河南裕丹參中活性成分含量的測定及分析

楊文杰，韋一言，汪 雨

（成都錦欣中醫醫院藥劑科，四川 成都 610066）

中藥丹參是唇形科植物丹參（Salvia miltiorrhiza Bge.）的干燥根和根莖[1]。丹參具有活血祛瘀、通經止痛、清心除煩、涼血消癰之功效，常被臨床上用于治療心腦血管疾病[2]。目前，國內外的學者已從丹參中發現了100 多種化學成分, 且其中尚有部分有待于進一步分離、鑒定的化學成分[3]。丹參中的主要活性成分可分為兩大類，一是脂溶性的丹參酮類化合物，二是水溶性的丹參酚酸類化合物（多為鄰苯二羥基類化合物）[4-5]。現代醫學研究表明，丹參酚酸B 具有擴張冠狀動脈、改善血液循環等作用。Xu 等[6]研究表明，丹參酮Ⅰ對轉基因小鼠體內肺腺腫瘤的形成具有明顯的抑制作用，而隱丹參酮能抑制腫瘤細胞的增殖、轉移及侵襲，進而可發揮抗腫瘤的作用[7-8]。河南裕丹參的品質優良，是“中國名牌產品”之一。研究發現，裕丹參中丹參酮類成分和丹參酚酸B 的含量遠高于藥典中規定的丹參中此類成分的含量[9]。本文主要是測定并分析裕丹參中活性成分的含量。

1 儀器和試劑

1.1 實驗儀器

UV-2550 紫外- 可見分光光度計（由島津企業管理有限公司制造），JBIT5374-1991 電子分析天平（由上海奧豪斯儀器有限公司制造），DJ-500J 亞太電子天平（由亞太計量儀器有限公司制造），0.22 μm 和0.45 μm 的微孔濾膜（由津騰實驗設備有限公司生產），RE-52A 型旋轉蒸發儀（由上海亞榮儀器廠制造），KQ-250DE 型數控超聲清洗器（由昆山市超聲儀器有限公司制造），JHBE-50 閃式提取器（由北京金剛科技發展有限公司制造），電熱恒溫水浴鍋（由北京永明醫療儀器有限公司制造），200 μl 和1000μl 的移液器〔由芬蘭百得實驗室儀器（中國）有限公司制造〕。

1.2 實驗試劑

甲醇（由天津風船化學試劑科技有限公司生產），乙醇（由新鄉三偉消毒制劑有限公司生產），丹參酮ⅡA。

2 方法與結果

2.1 裕丹參總浸膏的制備

稱取粉碎后的裕丹參300 g，加入10 倍量濃度為75%的乙醇浸泡1 h。采用閃式提取（簡稱閃提）法對藥材進行提取，第一次閃提3 min，靜置15 min 后進行第二次閃提（共3 min），之后用10 倍量濃度為75%的乙醇對藥材進行第三次閃提（共3 min）。將三次閃提得到的濾液合在一起。用旋轉蒸發儀在65℃下對濾液進行旋干濃縮，將濃縮物轉移至坩堝中，在水浴鍋上（溫度為55℃）蒸干，得到裕丹參總膏138.4 g，得膏率為46.1%。

2.2 裕丹參中總丹參酮含量的測定

2.2.1 對照品溶液的制備 稱取2 mg 的丹參酮ⅡA，用甲醇進行溶解，然后在25 ml 的容量瓶中定容至刻度線，將其搖勻后密閉、遮光保存，作為丹參酮ⅡA 對照品溶液。

2.2.2 測定波長的選擇 吸取2.5 ml 的丹參酮ⅡA 對照品溶液，采用紫外- 可見分光光度法在200 ～800 nm 的波段對丹參酮ⅡA 對照品溶液進行紫外光掃描。掃描的結果見圖1。通過對圖1 進行分析可知，270 nm 的波長為最大吸收波長，即為檢測波長。

圖1 丹參酮ⅡA 對照品溶液的紫外吸收光譜圖

2.2.3 樣品溶液的制備 稱取丹參總浸膏5 mg，以甲醇為溶劑在25 ml 的容量瓶中定容至刻度線，將其搖勻后密閉、遮光保存，作為樣品溶液。

2.2.4 線性關系考察 分別用25 倍、21 倍、17 倍、13 倍、9 倍和5 倍的甲醇對對照品溶液進行稀釋，將其濃度稀釋為1.63 μg/ml、1.94 μg/ml、2.40 μg/ml、3.14 μg/ml、4.53 μg/ml 和8.16 μg/ml。然后采用紫外- 可見分光光度法依次在270 nm 的波長下測定各對照品溶液的吸光度值。測定的結果顯示，濃度為1.63 μg/ml、1.94 μg/ml、2.40 μg/ml、3.14 μg/ml、4.53 μg/ml 和8.16 μg/ml 對照品溶液對應的吸光度值分別為0.272、0.31、0.388、0.502、0.669和1.18。以丹參酮ⅡA 的濃度（C）為自變量，以吸光度值（A）為因變量繪制標準曲線，得到以下線性回歸方程：A=0.1384C+0.05167，r=0.9993。

2.2.5 精密度實驗 取2.4 μg/ml 的丹參酮ⅡA 對照品溶液，采用紫外- 可見分光光度法在270 nm 的波長下測定其吸光度值，共重復檢測5 次。檢測的結果顯示，丹參酮ⅡA 對照品溶液的相對標準偏差（RSD）為0.5%。這一結果表明該檢測方法的精密度良好。

2.2.6 重復性實驗 按2.2.3 項下的方法將5 份裕丹參總浸膏制備成樣品溶液。對樣品溶液進行適當稀釋，然后采用紫外-可見分光光度法在270 nm 的波長下依次測定各樣品溶液的吸光度值。檢測的結果顯示，5 份樣品溶液的吸光度值分別為0.726、0.724、0.727、0.726 和0.728，樣品溶液的RSD為0.21%。這一結果表明該檢測方法的重復性良好。

2.2.7 穩定性實驗 取2.4 μg/ml 的樣品溶液，每隔15 min采用紫外- 可見分光光度法在270 nm 的波長下檢測一次樣品溶液的吸光度值，共檢測6 次。對樣品溶液進行6 次檢測的結果顯示，其吸光度值分別為0.387、0.385、0.388、0.389、0.382 和0.387，樣品溶液的RSD 為0.49%。這一結果表明樣品溶液在90 min 內的性質穩定。

2.2.8 不同年份裕丹參中總丹參酮含量的測定結果 分別稱取3 份不同年份（2018 年和2016 年）的裕丹參制備成裕丹參總浸膏，再按照2.2.3 項下的方法制備成樣品溶液。對樣品溶液進行適當稀釋，然后采用紫外- 可見分光光度法在270 nm 的波長下依次檢測各樣品溶液的吸光度值。檢測的結果顯示，2018 年3 份裕丹參中總丹參酮的平均含量為4.79%，2016 年3 份裕丹參中總丹參酮的平均含量為4.26%。詳見表1。

表1 不同年份裕丹參中總丹參酮含量的測定結果

2.3 裕丹參中丹參總酚酸含量的測定

2.3.1 對照品溶液的制備 稱取5 mg 的丹參酚酸B 標準品，在25 ml 的容量瓶中用60% 的甲醇定容至刻度線，將其搖勻后密閉、遮光保存，作為丹參酚酸B 對照品溶液。

2.3.2 測定波長的選擇 吸取2.5 ml 的丹參酚酸B 對照品溶液，對其進行適當稀釋，然后采用紫外- 可見分光光度法在200 ～800 nm 的波段對丹參酚酸B 對照品溶液進行紫外光掃描。掃描的結果見圖2。通過對圖2 進行分析可知，286 nm 波長為最大吸收波長，即為檢測波長。

圖2 丹參酚酸B 對照品溶液的紫外吸收光譜圖

2.3.3 樣品溶液的制備 稱取丹參總浸膏5 mg，以60%的甲醇為溶劑在25 ml 的容量瓶中定容至刻度線，將其搖勻后密閉、遮光保存，作為樣品溶液。

2.3.4 線性關系考察 精密量取0.1 ml、0.2 ml、0.4 ml、0.8 ml、1.6 ml 和3.2 ml 的丹參酚酸B 對照品溶液，將其分別置于10 ml 的容量瓶中，并以60% 的甲醇為溶劑分別定容至刻度線，然后采用紫外- 可見分光光度法依次在286 nm的波長下測定各丹參酚酸B 對照品溶液的吸光度值。檢測的結果顯示，0.1 ml、0.2 ml、0.4 ml、0.8 ml、1.6 ml 和3.2 ml 的丹參酚酸B 對照品溶液對應的吸光度值分別為0.036、0.065、0.123、0.237、0.477 和0.93。以丹參酚酸B 濃度（C）為自變量，以吸光度值（A）為因變量繪制標準曲線，得到以下線性回歸方程：A=0.01445C+0.00787，r=0.9998。

2.3.5 精密度實驗 取16 μg/ml 的丹參酚酸B 對照品溶液，采用紫外- 可見分光光度法在286 nm 的波長下檢測其吸光度值，共重復檢測5 次。檢測的結果顯示，丹參酚酸B 對照品溶液的RSD 為0.81%。這一結果表明該檢測方法的精密度良好。

2.3.6 重復性實驗 按2.2.3 項下的方法制備5 份樣品溶液，對樣品溶液進行適當稀釋，然后采用紫外- 可見分光光度法在286 nm 的波長下依次檢測各樣品溶液的吸光度值。測得的結果是，5 份樣品溶液的吸光度值分別為0.434、0.436、0.437、0.433、0.431 和0.550，樣品溶液的RSD 為0.55%。這一結果表明該檢測方法的重復性良好。

2.3.7 穩定性實驗 取32 μg/ml 的樣品溶液，每隔15 min采用紫外- 可見分光光度法在286 nm 的波長下檢測一次樣品溶液的吸光度值，共檢測6 次。對樣品溶液進行6 次檢測的結果顯示，其吸光度值分別為0.477、0.479、0.475、0.476、0.474 和0.471，樣品溶液的RSD 為0.42%。這一結果表明樣品溶液在90 min 內的性質穩定。

2.3.8 不同年份裕丹參中丹參總酚酸含量的測定結果 分別稱取3 份不同年份（2018 年和2016 年）的裕丹參制備成裕丹參總浸膏，再按照2.2.3 項下的方法制備成樣品溶液。對樣品溶液進行適當稀釋，然后采用紫外- 可見分光光度法在286 nm 的波長下依次檢測各樣品溶液的吸光度值。檢測的結果顯示，2018 年3 份裕丹參中丹參總酚酸的平均含量為37.9%，2016 年3 份裕丹參中丹參總酚酸的平均含量為34.7%。詳見表2。

表2 不同年份裕丹參中丹參總酚酸含量的測定結果

3 討論

2015 版《中國藥典》中規定丹參中丹參酮類的總量不得低于0.25%。本研究的結果顯示，2018 年3 份裕丹參中總丹參酮的平均含量為4.79%，2016 年3 份裕丹參中總丹參酮的平均含量為4.26%；2018 年3 份裕丹參中丹參總酚酸的平均含量為37.9%，2016 年3 份裕丹參中丹參總酚酸的平均含量為34.7%。由此可見，河南裕丹參中丹參酮類成分的含量遠高于《中國藥典》中規定的丹參中丹參酮類成分的含量。翟宏宇等[10-11]對產自河南、山東、四川、安徽、甘肅、江蘇、河北、山西等地的丹參中活性成分的含量進行檢測，結果顯示，河南所產丹參中活性成分的含量最高。

綜上所述，河南裕丹參中總丹參酮和丹參總酚酸的含量較高，其品質優良。河南裕丹參中總丹參酮和丹參總酚酸的含量會隨著貯存時間的延長而減少。