液相色譜法測定復方酮康唑乳膏中丙酸氯倍他索和酮康唑的含量方法對比

林偉謙

摘要：目的：應用反相高效液相色譜法分離和測定復方酮康唑乳膏中丙酸氯倍他索和酮康唑的含量。方法：該供試品經80℃水浴鍋傳熱溶解，放冷至室溫以無水乙醇定容至50mL量瓶，超聲30min，濾紙過濾。再經0.45μm濾過后采用Diamosilc18（2）為色譜柱，甲醇-0.01mol/L磷酸二氫鉀【用40%氫氧化鈉調PH值為7.2】（70：30）為流動相，流速為1.0ml/min，檢測波長239nm。結果：丙酸氯倍他索和酮康唑的線性范圍分別為0.01236～0.02884mg/mL和0.4799981～1.119995mg/mL，并與相應的峰面積呈線性關系，相關系數分別為r1=0.9999611和r2=0.99999583;測得丙酸氯倍他索和酮康唑的平均回收率分別為和%。結論：該法可快速、靈敏、準確測定丙酸氯倍他索和酮康唑含量，并應用于日常樣品復方酮康唑乳膏的分析檢測。

關鍵詞：反相高效液相法;丙酸氯被他索;酮康唑

引言：

復方酮康唑乳膏屬于外用制劑，主要用于皮膚淺表真菌感染。反相高效液相檢測的主要成分分別為丙酸氯倍他索和酮康唑。丙酸氯倍他索屬外用強效皮質激素，作用迅速，具有較強的毛細管收縮作用及抗炎作用。酮康唑屬吡格類抗真菌藥，對皮真菌、酵母菌、雙相真菌和真菌綱有抑菌和殺菌作用。目前，液相色譜儀法對乳膏制劑的測定已被廣泛的應用。但在實驗中發現其丙酸氯倍他索和酮康總測定的方法過于繁瑣、時間長和效率較慢。因此，為了能快速、準確地測定復方酮康唑乳膏中的丙酸氯倍他索和酮康唑含量，本文建立其分析方法，并應用于日常樣品復方酮康唑乳膏的液相分析。

1 儀器與試劑

高效液相色譜儀（島津企業管理（中國）有限公司，配備LC-16型二元溶劑輸送泵、SPD-16型紫外-可見檢測器、CTO-16型柱溫箱、SIL-16自動進樣器和labsolution5.83）、電子恒溫水浴鍋（型號HHS21-8）、十萬分之一電子天平（島津AUW220D） 、PH計（雷磁PHS-3C）和超聲儀（潔康PS-60A）

丙酸氯倍他索對照品（系中國食品藥品檢定研究院公司提供，批號100302-201804），標準貯備液（8mg/ml）的制備：精密稱取酮康唑標準品800mg，加無水乙醇溶解并定容至100ml量瓶，搖勻，備用。

酮康唑對照品（系中國食品藥品檢定研究院公司提供，批號100294-201203）標準貯備液（200μg/ml）的制備：精密稱取丙酸氯倍他索標準品20mg，加無水乙醇溶解并定容至100ml量瓶，搖勻，備用。

甲醇（色譜純），磷酸二氫鉀（分析純）、氫氧化鈉（分析純）、無水乙醇（色譜純）和蒸餾水

PH計標準緩沖溶液分別（廠家：天津科密歐化學試劑有限公司，批號20180

308）：鄰苯二甲酸氫鉀0.05M、混合磷酸鹽0.025M和硼砂0.01M

（PH值分別為4.00、6.86和9.18）

2 實驗方法

2.1色譜條件 [1]

色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑Diamosilc18（2）（迪馬200mm×4.6mm，5μm;批號9662493）;流動相為甲醇-0.01mol/L磷酸二氫鉀【用40%氫氧化鈉調PH值為7.2】（70：30）;流速為1.0ml/min，檢測波長239[1]，柱溫為30℃，進樣體積10μL。

2.2系統適用性

理論板數按酮康唑峰計算不低于2000，酮康唑與丙酸氯倍他索間的分離度應大于2.0。[2]

2.3方法

2.3.1樣品的制備

取本品4g，精密稱重，置于50mL燒杯。加入無水乙醇25ml，再將其置于80℃電子水浴鍋進行加熱溶解10min，時而搖勻，使溶解完全;將燒杯中樣品徐徐地轉移50ml量瓶中，再加入少量無水乙醇分三次轉移燒杯中殘留樣品，定容至刻度;最后置于超聲儀超聲30min，濾紙過濾，取續濾液放置至室溫;經0.45μm濾過后直接上機。

2.3.2專屬性

測定：按2.1色譜條件項下進行測定，整個過程應避光操作。丙酸氯倍他索和酮康唑。

2.3.3線性范圍和檢出限

丙酸氯倍他索標準系列濃度校準曲線：精密吸取丙酸氯倍他索標準貯備液3ml（60%）、4ml（80%）、5ml（100%）、6ml（120%）和7ml（140%）分別置于酮康唑相應濃度量瓶中，加甲醇-水（70：30）定容至刻度，搖勻。

酮康唑標準系列濃度校準曲線：精密吸取酮康唑標準貯備液3ml（60%）、4ml（80%）、5ml（100%）、6ml（120%）和7ml（140%）分別置于不同的50ml量瓶中，加甲醇-水（70：30）定容至刻度，搖勻。

按2.1色譜條件項下進行測定，分別以丙酸氯倍他索和酮康唑的標準系列濃度為橫坐標，以各對應峰面積為縱坐標繪制標準曲線，丙酸氯倍他索和酮康唑的線性范圍分別為0.01236～0.02884mg/ml和0.4799981～1.119995mg/mL，其線性方程分別為Y=2.21615×107* X和Y=1.84691×107*X，相關系數分別為r1=0.9999611和r2=0.99999583。以3倍信噪比計算丙酸氯倍他索和酮康唑的檢出限平均值分別為0.00017mg/mL和0.00025mg/mL 。

2.3.4精密度

在同一天內對同一份對照品溶液連續進樣6次，以測定值考察其精密度，結果測得丙酸氯倍他索和維生素D3的RSD分別為和，實驗結果表明該精密度符合要求，見表3。

2.3.5供試品分析

按2.3項下測定復方酮康唑乳膏中的丙酸氯倍他索和酮康唑含量方法操作，共測定5批次，并與標準方法進行了比較，實驗結果見表4。

3 討論

3.1流動相組成改變

由于在2020版《中國藥典》二部規定：復方酮康唑乳膏中涉及液相檢測的主要成分為丙酸氯倍他索與酮康唑，當它們作為藥物原料時，各自色譜條件中流動相分別采用緩沖鹽（0.05mol/L磷酸二氫鈉和0.34%硫酸氫四丁基銨溶液）與甲醇或乙腈組成比例，而在作為復方酮康唑乳膏藥物制劑，所采用流動相為甲醇-水（74：26），而參照衛生部頒藥品標準WS-10001-HD-0030）-2002復方酮康唑發用洗劑在色譜條件中[4]，方法規定流動相為甲醇-0.01mol/L磷酸二氫鉀【用40%氫氧化鈉調PH值為7.2】（70：30），因為它們主成分也是丙酸氯倍他索與酮康唑。

2020版《中國藥典》二部中復方酮康唑乳膏規定流動相為甲醇-水（74：26），使主成分峰易產生前沿或拖尾，峰形變差，加之復方酮康唑乳膏的輔料較難洗脫，導致輔料洗脫時間不夠，易積存干擾下一針采集，只能延長采集時間，經改為緩沖鹽會抑制前沿或拖尾，改善峰形，提高理論塔板數，重復性高。同時易把輔料成分洗脫出來，大大縮短采集時間。

3.2分離度確認

由于2020版《中國藥典》二部規定：復方酮康唑乳膏的系統適用性規定丙酸氯倍他索與酮康唑分離度應大于2，為了符合上述規定，將流動相比例以及組成調整為甲醇-0.01mol/L磷酸二氫鉀【用40%氫氧化鈉調PH值為7.2】（70：30）。

優化目的：解決色譜柱（尤其柱長150mm）不適宜作為2020版《中國藥典》二部復方酮康唑乳膏規定色譜條件使用用色譜柱，因分離度稍微>2且，若色譜柱子使用頻率增加，分離度就會趨向臨界值（分離度接近2.0）。若更換柱長250mm，雖能提高分離度，延長采集時間，降低工作效率，若流動相比例和組成更換后，提高分離度>3，縮短采集時間，提高工作效率

3.3流速的選擇

由于檢測復方酮康唑乳膏中主成分丙酸氯倍他索與酮康唑，仍采用2020版《中國藥典》四部規定默認流速1.0ml/min，若采用流速1.5ml/min及以上，采集時間縮短反而降低兩者之間分離度，對檢測來說毫無意義;若采用流速0.5ml/min，采集時間延長反而減低工作效率，縮短柱子使用壽命。

4 結論

本文對復方酮康乳膏中所含的丙酸氯倍他索和酮康唑進行樣品制備步驟處理，并采用液相色譜技術，使丙酸氯倍他索和酮康唑得到良好分離和取得較為滿意的測定結果。在測定的同時，與標準方法進行了比較，兩者測定結果基本一致，相對標準偏差均符合2020版《中國藥典》四部≤2%的規定要求[2]。該法操作簡便、快速 、重現性好、分離度好、大大縮短測定時間;供試品專屬性強，穩定性好，結果準確，可作為日常樣品復方酮康唑乳膏的快速分析。

參考文獻：

[1]中國藥典（2020版），二部[S]復方酮康唑乳膏含量測定

[2]中國藥典（2020版），四部[S]高效液相色譜法：通則0512

[3]ZL-SOP615-04，藥品復方酮康唑發用洗劑含量測定操作規程[S]

[4]衛生部頒藥品標準第一冊WS-10001-HD-0030）-2002[S]復方酮康唑發用洗劑