率的影響Fig.1 Effects of different exogenous substances on relative conductivity of apple leaves

CK 的相對電導率增加得最快，且指標值始終處于最高，其中-4 ℃低溫脅迫時相對電導率高達78.83%。CaCl2處理的相對電導率增加得最為緩慢，≤0 ℃低溫脅迫時指標值始終處于最低，其中-4 ℃低溫脅迫的相對電導率較CK 下降了47.69%。≤0 ℃低溫脅迫時，SA 與BR 1 500 倍液處理的葉片相對電導率十分相近，二者-4 ℃低溫脅迫時的指標值均顯著＜CK以及BR 750 倍液和3 000 倍液處理，其中較CK 分別下降了34.04%和35.23%。

綜上分析可以看出，≤0 ℃的低溫脅迫時，試驗的外源物質處理均可降低葉片相對電導率，減輕葉片傷害，其中CaCl2處理效果最好，其次是SA 和BR 1 500 倍液處理。

2.1.2 半致死溫度 從圖1 發現，BR750 倍液和3000倍液處理的LT50在-2 ℃附近，SA 和BR 1 500 倍液處理的LT50在-4 ℃附近。根據各外源物質處理不同低溫脅迫下相對電導率擬合出的Logistic 方程，計算得到SA、CaCl2、BR 750 倍液、BR 1 500 倍液、BR 3 000倍液處理的 LT50分別為-3.78、-6.79、-2.33、-3.92 和-2.64 ℃，均＜CK（表1）。說明試驗的外源物質處理均可減少低溫脅迫下葉片細胞內離子的外滲，降低LT50，提高枝條的抗寒性，其中CaCl2處理效果最好，其次是BR 1 500 倍液和SA 處理，BR 750 倍液和3 000 倍液處理效果相對較弱。

表1 不同外源物質處理的蘋果葉片相對電導率Logistic 方程及其半致死溫度Table 1 Logistic equation of relative conductivity and LT50 of apple leaves treated with different exogenous substances

2.2 不同外源物質處理對蘋果葉片主要滲透調節物質含量的影響

2.2.1 MDA 含量 MDA 是一種膜質過氧化產物，在逆境下會大量積累，對生物膜產生傷害。隨著低溫脅迫程度的增大，各處理的葉片MDA 含量均呈逐漸升高趨勢，且均在LT50附近升高較快；但相同溫度下，不同處理的指標值除4 ℃低溫脅迫時差異不顯著外，其他低溫脅迫時差異均較大，其中-2 和-4 ℃低溫脅迫時各外源物質處理的葉片MDA 含量均＜CK，尤其是-4 ℃低溫脅迫的指標值與CK 差異均達到了顯著水平（圖2）。

圖2 不同外源物質處理對蘋果葉片丙二醛含量的影響Fig.2 Effects of different exogenous substances on malondialdehyde content of apple leaves

-4 ℃低溫脅迫時，不同外源物質處理的葉片MDA 含量順序為CaCl2＜SA＜BR 1500 倍液＜BR 750 倍液＜BR 3000 倍液，其中 CaCl2、SA 和 BR 1500 倍液處理三者差異不顯著，但均與其他2 個外源物質處理差異達到了顯著水平；與4 ℃低溫脅迫的指標值相比，SA、CaCl2、BR 750 倍液、BR 1 500 倍液、BR 3 000倍液處理的葉片MDA 含量分別增加了1.85 倍、1.78 倍、3.17 倍、2.94 倍和 2.64 倍，增幅均＜CK （3.20 倍）。

綜上分析可以看出，≤0 ℃的低溫脅迫時，SA、CaCl2和BR 1 500 倍液處理可顯著降低蘋果葉片MDA含量，減輕葉片傷害，其中CaCl2處理效果最好，其次是SA 和BR 1 500 倍液處理。

2.2.2 脯氨酸含量 在4 ℃低溫脅迫時不同處理已經對葉片脯氨酸含量產生了顯著影響，隨著低溫脅迫程度的增大，各處理的葉片脯氨酸含量總體上均呈升高趨勢；但相同溫度下，不同處理的指標值差異均較大，其中CaCl2、SA 和BR 1 500 倍液處理的指標值顯著＞CK 以及BR 750 倍液和3 000 倍液處理，而BR 750 倍液和3 000 倍液處理的指標值與CK 普遍差異不顯著（圖3）。

圖3 不同外源物質處理對蘋果葉片脯氨酸含量的影響Fig.3 Effects of different exogenous substances on proline content of apple leaves

CK 的脯氨酸含量增加得最少，且指標值始終處于最低。CaCl2處理的脯氨酸含量增加得最多，≤0 ℃低溫脅迫時指標值始終處于最高，其中-2 和-4 ℃低溫脅迫的指標值顯著＞其他外源物質處理。-4 ℃低溫脅迫時，SA 處理的葉片脯氨酸含量也顯著＞BR 1 500 倍液處理。

綜上分析可以看出，≤0 ℃的低溫脅迫時，試驗的外源物質處理均可提高葉片脯氨酸含量，增強抗寒性，其中CaCl2、SA 和BR 1 500 倍液處理效果顯著，以CaCl2處理效果最好，其次是SA 處理。

2.2.3 可溶性糖含量 在4 ℃低溫脅迫時不同處理已經對葉片可溶性含量產生了顯著影響，隨著低溫脅迫程度的增大，各處理的葉片可溶性糖含量總體上均呈先升高后降低的變化，且均在-2 ℃低溫脅迫時達到最高；但相同溫度下，不同處理的指標值差異均較大，均以BR1500 倍液處理明顯較高（圖4）。

圖4 不同外源物質處理對蘋果葉片可溶性糖含量的影響Fig.4 Effects of different exogenous substances on soluble sugar content of apple leaves

4～0℃低溫脅迫時，各處理的葉片可溶性糖含量均增加緩慢，其中0 ℃低溫脅迫時SA、CaCl2和BR 1 500 倍液處理的指標值顯著＞CK。-2 ℃低溫脅迫時，各處理的葉片可溶性糖含量均迅速升高至最大，SA、CaCl2、BR 750 倍液、BR 1 500 倍液、BR 3 000 倍液處理的指標值分別達到 18 9.92、164.25、128.63、202.15 和128.90 mg/g，均顯著＞CK （116.94 mg/g）；與 4 ℃低溫脅迫的指標值相比，依次提高了114%、96%、86%、92%和69%，增幅均＞CK （37%）。-4 ℃低溫脅迫時，各處理的葉片可溶性糖含量均較-2 ℃低溫脅迫時降低，其中外源物質處理的指標值均顯著＞CK，但與4 ℃脅迫的指標值相比仍然較高，SA、CaCl2、BR 750 倍液、BR 1 500 倍液、BR 3 000 倍液處理的可溶性糖含量分別較其4 ℃低溫脅迫的指標值增加了31%、34%、22%、42%和10%；不同外源物質處理的葉片可溶性糖含量差異較大，其中SA 與CaCl2處理差異不顯著，但二者均顯著＞BR 750 倍液和3 000 倍液處理。

綜上分析可以看出，≤0 ℃的低溫脅迫時，SA、CaCl2和BR 1 500 倍液處理可顯著提高葉片可溶性糖含量，增強抗寒性，其中BR 1 500 倍液處理效果最好，其次是SA 和CaCl2處理。

2.3 不同外源物質處理對蘋果葉片保護酶活性的影響

2.3.1 SOD 活性 隨著低溫脅迫程度的增大，各處理的葉片SOD 活性均呈先升高后降低的變化，除BR 1 500 倍液處理是在-2 ℃低溫脅迫下達到最高外，其他處理均是在0 ℃低溫脅迫時達到最高；但相同溫度下，不同處理的指標值除4 ℃脅迫時差異不顯著外，其他低溫脅迫時差異均較大，其中SA、CaCl2和BR 1 500 倍液處理的指標值均顯著＞CK（圖5）。

圖5 不同外源物質處理對蘋果葉片SOD 活性的影響Fig.5 Effects of different exogenous substances on SOD enzymatic activity of apple leaves

0 ℃低溫脅迫時，SA、CaCl2、BR 750 倍液、BR 1 500倍液、BR 3 000 倍液處理的葉片SOD 活性分別為149.28、139.24、39.61、91.24 和 67.98 U/g（FW），除BR 750 倍液處理略＜CK〔47.31 U/g（FW）〕外，其他處理的指標值均＞CK，其中SA 處理最高，CaCl2處理次之，二者差異不顯著，但均顯著＞其他處理；與4 ℃低溫脅迫的指標值相比，葉片SOD 活性分別提高了3.50 倍、3.25 倍、0.17倍、1.59 倍和 1.15 倍，增幅均＞CK（36%）。-2 ℃低溫脅迫時，BR 1 500 倍液處理的葉片SOD 活性升至最高，而其他處理的指標值均較0 ℃低溫脅迫時有所降低，該溫度下指標值以SA 處理最高，其次是BR 1 500 倍液和CaCl2處理，三者之間差異顯著，但均顯著＞其他處理；BR 750 倍液處理的葉片SOD 活性最低，BR 3 000 倍液處理次之，二者差異顯著，但均與CK 差異不顯著。-4 ℃低溫脅迫時，各處理的葉片SOD 活性均較-2 ℃低溫脅迫時的指標值降低，其中SA 處理的指標值最高，其次是BR 1 500 倍液處理，二者差異不顯著，但均顯著＞其他處理；CaCl2處理的指標值也較高，顯著＞CK 以及BR 750 倍液和3 000 倍液處理；BR 750倍液和3 000 倍液處理的葉片SOD 活性較低，二者差異不顯著且均與CK 差異也不顯著，指標值分別是0 ℃低溫脅迫時的52.31%和36.16%。

綜上分析可以看出，≤0 ℃的低溫脅迫時，SA、CaCl2和BR 1 500 倍液處理可顯著提高葉片SOD 活性，減輕葉片傷害，其中SA 處理效果最好。

2.3.2 POD 活性 POD 能降解植物細胞內產生的H2O2，避免膜質過氧化對細胞產生傷害。在4 ℃低溫脅迫時不同處理已經對葉片POD 活性產生了顯著影響，隨著低溫脅迫程度的增大，各處理的葉片POD 活性均呈先升高后降低的變化，且指標值均在0 ℃低溫脅迫時達到最高；但相同溫度下，不同處理的指標值差異均較大，其中SA、CaCl2和BR 1 500 倍液處理的指標值均顯著＞CK 以及BR 750 倍液和 3 000 倍液處理（圖6）。

圖6 不同外源物質處理對蘋果葉片POD 活性的影響Fig.6 Effects of different exogenous substances on POD enzymatic activity of apple leaves

4 ℃低溫脅迫時，各外源物質處理的葉片POD 活性均顯著＞CK，其中SA 處理的指標值最高，且顯著＞其他處理；其次是CaCl2和BR1 500 倍液處理，二者差異不顯著，但均顯著＞CK 以及BR 750 倍液和BR 3 000倍液處理；BR 750 倍液和3 000 倍液處理的葉片POD活性相對較低，二者差異不顯著。0 ℃低溫脅迫時，SA、CaCl2、BR 750 倍液、BR 1 500 倍液、BR 3 000 倍液處理的葉片POD 活性均迅速升高，分別達到54.27、 53.28、 17.79、 69.61 和 26.45 ΔA/（min·g），均＞CK〔11.04ΔA（/min·g）〕，且除BR 750倍液處理外，其他處理與CK 差異均達到了顯著水平，其中BR 1 500倍液處理的指標值最高且顯著＞其他處理，SA 與CaCl2處理差異不顯著但均顯著＞BR 750 倍液和3 000 倍液處理；與4 ℃低溫脅迫時的指標值相比，葉片POD 活性分別提高了2.67 倍、4.15 倍、1.20倍、5.60 倍和2.16倍。-2 ℃低溫脅迫時，各外源處理的葉片POD活性均＞CK，其中SA 處理的指標值最高，與CaCl2處理差異不顯著，但顯著＞BR 1 500 倍液處理；CaCl2與BR 1 500倍液處理差異不顯著，但均顯著＞CK 以及BR其他2 個處理；BR 750 倍液和3 000 倍液處理的葉片POD 活性較低，二者差異不顯著，且均與CK 差異也不顯著。-4 ℃低溫脅迫時，除BR 750 倍液處理的葉片POD 活性略＜CK 外，其他處理的指標值均顯著＞CK，其中SA 處理的指標值最高且顯著＞其他處理；CaCl2與BR 1 500倍液處理差異不顯著，但二者均顯著＞CK 以及BR 750倍液和3 000 倍液處理；BR 750 倍液和3 000 倍液處理的葉片POD 活性相對較低，分別是0 ℃低溫脅迫時指標值的43.01%和56.70%。

綜上分析可以看出，低溫脅迫時，SA、CaCl2和BR 1 500 倍液處理均可顯著提高葉片POD 活性，減輕葉片傷害，其中0 ℃時BR 1 500 倍液處理效果最好，4、-2 ℃和-4 ℃時 SA 處理效果最好。

2.3.3 CAT 酶活性 CAT 能催化H2O2分解，對細胞內組分的活性狀態有保護作用。在4 ℃低溫脅迫時不同處理已經對葉片CAT 活性產生了顯著影響，隨著低溫脅迫程度的增大，各處理的葉片CAT 活性總體上均呈先升高后降低的變化，其中BR 1 500 倍液和3 000倍液處理是在-2 ℃低溫脅迫時達到最高外，而其他處理均是在0 ℃低溫脅迫時達到最高；但相同溫度下，不同處理的指標值差異差均較大，其中≤0 ℃低溫脅迫時，SA、CaCl2和BR 1 500 倍液處理的指標值均顯著＞CK 以及 BR 750 倍液和 3 000 倍液處理 （圖 7）。

圖7 不同外源物質處理對蘋果葉片CAT 酶活性的影響Fig.7 Effects of different exogenous substances on CAT enzymatic activity of apple leaves

0 ℃低溫脅迫時，各外源物質處理的葉片CAT 活性均＞CK，其中 CaCl2處理的指標值 〔2.20 ΔA/（min·g）〕最高，且顯著＞其他處理；SA〔1.39ΔA（/min·g）〕 與BR 1 500 倍液處理差異不顯著，但二者均顯著＞CK 以及BR 750 倍液和3 000 倍液；BR 750 倍液和3 000 倍液處理的葉片CAT 活性較低，二者差異不顯著，且均與CK 差異也不顯著。-2 ℃低溫脅迫時，除BR 750倍液處理的葉片CAT 活性略＜CK 外，其他外源物質處理均顯著＞CK，其中 BR 1 500 倍液處理的指標值 〔1.72 ΔA/（min·g）〕最高，且顯著＞其他處理；SA 與CaCl2處理差異不顯著，但二者均顯著＞CK 以及BR 750 倍液和3 000 倍液處理；BR 3 000 倍液處理和CK的指標值均達到最大，分別為0.85 和0.45 ΔA（/min·g），但二者與其他處理相比均明顯較低。-4 ℃低溫脅迫時，CK 的葉片CAT 活性出現最小值；各外源物質處理的葉片CAT 活性雖有不同程度的降低，但均仍高于其4 ℃低溫脅迫時的指標值，SA、CaCl2、BR 750 倍液、BR 1 500 倍液、BR 3 000 倍液處理的葉片CAT 活性分別較其4 ℃低溫脅迫時的指標值提高了12.67 倍、1.37 倍、0.40 倍、4.76 倍和 0.74 倍。

綜上分析可以看出，≤0 ℃的低溫脅迫時，SA、CaCl2和BR 1 500 倍液處理均可顯著提高葉片CAT 活性，減輕葉片傷害，其中0 ℃時CaCl2處理效果最好，-2 和-4 ℃時BR 1 500 倍液處理效果最好。

2.4 不同外源物質處理的枝條抗寒性綜合評價

SA、CaCl2和BR 1 500 倍液處理的平均隸屬度分別為0.569 3、0.576 3 和0.579 4，枝條抗寒性綜合評價均為中抗；BR 750 倍液、BR 3 000 倍液和CK 的平均隸屬度分別為0.247 4、0.296 8 和0.219 0，枝條抗寒性綜合評價均為不抗（表2）。

表2 不同外源物質處理的抗寒性綜合評價Table 2 Comprehensive evaluation of cold resistance of apple shoots treated with different exogenous substances

3 結論與討論

低溫脅迫會對植物細胞膜的穩定性造成破壞，其破環程度隨著低溫脅迫程度的增大而加劇[14，15]。相對電導率的變化可以直觀地反映細胞膜的穩定性，前人研究表明，抗寒性強的植物在遭受低溫脅迫時，膜系統穩定性強，相對電導率?。环粗?，亦然[10，16，17]。因此，相對電導率被作為衡量細胞膜破壞程度的重要指標，并配以Logistic 方程計算得出的植物LT50成為比較植物抗寒性差異的重要方法，已經在葡萄[16]、梨[18，19]、蘋果[10，20，21]等果樹以及楊樹[22]上得到了廣泛應用。MDA是膜脂過氧化過程的最終分解產物，其含量可以反映膜系統受傷害的程度和植物的抗逆性[22]。本研究中通過噴施不同的外源物質發現，低溫脅迫下SA、CaCl2和BR 1 500 倍液處理均可顯著降低葉片的相對電導率、LT50和MDA 含量，有效維持細胞膜的穩定性，提高蘋果葉片的抗寒性。這與SA 在番茄[23]和栝樓[24]幼苗，CaCl2在庫爾勒香梨[25]，BR 在菜用甘薯[26]和葡萄[27]幼苗上的作用結果一致。

脯氨酸和可溶性糖為細胞中主要的滲透調節物質，在果樹抗寒鍛煉中起著非常重要的作用。低溫脅迫下，植物常見的生理反應是積累脯氨酸，其具有增加膜穩定性、減輕質膜損傷和清除自由基等功能[28]。植物組織中通過提高可溶性糖含量和細胞液濃度，使胞質冰點值下降，從而提高植物體的代謝效率，增強其抗寒性[29]。SA、CaCl2和BR 1 500 倍液處理雖然均顯著地提高了葉片的脯氨酸含量和可溶性糖含量，但提高的幅度不同，其中CaCl2和SA 處理對提高葉片脯氨酸含量效果較好，BR 1 500 倍液處理對提高葉片可溶性糖含量效果最好。本研究結果與外源SA 處理對番茄幼苗[23]、CaCl2處理對楠木幼苗[30]、外源BR 處理對葡萄幼苗[27]上的影響結果一致。

SOD、POD 和CAT 是植物體內的重要保護酶，可以降解逆境產生的活性氧自由基，保護膜系統免受過氧化物的傷害，維持膜系統的穩定性[31]。本研究結果顯示，SA、CaCl2和BR 1 500 倍液處理均可顯著提高蘋果葉片的SOD、POD 和CAT 活性，但對3 個保護酶活性的影響程度存在差異，其中CaCl2處理對提高葉片CAT 活性效果最好，SA 處理對提高葉片SOD 活性效果最好，BR 1 500 倍液對提高葉片POD 活性效果最好。

目前，關于果樹抗寒物質篩選的研究大多是通過測定一些生理生化指標的變化來衡量其抗寒效果，但由于植物抗寒生理生化變化較為復雜，且不同指標存在交互作用，如果孤立地使用單一指標很難全面、準確地衡量其抗寒性強弱[12]，只有對這些指標進行綜合分析，才能準確地判斷各物質處理的抗寒效果。因此，眾多學者將聚類分析法[32]、主成分分析法[33]和隸屬函數法[34～36]等應用于植物的抗寒性研究，其中隸屬函數法應用得較為廣泛。本研究中通過隸屬函數法確定了幾種外源物質處理的抗寒性綜合排名，篩選出了效果較好的3 個處理分別為BR 1 500 倍液、2 g/L 的CaCl2溶液和 200 mg/L 的 SA 溶液，與根據 Logistic 方程計算得到的LT50結果基本一致。說明可以利用隸屬函數法進行蘋果抗寒性的綜合評價，同時表明本試驗篩選出的3 個處理方法對于防御降溫幅度不是很大的晚霜凍是有效的。