高效液相色譜法測定糕點中富馬酸二甲酯的方法研究

韓順林

（晉中市綜合檢驗檢測中心，山西晉中 030600）

富馬酸二甲酯是20世紀(jì)80年代開發(fā)出的一種廣譜高效、持久穩(wěn)定的新型防腐劑，其憑借優(yōu)異的抗菌防霉性能被廣泛應(yīng)用于食品果蔬、皮革服飾、中藥材和化妝品等的防霉、防腐、防蟲及保鮮方面[1]。但業(yè)內(nèi)學(xué)者研究認(rèn)為，富馬酸二甲酯常溫下易升華，易對人們的眼睛、呼吸系統(tǒng)等產(chǎn)生刺激，接觸皮膚時會引起瘙癢、灼傷等癥狀，且攝入人體后在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為甲醇，對人體腸道、內(nèi)臟等有較大的毒副作用，對兒童生長發(fā)育尤為不利[2-4]。2009年，歐盟成員國禁止銷售富馬酸二甲酯含量超過0.1 mg/kg的消費品，同年我國也將其列為第2種違禁食品添加劑，但部分食品企業(yè)、不法商販為降低成本、延長貨架期，仍會使用此種違禁添加劑，在蛋糕、面包、月餅等易霉變、酸敗的糕點類食品中較常見，因此，加強(qiáng)糕點類食品中富馬酸二甲酯的檢測評價非常重要[5]。本研究結(jié)合實驗室現(xiàn)有儀器設(shè)備條件，參照NY/T 1723—2009建立了高效液相色譜法測定糕點中富馬酸二甲酯的分析方法，旨在準(zhǔn)確、快速、高效地檢測食品中的富馬酸二甲酯，為加強(qiáng)食品行業(yè)監(jiān)管和保障人們飲食安全提供技術(shù)支撐[6]。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

某品牌糕點（購自農(nóng)貿(mào)市場）；富馬酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液（編號IST2537-10000M，濃度1 000 μg/mL，天津阿爾塔科技有限公司）；甲醇（色譜純，德國默克）；氨水、鹽酸、乙酸鈉、溴化四丁基銨和乙酸均為分析純；實驗用水為一級超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

1260 infinity Ⅱ高效液相色譜儀（配二極管陣列檢測器，美國安捷倫）；XP205分析天平（精度0.000 1 g，瑞士梅特勒－托利多）；VORTEX MS3旋渦混合儀（德國艾卡）；KQ5200DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；0.22 μm有機(jī)相過濾膜（日本島津）。

1.3 試樣前處理

準(zhǔn)確稱取2 g粉碎混勻后的糕點試樣于50 mL燒杯中，加入10 mL氨水甲醇溶液（1+20，V/V），混合后置于超聲波清洗器中超聲水浴15 min。待冷卻至室溫用鹽酸溶液（1+1，V/V）調(diào)節(jié)pH至6.0。將試樣體系溶液全部轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中，用約10 mL超純水分次洗滌燒杯，并將洗滌溶液全部轉(zhuǎn)移至容量瓶中，用超純水定容后混勻。用濾紙過濾，再過0.45 μm濾膜，上機(jī)測試。

1.4 溶液配制

1.4.1 緩沖溶液配制

準(zhǔn)確稱取2.46 g乙酸鈉、2.60 g溴化四丁基銨，用超純水溶解，乙酸溶液（1+1，V/V）調(diào)節(jié)pH至6.0，再用超純水定容于1 000 mL容量瓶中，混勻備用。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)中間液配制

準(zhǔn)確吸取1.0 mL富馬酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，用超純水定容至10 mL容量瓶中，配成100 μg/mL的富馬酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)中間液。

1.4.3 標(biāo)準(zhǔn)工作系列配制

準(zhǔn)確吸取0.1 mL、0.2 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL和3.0 mL富馬酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)中間液于6個10 mL容量瓶中，用超純水定容至刻度，配成富馬酸二甲酯質(zhì)量濃度為 1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、10.0 μg/mL、20.0 μg/mL 和 30.0 μg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作系列。

1.5 液相色譜條件

Poroshell 120 EC-C18色譜柱（4.6 mm×100 mm，2.7 μm）；柱溫：35 ℃；流動相：甲醇+緩沖溶液（35+65，V/V），等度洗脫，流速為1.0 mL/min；檢測器：二極管陣列檢測器（DAD）；檢測波長：220 nm；進(jìn)樣體積：10.0 μL。根據(jù)色譜峰保留時間定性，色譜峰面積外標(biāo)法定量。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜分離分析

在1.5液相色譜條件下，6 min內(nèi)能完成試液中富馬酸二甲酯的色譜分析，由圖1可知，富馬酸二甲酯的峰形尖銳對稱，且與溶劑峰等其他雜峰分離較好，未產(chǎn)生干擾，可準(zhǔn)確地作定性定量分析。

圖1 富馬酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作系列色譜圖

2.2 線性關(guān)系及檢出限

以各標(biāo)準(zhǔn)工作系列點的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X），色譜峰面積為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得到線性方程為Y=45.971 87X-5.315 37，相關(guān)系數(shù)r=0.999 607，富馬酸二甲酯質(zhì)量濃度在1.0～30.0 μg/mL與其響應(yīng)值呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。以儀器測試時信噪比3∶1，計算取樣量為2 g、定容體積為25 mL時方法的檢出限為0.05 mg/kg，與NY/T 1723—2009中一致，能滿足富馬酸二甲酯定量檢測的需求。

2.3 加標(biāo)回收率與精密度

準(zhǔn)確稱取18份陰性糕點試樣，分別添加低濃度（18.75 mg/kg）、中濃度（125.00 mg/kg）、高濃度（250.00 mg/kg）3個水平的富馬酸二甲酯標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個濃度水平平行測定6次，計算方法的加標(biāo)回收率與相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD，試驗結(jié)果統(tǒng)計見表1。糕點中富馬酸二甲酯在18.75～250.00 mg/kg添加水平下，回收率為92.5%～98.4%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD為0.37%～1.60%。結(jié)果表明，本方法加標(biāo)回收率與精密度良好，滿足NY/T 1723—2009與GB/T 27404—2008[7]中的規(guī)定，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

表1 富馬酸二甲酯的加標(biāo)回收率與精密度試驗結(jié)果

3 結(jié)論

本研究參照NY/T 1723—2009建立了高效液相色譜法測定糕點中富馬酸二甲酯的分析方法，通過試驗考察了方法的線性關(guān)系、檢出限、回收率與精密度，結(jié)果表明，該方法的線性范圍較寬，線性關(guān)系良好，檢出限、回收率與精密度等符合NY/T 1723—2009與GB/T 27404—2008中的要求，操作簡便，測定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于大批量糕點中富馬酸二甲酯的分析檢測。