頭孢曲松鈉藥物抗體影響臨床抗感染治療效果的臨床研究

吳昌松，岑榮飛，李俊艷，羅普榮，羅慶艷，朱廷倫，周美春

(黔南民族醫學高等專科學校附屬醫院，貴州 都勻 558000)

頭孢曲松鈉(C18H16N8Na2O7S3·3.5H2O，分子量661.59)為孢菌素類第三代藥物，對G+、G-菌厭氧菌等具有廣光譜抗菌活性，是臨床抗菌一線藥物。長期用藥后臨床效果治療不佳，取患者分泌物在體外作細菌培養加細菌藥敏試驗呈敏感或中度敏感結果。但臨床用藥療效治療不佳的病例，常規考慮細菌菌株變異產生臨床耐藥[1]，沒有從免疫學角度考慮患者長期使用該類藥物后刺激機體是否產生該類藥物的免疫性藥物抗體。當該類藥物再次進入機體后被相應的免疫性藥物抗體結合，形成抗原-抗體免疫復合物IC，改變藥物的理化結構，影響藥物的生物學活性，導致臨床抗感染效果不佳。

1 材料與方法

1.1 研究對象 選擇2017年8月至2019年7月在本院住院期間使用頭孢曲松鈉靜脈滴注抗感染治療，48～72 h治療無效的患者100例為實驗組[2]，男58例，女42例；年齡35～70歲，平均(47.38±9.05)歲。同期在住院期間無頭孢曲松鈉用藥史，臨床使用頭孢曲松鈉靜脈滴注抗感染治療療效顯著的患者100例為對照組，男63例，女37例；年齡28～72歲，平均(45.72±12.26)歲。

1.2 儀器與試劑 儀器 ence湘儀L-500-A離心機，TD-2Y醫用離心機，源博生科LB-3000醫用離心機，FYQ型免疫微柱凝膠附育器，二氧化碳培養箱SANYO型號(MCO-20AIC)。

試劑 微柱凝膠抗人球蛋白卡(江陰力博醫藥生物技術股份有限公司，批號：201706020)，標準紅細胞(上海血液生物，201709015-201806017)，頭孢曲松鈉藥敏紙片(Oxoid Limited/奧克歐德有限公司：批號235550)；MH瓊脂平板(鄭州圖安生物：批號20170608B)。

1.3 方法 采集患者全血或抗凝血(EDTA-Na2)5 ml，分離血清或血漿，用患者住院期間的同批號藥物和正常人O型紅細胞，備致敏指示細胞。用間接抗人球蛋白方法，采用微柱凝膠免疫抗人球蛋白試劑卡，檢測患者血液中藥物抗體。致敏指示紅細胞制備。用正常3人份O型紅細胞，洗滌后配制成2～2.5%懸液，同批號頭孢曲松鈉，用生理鹽水配制成10～30 mg/ml，各取1 000 μl置37℃孵育1 h后，配制成0.5%紅細胞懸液。指示紅細胞II(抗人球蛋白包被的紅細胞)。

1.4 檢測方法 按微柱凝膠間接抗人球蛋白試驗SOP文件操作(微柱凝膠免疫抗人球蛋白試劑卡(IgG+C3d)：(1)頭孢曲松鈉免疫性抗體檢測。取被檢測血清、指示紅細胞I、指示紅細胞II各50 μl加入微柱凝膠抗人球蛋白試劑卡孔內，混勻37℃孵育1 h，置LB-3000醫用離心機離心5 min(900 r/min×2 min,1 500 r/min×3 min)30 min內觀察結果。指示紅細胞懸浮于凝膠表面或凝膠中呈陽性反應，指示細胞沉于反應孔底部為陰性反應結果。(2)免疫性藥物抗體效價測定。按倍比稀釋，按SOP文件步驟程序操作。通過血型血清學專用離心機重力離心，指示紅細胞懸浮在反應孔凝膠表面或凝膠中，判讀為陽性結果，指示細胞沉于反應孔底部則為陰性反應結果。免疫性藥物抗體效價測定結果判讀，最后一管凝集強度1+，判為最高抗體效價。(3)細菌藥敏試驗：①在MH瓊脂平板培養基上接種細菌菌株；②將頭孢曲松鈉藥敏紙片覆蓋于種菌株瓊脂平板表面，置37℃二氧化碳培養箱恒溫培養箱培養24 h。③藥物抗體(IgG)抑菌藥敏試驗。將實驗組和對照組浸泡處理的藥敏紙片覆蓋于接種菌株表面[3]，置37℃二氧化碳培養箱恒溫培養箱培養24 h，抑菌環大于15 mm以上為藥物抑菌敏感(S)，抑菌環在10～14 mm之間為藥物抑菌中度敏感(I)，抑菌環小于10 mm以下為細菌耐藥(R)。

1.5 統計學方法 采用SPSS22.0統計軟件包統計處理數據，計數資料行χ2檢驗，以P<0.05為顯著性水平。

2 結果

2.1 藥物抗體(IgG)檢測 實驗組和對照組患者血清中頭孢曲松鈉藥物抗體(IgG)檢測結果見表1。實驗組的陽性率高于對照組(χ2=56.638，P<0.01)。

表1 兩組藥物抗體(IgG)檢測結果比較

2.2 藥物抗體效價測定 實驗組和對照組頭孢曲松免疫性藥物抗體滴度檢測結果見表2。

表2 兩組免疫性藥物抗體效價檢測

2.3 細菌藥敏試驗 將實驗組和對照組分別用患者藥物抗體陽性血清(IgG)和患者藥物抗體(IgG)陰性血清浸泡處理的藥敏紙片進行孢曲松鈉藥敏試驗，結果見表3。實驗組的中度敏感率和耐藥率分別為38.0%和62.0%，對照組的敏感率為100.0%，兩組孢曲松鈉藥敏實驗結果差異具有顯著性(χ2=89.86，P<0.01)，實驗組具有一定耐藥性。

表3 兩組用血清浸泡處理孢曲松鈉藥敏紙片試驗結果

3 討論

頭孢曲松鈉為半合成的第三代頭孢菌素類藥物，分子量小，進入機體不能刺激機體免疫系統產生相應的免疫性藥物抗體(IgG)。但通過靜脈滴注進入患者體內，與血液中載體蛋白結合，形成藥物-載體蛋白復合物后，形成大分子物質，而具有免疫原性，刺激機體免疫系統中的漿細胞，則分泌相應的藥物抗體[4]。產生的免疫性藥物抗體與血液中的藥物-載脂蛋白復合物結合，形成藥物抗體(IgG)-藥物-載脂蛋白(抗原)復合物[5]。使藥物的物理結構、化學性質、生物學活性、半衰期等發生變化，影響頭孢曲松鈉的臨床治療效果。

頭孢曲松鈉對革蘭陽性菌、陰性菌、厭氧菌顯示廣譜抗菌活性，常用于呼吸道、尿路、皮膚軟組織感染等治療。臨床使用頭孢曲松鈉藥物抗感染治療過程中，部分患者感染癥狀得不到有效控制或48～72 治療無效。當臨床使用同一藥物治療患者感染得不到有效控制，而細菌藥敏試驗結果呈中度以上敏感，與臨床治療效果不一致時，常規考慮為細菌菌株的變異而產生耐藥[6]。臨床常規采集患者相應的標本作細菌培養加藥敏試驗查明原因，為臨床正確選擇藥物治療提供科學的理論依據。

表1結果顯示，實驗組患者有長期使藥史，其藥物抗體陽性率為(72.00%)明顯高于對照組(19.00%)，說明藥物抗體產生與用藥史具有一定關聯性。表2藥物抗體效價檢測結果顯示，實驗組藥物抗體效價最高凝集強度1+，效價滴度為64，對照組最高凝集強度1+，效價滴度為2。從測定結果分析，實驗組患者有使用頭孢曲松鈉用藥史，機體的免疫系統曾經受頭孢曲松鈉免疫刺激，患者曾經產生免疫性抗體藥物抗體。患者停止使用該藥物后，抗體效價會降低。當患者再次使用該藥物治療，藥物與載體蛋白結合獲得免疫原性，刺激機體的漿細胞產生抗-頭孢曲松鈉(IgG),1周內抗體迅速上升，2周后上升到最高峰。從實驗組檢測結果分析，符合“記憶免疫應答抗體產生的規律”。

在MH瓊脂平板培養基上模擬體內條件的藥敏試驗(表3)結果顯示，實驗組用藥物抗體陽性血清浸泡處理的藥敏紙片不能有效抑制細菌生長，耐藥率高達62.00%，對照組能夠有效抑制細菌生長，從而證實實驗組藥敏試驗結果受血清中藥物抗體的影響，呈現抑菌耐藥現象[7]。

綜上所述，影響頭孢曲松鈉等小分子藥物抗感染治療的原因與其用藥史、藥物抗體、藥物抗體效價等因素有關。患者長期使用某種小分子藥物，可能會導致機體產生免疫性藥物抗體，影響其臨床抗感染療效。當臨床藥敏實驗結果不支持臨床治療診斷時，應結合患者是否有該類藥物的用藥史等綜合分析，檢測藥物抗體水平，為臨床合理用藥提供實證依據。