肉牛飼用復合益生菌組合的篩選及添加試驗

左秀峰，左秀麗，楊東英，左可吉

（1.山東省莒南縣畜牧發展促進中心，山東莒南 276600；2.德州學院，山東德州 253023；3.山東省莒南縣文疃鎮左家溝村，山東莒南 276600）

本課題組篩選乳酸糞腸球菌、酵母菌和芽孢桿菌配制了四種肉牛飼用復合益生菌組合，另設不添加復合益生菌基礎日糧組作對照，優選出最佳肉牛飼用復合益生菌組合，再進行犢牛育肥添加試驗，確定飼用復合益生菌在精補料中的最佳添加比例。

1 肉牛飼用復合益生菌組成

根據農業農村部規定，選擇可用于生產微生態制劑的微生物，即乳酸桿菌、乳酸鏈球菌、糞腸球菌、芽孢桿菌、雙歧桿菌和酵母菌等六種微生物，在前期研究的基礎上，與德州學院、江西農業大學和國家肉牛體系臨沂實驗站聯合篩選出酵母菌、乳酸糞腸球菌、芽孢桿菌三種益生菌，經不同比例組合按一定工藝研制了四種飼用復合益生菌組合（表1），代號分別為I、II、III、IV。

2 體外培養試驗

2.1 試驗設計 采用體外培養方法，研究不同飼用復合益生菌組合對利雜黃牛瘤胃體外發酵的影響。體外培養試驗設5個組，不添加益生菌的基礎日糧為對照組，4個試驗組分別添加I、II、III、IV號飼用復合益生菌，添加量均為200 mg/kg。

表1 飼用復合益生菌組合

2.2 試驗動物及日糧組成 選擇2頭體重為（275±15）kg的安裝有永久性瘤胃瘺管的健康利雜黃牛，用于瘤胃液采集。試驗期間每天飼喂2次（8點和18點），自由飲水。基礎日糧為玉米-豆粕-青貯玉米秸日糧，按肉牛1.3倍維持需要配制，精粗比為60∶40，基礎日糧組成和營養水平見表2。

2.3 體外培養試驗

2.3.1 產氣量測定 每隔半小時記錄注射器的氣體量（mL），記錄完后排氣，累計培養24 h，計算總產氣量。

表2 基礎日糧組成及營養水平

2.3.2 瘤胃液pH值測定 培養24 h后立即用PHS-320酸度計直接測定。

2.3.3 瘤胃液NH3-N濃度測定 參照馮宗慈等［1］的比色法進行。

2.3.4 瘤胃液菌體蛋白（MCP）的測定 取經預處理去除原蟲和飼料大顆粒的上清液10 mL，高速離心20 min，棄去上清液，沉淀的細菌部分加入9 mL 10%三氯乙酸溶液，混勻，再以4 000 r/min離心10 min，取沉淀物加入5%氫氧化鈉溶解，然后稀釋至25 mL。此稀釋液又經4 000 r/min離心10 min，取上清液在紫外分光光度計上用280 nm和260 nm波進行比色，應用如下公式求出細菌蛋白質含量：

細菌蛋白含量（mg/mL）＝（1.45×D280-0.74×D260）×稀釋倍數

2.3.5 瘤胃液揮發性脂肪酸（VFA）濃度測定 參照戈婷婷等［2］的氣相色譜法進行。

2.4 數據分析 采用Excel 2003和 SPSS 16.0軟件對所得數據進行方差分析和顯著性檢驗。

2.5 體外試驗結果

2.5.1 不同飼用復合益生菌組合體外培養24 h的產氣量、pH值、MCP含量、NH3-N濃度和干物質降解率 由表3可見，添加I、II、III、IV號飼用復合益生菌組合的試驗組和對照組，其培養液的pH值均在正常范圍內。添加I、II、III號飼用復合益生菌組合的24 h總產氣量比對照組有顯著提高（P＜0.05），各處理組間差異不顯著（P＜0.05），但II號飼用復合益生菌組合的產氣量最高，為170.50 mL。I、II號飼用復合益生菌組合產生的微生物蛋白含量極顯著高于其他組（P＜0.01），其中II號飼用復合益生菌組合的微生物蛋白含量最高，達270.43 mg/100 mL，顯著高于I、III號（P＜0.05）。I、II、III號飼用復合益生菌組合產生的氨態氮濃度極顯著低于對照組和IV號組合（P＜0.01），IV號組合顯著低于對照組（P＜0.05）。II、III號飼用復合益生菌組合的干物質降解率極顯著高于對照組（P＜0.01）。

2.5.2 瘤胃液揮發性脂肪酸濃度 對照組和I、II、III、IV號組合的總VFA濃度分別為139.69±0.17、144.51±0.98、145.96±0.63、145.89±0.10、140.67±0.12 mmol/L，II號組顯著高于對照組。

綜上得出：添加飼用復合益生菌能夠穩定瘤胃內環境，促進瘤胃發酵功能改善。從生化指標分析，以II號飼用復合益生菌組合（50%酵母菌+25%乳酸糞腸球菌+25%芽孢桿菌）的效果最佳，其最佳添加量和體內應用效果報告如下。

3 II號肉牛飼用復合益生菌添加試驗

3.1 試驗設計 在山東省沂水縣某牛場選擇出生日期接近、體重相近的健康犢牛（3月齡以上）24頭，采用單因子隨機設計，均分為4組，每組6頭牛，試驗期30 d，飼養環境一致。

表3 不同飼用復合益生菌組合對體外培養液中產氣量、pH值、MCP含量、NH3-N濃度和干物質降解率的影響

3.2 日糧及飼養管理 所有犢牛在試驗期內每日人工哺喂牛奶1 kg，飼喂相同的基礎日糧，優質苜蓿干草3 kg，精料2 kg。3個試驗組分別按精料量的0.05%、0.1%、0.2%添加II號肉牛飼用復合益生菌，于35～45 ℃拌料發酵3 d后飼喂，對照組不添加，每日飼喂2次，自由飲水。精料主要營養成分見表4。

表4 精料主要營養成分

3.3 生產性能指標測定 犢牛在試驗開始和結束日早晨空腹稱重，測定體尺指標；每天飼喂犢牛時觀察其糞便狀況，記錄腹瀉情況。

腹瀉頻率＝（腹瀉頭數×腹瀉天數）/（試驗頭數×試驗期天數）×100

糞便指數＝糞便評分之和/總頭數［3］

試驗期內每日對每頭犢牛的糞便打分，當犢牛糞便評分＞2時記為一個腹瀉日；糞便評分為4時，按照牛場常規治療方案治療，每頭犢牛腹瀉一天記為腹瀉一次。評分準則如下：

1分：正常，條形或粒狀；2分：輕度，軟糞，能成形；3分：中度，稠狀，不成形，糞水無分離；4分：嚴重，液狀，不成形，糞水有分離。

3.4 結果及分析 由表5可知，試驗開始時各組犢牛的體尺和體重指標差異不顯著（P＞0.05），飼喂復合益生菌精料后，0.1%組和0.2%組的體高極顯著高于對照組（P＜0.01），顯著高于0.05%組（P＜0.05），0.05%組與對照組差異不顯著（P＞0.05）；0.1%組和0.2%組的胸圍顯著高于對照組（P＜0.05）；試驗結束時0.1%組和0.2%組的體重同樣顯著高于對照組（P＜0.05），其他各組之間差異不顯著（P＞0.05）；試驗期間，0.1%組的日增重最高，顯著高于對照組（P＜0.05），其次是0.2%組和0.05%組。分析可得，添加0.1%的II號肉牛飼用復合益生菌（50%酵母菌+25%乳酸糞腸球菌+25%芽孢桿菌）可顯著提高犢牛的瘤胃消化率和全消化道消化率，糞便細膩松軟、無臭味［4］，且對犢牛生長發育有顯著提高，在日增重上高于其他各組。

表5 各組犢牛生長性能測定結果

由表6和表7可知，飼喂不同比例II號肉牛飼用復合益生菌的試驗組和對照組均有腹瀉，但腹瀉程度有一定的差別，其中對照組的腹瀉頻率和糞便評分最高，0.1%組最低，整體來看，各組發生腹瀉的概率都不高。由此可見，添加不同比例肉牛飼用復合益生菌對犢牛腹瀉具有很好的抑制作用。

表6 各組犢牛腹瀉發生情況統計

表7 各組犢牛腹瀉評分

4 結論

4.1 本次創新模擬瘤胃菌群環境，優選出肉牛飼用復合益生菌的最佳組合為50%酵母菌+25%乳酸糞腸球菌+25%芽孢桿菌，該組合的飼料干物質降解率、MCP含量、產氣量和總VFA濃度顯著提高，NH3-N濃度明顯降低，瘤胃液pH值保持穩定。

4.2 按精料量的0.1%比例添加肉牛飼用復合益生菌飼喂犢牛，能增強瘤胃消化粗纖維、木質素、粗蛋白的能力，緩解酸中毒，很好地抑制犢牛腹瀉，糞便細膩松軟、臭味輕，且能顯著提高犢牛體尺、胸圍、體高、日增重等生長性能指標。

4.3 添加肉牛飼用復合益生菌，提高了非常規粗飼料的利用率，干物質排放量減少3.5%，經濟效益提高10%以上。■