陰虛證動物模型診斷指標及分析

王 賽白 明苗明三

(河南中醫藥大學,鄭州 450046)

陰虛證即陰液不足,不能制陽的證。 陰液不足,則機體失去濡養,臨床表現為口咽干燥,形體消瘦；陰虛不能制陽,陽亢而虛熱內生,臨床則表現為潮熱盜汗,煩躁,兩顴潮紅；陰虛火旺,膀胱化源不足,則見小便短赤且黃,大腸失去濡潤,則見便干,陰虛火旺,則見舌紅少苔,脈細數[1]。 具體癥候涉及到腎陰虛、肺陰虛、脾陰虛、胃陰虛、肝陰虛、心陰虛,涉及陰虛證的西醫疾病有糖尿病、高血壓、冠心病、中風、乙型肝炎、圍絕經期綜合征、肺癌、骨質疏松等[2]。 現有的陰虛證造模方法既有涉及到西醫學的給大白鼠采取口服或注射西藥、手術和感染的方法,也有中醫從證的病因、病機和證候特點出發,采取如破氣溫燥中藥等中醫病因理論來造模[3],造模方法較多但評價指標卻不盡相同,本文通過總結所有公開報道的陰虛證動物模型的一般觀察狀態、檢測指標、藥物反證進行總結,為評價陰虛證動物模型提供參考,為建立更統一的評價體系提供思路。

1 腎陰虛

1.1 造模方法

梁汝圣等[4]通過用甲狀腺素片150 mg/kg 配制成10 mg/mL 懸混液灌胃成功制備腎陰虛大鼠,也可以用甲狀腺素加利血平[5]這兩種方法都是通過提高基礎代謝率,從而引發類似腎陰虛的癥狀屬于病理模型。 戴冰等[6]通過灌胃氫化可的松,段曉紅等[7]通過腹腔注射氫化可的松均可成功復制腎陰虛動物模型。

1.2 一般狀態觀察

體重下降,體溫上升,毛發枯槁、無光澤、易脫落,多飲,多食,多尿且黃,大便干結色黑,易怒躁動,拱背,不易抓取。

1.3 檢測指標

現代研究表明腎陰虛與下丘腦-垂體-靶腺軸(腎上腺、甲狀腺) 的功能亢進有關,患者表現為下丘腦CRH、ACTH、TSH 增加, 促進腎上腺皮質釋放糖皮質激素和甲狀腺合成甲狀腺激素,血中糖皮質激素和甲狀腺激素含量增加[14],又因為CRH 及糖皮質激素的大量釋放在下丘腦、垂體、性腺多水平對性腺軸產生抑制作用,從而導致生殖內分泌的紊亂,性激素等相關指標也發生改變[15]；環磷酸腺苷、環磷酸鳥苷的雙向調節作用作為陰陽學說的基礎,陰虛病人也會表現出環磷酸腺苷水平顯著升高的現象[16]。 動物實驗檢測指標見表1。

1.4 藥物反證

六味地黃是滋陰補腎之首方,用于治療腎陰虧損,用該藥可使血清中cAMP、ACTH、Cor.含量降低,cGMP、T 含量升高[17]。

2 肺陰虛

2.1 造模方法

肺陰虛造模主要以煙熏+灌服甲狀腺素或者灌服甲狀腺+利血平+SO2熏蒸[18]等復合方法,其原理是先利用甲狀腺素造成陰虛,再以煙熏的方式造成咳嗽,久咳不愈則傷及肺陰。

2.2 一般狀態觀察

體重減輕、皮毛(光澤差、毛發凌亂脫落)、行動(煩躁易怒)、呼吸(咳嗽、少痰、哮鳴音、鼻部干燥)、肛溫顯著升高、面溫顯著升高、抓力顯著降低[19]。

2.3 檢測指標

肺陰不足,虛熱內生,虛熱上炎而潮熱顴紅,會出現顴紅耳赤等癥狀,故動物面溫、肛溫升高。 肺熱為肺陰虛的基礎,而熱則為炎癥反應的表現[20],故炎癥因子TNF-α、IL-1 含量顯著升高。 陰虛證表現為交感神經-β 受體-c AMP 系統功能亢奮,患者血漿中cAMP 含量增多, 甲狀腺激素分泌增加,則甲狀腺激素T3、T4 表達水平升高。 cAMP 能激活細胞內的蛋白激酶,使細胞內多種蛋白磷酸化,增強脂肪分解,使TC、TG 水平升高[20-23](見表2)。

2.4 藥物反證

肺陰虛證是津液消耗,肺失濡養而出現的陰津不足,以致肺失清潤,宣肅失職,虛熱內生等臨床表現的統稱。 南沙參、玉竹、麥冬(同屬甘涼歸肺經)通過甘涼入肺從而改善物質代謝異常,其作用機制可能是通過下調肺陰虛模型動物體內過高的甲狀腺激素、環核苷酸的水平,從而調節肺陰證引起的體內紊亂,改善肺陰虛證的整體證侯表現[23]。

表1 腎陰虛檢測指標Table 1 Detection of kidney yin deficiency

3 脾陰虛

3.1 造模方法

脾陰虛常采用復合因素造模法,前14 d 通過饑飽不勻,例如：間隔進食或單日喂甘藍,雙日喂豬油(大鼠每只3 mL),加上單日游泳至耐力極限使其疲勞過度造成脾氣虛,后16 d 在脾氣虛基礎上使用耗傷陰液藥,例如：附子、吳茱萸等,制成脾陰虛模型[24]。

3.2 一般狀態觀察

食量減少、體重減輕、便溏、神態萎靡、毛色干枯、蜷縮聚堆。

3.3 檢測指標：

脾陰不足,脾主運化功能失司,體內的蛋白質等精微物質不能正常轉輸,大量的蛋白質積于內質網內[27],則相關轉運蛋白和蛋白激酶含量發生改變。 脾陰虛常與糖尿病、癡呆和消化系統疾病(胃炎、消化不良、厭食、便秘等),根據不同病癥,針對性檢測血糖、腦源性因子和MMC 含量(見表3)。

3.4 藥物反證

四君子湯為補益劑,具有補氣,益氣健脾之功效。 主治脾胃氣虛證,,脾虛動物模型病理學觀察到脾、空腸、回腸粘膜破損、脫落,等現象,經四君子顆粒治療后, 腸組織病理形態恢復正常,對脾虛證的蛋白質代謝系統有復健作用[28],可使“脾虛證”模型復健,對其有反證效果。

4 胃陰虛

4.1 造模方法

選擇燥熱耗陰中藥草烏連續灌胃復制胃陰虛癥,每天用燥熱耗陰中藥草烏水煎濃縮煎劑灌胃1次, 連續至7 d[36]。

4.2 一般狀態觀察

躁動不安、小便黃、饑不欲食、大便干燥。

4.3 檢測指標

胃陰虛在臨床上常表現為胃炎相關疾病,胃部有炎癥反應,產生潰瘍,故炎癥相關因子水平升高,出現出血癥狀,紅細胞數量減少體積增大,又因為炎癥細胞侵蝕胃黏膜則粘膜層變薄(見表4)。

表2 肺陰虛檢測指標Table 2 Detection index of lung yin deficiency

表3 脾陰虛檢測指標Table 3 Detection index of spleen yin deficiency

4.4 藥物反證

胃陰虛者,養陰生津降逆,宜清補,如麥冬、沙參、杏仁、白芍、石斛、茯神、粳米、麻仁、白扁豆等。 已有研究證明沙參麥冬湯可改善患者血氣指標(對照檢測指標中的紅細胞計數與紅細胞體積)[36]。

5 肝陰虛

5.1 造模方法

在四氯化碳誘導大鼠慢性肝損傷的基礎上,結合溫熱中藥灌胃制作大鼠肝陰虛證動物模型,也有研究結合長期激怒法制造肝腎陰虛動物模型[32],所造模型更接近臨床人為影響因素較少。

5.2 一般狀態觀察

形體消瘦、身熱、飲水增多、飲食減少、大便干硬、小便黃(反應精液損傷情況)、毛發干枯、煩躁易怒、行動遲緩、反應遲鈍、舌紅少津。

5.3 檢測指標：

肝陰虛患者腎素-血管緊張素系統功能增強,故醛固酮含量升高[37],李莉等[36]研究結果表明肝陰虛患者存在TXB2 水平顯著增高,6-Keto-PGF1α水平顯著降低,在動物實驗中仍有體現(見表5)。

5.4 藥物反證

采用滋補肝腎中藥,能減輕肝組織的炎癥程度(IL-6、IL-10、TNF-α 水平降低)和纖維化程度,對于陰虛證相關的表征有一定的改善作用[44]。

表4 胃陰虛檢測指標Table 4 Detection index of stomach yin deficiency

表5 肝陰虛檢測指標Table 5 Detection index of liver yin deficiency

6 討論

動物模型是動物實驗的基礎,隨著中醫藥研究的發展,中醫癥候動物模型的制備越來越受關注,如何判定造模成功與否也成為了大家思考的問題,通過查閱現有陰虛證動物實驗的文獻發現：陰虛證動物模型的一般狀態主要包括體征和狀態,這在模型評價中是很重要的一部分,動物的表現往往與中醫臨床所對應,例如：動物體重減輕相當于患者形體消瘦,爪和尾的顏色(紅色程度)相當于患者五心煩熱,飲水量與大小便情況反映出津液損傷等。 動物的表觀指征與人的中醫癥的表現相對應,為判斷造模是否成功提供重要依據。 但也存在各臟腑的表現區別不大,特異性不明顯的缺點,應根據不同病癥部位再深入挖掘研究[49]。

在檢測指標中,環核苷酸參與調節不同的生化代謝和生理功能,且在病理反應過程中也起介導作用,對細胞功能處于穩定狀態具有雙向控制調節作用[50],有研究證明陰虛時血漿cAMP 升高,cAMP/cGMP 比值無明顯變化,臨床上患者也出現這種現象[51],這一指標常用來作為判定是否陰虛的依據,但也有實驗證明脾陰虛、肝陰虛時血漿cAMP 含量下降,故單用這一指標證明脾陰虛、肝陰虛是否造模成功是存在爭議的,而腎陰虛和肺陰虛相關研究血漿cAMP 均為升高,除此之外,腎陰虛、肺陰虛模型血清T3、T4 也均為升高與兩種疾病都能引起甲狀腺功能亢奮相一致。 肺陰虛、脾陰虛、肝陰虛都檢測了炎癥因子的含量,結果均為升高,與臨床三種疾病都伴有炎癥反應相一致。 檢測指標應根據不同的臟腑或其相聯系部位檢測相關指標的變化從而反應病理變化,例如臨床上腎陰虛與下丘腦-垂體-靶腺軸的功能亢進有關,反應在動物實驗中也會出現甲狀腺、腎上腺指標的改變；肺陰虛常伴隨炎癥反應,肺陰虛動物模型中炎癥因子表達水平也會出現升高；中醫上脾主運化,臨床上脾陰虛患者體內的蛋白質等物質不能正常轉運,大量的蛋白質積于內質網內,實驗中脾陰虛動物也會伴隨相關轉運蛋白和蛋白激酶含量發生改變；胃陰虛患者在西醫臨床上常表現為胃炎、胃潰瘍等,在胃陰虛實驗中,動物胃部也會出現潰瘍和炎癥反應與臨床相對應；肝陰虛患者腎素-血管緊張素系統功能增強,醛固酮增多,肝陰虛動物模型也會出現這種癥狀。心陰虛的研究較少本文并沒有進行總結,日后有待加強相關研究。 本文針對每種虛證總結有效治療藥物,通過藥物反證,觀察表征是否得到改善,檢測指標是否回歸正常,也可以在一定程度上判斷造模成功與否,為評價動物模型提供新的思路。

由于造模后疾病會自然演化和環境因素的影響,可能出現兩種或者兩種以上證候交疊或前后出現的情況,導致癥候區分不明確,在指標檢測中,不同臟腑的虛癥沒有明確的某一指標作為依據來判斷造模成功,所以建立各個證型的動物宏觀表現和客觀的理化指標公認評價標準是迫切之需[52]。