羅丹明B的危害及其在食品中快速檢測方法的建立

鄒康平，王 冬，鄭 平

（常州市金壇區(qū)檢驗(yàn)檢測中心，江蘇常州 213251）

羅丹明B也被稱為堿性玫瑰精，屬于一種顏色為鮮桃紅色的人工染料，其本身具備持續(xù)鮮艷的一種熒光特性和較為理想的脂溶性，因?yàn)槠浔旧淼亩拘暂^高，同時殘留也較高，因此人體長期接觸會存在致癌、致畸及致突變的影響，因此部分國家命令禁止將其添加到食品中，但仍然有一些商家為了個人利益不規(guī)范使用。當(dāng)前，針對食品中羅丹明B使用的檢測方式一般都是運(yùn)用高效液相色譜-熒光法及高效液相色譜-質(zhì)譜法兩種方式，這兩種方式都能夠滿足檢測提出的要求[1]。但是兩種方式存在的差異主要是停留在對樣品進(jìn)行提取和凈化上，當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室普遍使用的檢測方式是SN/T 2430—2010進(jìn)出口食品中羅丹明B的一種檢測方式。

1 材料與方法

1.1 儀器和試劑

AB SCIEX QTRAP 4500型三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜儀；Waters e2695型高效液相色譜儀；AB204-S型電子分析天平；H1850R型臺式高速離心機(jī)；Fotector Plus型高通量全自動固相萃取儀；AutoEVA-60型全自動平行濃縮儀[2]。

甲醇和乙腈，丙酮和正己烷，色譜級；羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品，純度95%；Oasis MCX固相萃取柱和Oasis HLB固相萃取柱都需要控制在60 mg/3 mL，3 μm。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 提取

（1）丙酮提取。選擇2.0 g食用油樣品將其放置在容量為50 mL的離心管中，進(jìn)行渦旋溶解后添加10 mL丙酮，通過MCX小柱完成凈化，在實(shí)際使用前需要分別使用3 mL甲醇和3 mL的水活化，再使用3 mL丙酮和3 mL甲醇進(jìn)行淋洗，然后將淋洗液去除，在使用3 mL的5%氨水甲醇完成洗脫，隨后完成洗脫液的收集，并將其放置在40 ℃的條件下用氮?dú)獯蹈桑S后添加1 mL流動相完成復(fù)溶，在通過0.22 μm濾膜后，放置等待檢測[3]。

（2）乙腈水提取。選擇樣品共計(jì)2.0 g將其放置在容量為50 mL的離心管中，添加10 mL 濃度為70%的乙腈水進(jìn)行3 min的渦旋，同時需要使用超聲完成20 min的提取。使用轉(zhuǎn)速在4 000 r/min完成5 min的離心，隨后選擇其中的上清液，將其使用0.22 μm的濾膜進(jìn)行過濾后，放置等待檢測。

（3）乙腈水-正己烷提取。選擇樣品共計(jì)2.0 g將其放置在容量為50 mL的離心管中添加容量為10 mL 70%的乙腈水溶液進(jìn)行3 min渦旋，隨后添加容量為5 mL的正己烷繼續(xù)進(jìn)行渦旋振蕩，超聲提取20 min[4]。將其放置在4 000 r/min完成5 min的離心后將上層正己烷層去除，下層液體在使用0.22 μm濾膜之后，放置等待檢測。

1.2.2 色譜條件

色譜柱：Waters C18和RRHD（1.8 μm，2.1 mm×100 mm）；流動相：選擇濃度為0.1%的甲醇水溶液與乙腈；流速：0.3 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：2 μL。

1.2.3 質(zhì)譜條件

電噴霧ESI離子源；正離子的掃描模式；采取多反應(yīng)檢測的模式（MRM）。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的選擇

羅丹明B本身容易溶于水、甲醇以及乙腈能夠微溶在丙酮，對于辣椒油和花椒油等部分食用油的樣品分別使用丙酮、70%的乙腈水及70%的乙腈水-正己烷溶液進(jìn)行提取，能夠獲得比較理想的提取效果。3種提取液其填加定量標(biāo)準(zhǔn)物的回收率需要保持在89.2%～98.6%，丙酮提取液和70%乙腈水其提取液的提取效果大致相同，70%乙腈水-正己烷提取液的平均回收率需要控制在90%，相比其他2種提取液低一些，這主要是因?yàn)樯倭苛_丹明B已經(jīng)在正己烷溶劑里殘留。添加正己烷后盡管可以將取液里的油脂快速去除，可是也減少了羅丹明B本身的提取率，綜合考慮其并不需要正己烷去完成凈化處置。對于食用油樣品需要使用濃度為70%的乙腈水溶液提取就能夠完成分析檢測，運(yùn)用丙酮提取還需要過柱凈化，整體分析需要使用濃度為70%的乙腈水將其作為提取溶液[5]。

2.2 固相萃取柱凈化

按照羅丹明B結(jié)構(gòu)里包含的氨基和羧基以及苯環(huán)，需要分別選擇陽離子交換固相萃取柱及反相固相萃取柱針對凈化效果進(jìn)行考察。并且需要按照實(shí)驗(yàn)方式去針對樣品展開凈化，以O(shè)asis MCX柱凈化其得到的回收率可以達(dá)到95.2%±2.0%，將Oasis HLB柱進(jìn)行凈化的回收率能夠達(dá)到89.4%±3.2%，二者都可以對羅丹明B提出的分析檢測要求給以滿足。二者進(jìn)行對比，Oasis MCX柱當(dāng)前的回收率相對較高并且操作上也更加簡單，提取液并不要求將有機(jī)溶劑進(jìn)行去除就能夠進(jìn)行柱凈化，所以最終確認(rèn)Oasis MCX柱為凈化萃取柱。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線和檢出限

羅丹明B其濃度需要保持在1.0～100.0 ng/mL的范圍中保持呈線性的分布，其線性回歸的方程為Y=9 035.1X+855.8，相關(guān)系數(shù)需要保持在0.999 8。使用空白基質(zhì)完成羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品添加的方式，選擇3倍信噪比針對羅丹明B的檢出限進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果為0.5 μg/kg。

2.4 方法精密度和回收率

挑選辣椒油和黃豆醬以及花生樣品，在其中加入含量不同的羅丹明B標(biāo)準(zhǔn)品，并且按照此實(shí)驗(yàn)方法完成所需要的處理，平行測定6份不同樣品。由表1可知，最后得出樣品其平均添加物質(zhì)的回收率在90.3% ～ 96.8%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）全部低于5%。結(jié)果可以看出，此方法具備理想的準(zhǔn)確性以及可靠性。

表1 精密度和回收率

3 結(jié)論

本文簡述了羅丹明B的毒性，并且使用高效液相串聯(lián)質(zhì)譜的檢測方式，對比多種溶劑在提取獲得的效果，并且使用MCX固相萃取柱對其進(jìn)行凈化后，減少了樣品產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)，并且能夠有效地去除其中存在的雜質(zhì)，空白樣品加標(biāo)回收及重復(fù)實(shí)用性比較理想。由此可以看出此方法具備快速、精準(zhǔn)及靈敏度高的優(yōu)勢，因此適合針對食品中的羅丹明B進(jìn)行定性及定量的分析，也能夠?yàn)槠渌嗨乒I(yè)染料提供一種比較理想的檢測方式。