不同產地覆盆子微量元素含量的相關性研究

蔣永海，王偉倩，鄧俊杰，呂林峰(紹興市食品藥品檢驗研究院 國家黃酒產品質量監督檢驗中心，紹興 312071)

覆盆子(RubiFructus)為薔薇科懸鉤子屬植物掌葉覆盆子(RubuschingiiHu)的干燥未成熟果實，具有益腎、固精、縮尿的功效，用于治療腎虛遺尿、小便頻數、陽痿早泄、遺精滑精等[1]。現代研究表明，覆盆子的主要成分有鞣質、萜類、黃酮等，藥理作用主要有抗誘變、改善學習記憶能力、延緩衰老、增強免疫、調控性腺軸等[2]。鞣花酸為覆盆子中鞣質的主要成分，具有良好的抗炎、抗誘變和抗菌等作用[3-5]。異槲皮苷、山柰酚-3-O-β-D-蕓香糖苷、椴樹苷和山柰酚為覆盆子中黃酮類的主要成分[6]，藥理學研究表明，其均具有抗氧化、抗炎等作用[7-10]。

研究表明，中藥微量元素的含量和分布受品種、產地氣候等因素的影響[11]。同種藥材，遺傳特性相似，其所含的微量元素在含量上和品種上具有一定的規律，可以作為鑒別的依據。本研究采用電感耦合等離子體質譜法測定了10個產地覆盆子所含27種微量元素[鉀(K)、鈉(Na)、鈣(Ca)、鎂(Mg)、鐵(Fe)、鍶(Sr)、銀(Ag)、鋁(Al)、砷(As)、鋇(Ba)、鈹(Be)、鎘(Cd)、鈷(Co)、鉻(Cr)、銅(Cu)、錳(Mn)、鉬(Mo)、鎳(Ni)、鉛(Pb)、銻(Sb)、硒(Se)、釷(Th)、鉈(Tl)、鈾(U)、釩(V)、鋅(Zn)和汞(Hg)][12-15]的含量，并對檢測結果進行分析，為覆盆子的質量評價[16]及進一步研究提供科學依據。

1 儀器與試藥

1.1儀器 電感耦合等離子體質譜儀(ICP-MS) 7500a(美國安捷倫儀器有限公司)；微波消解儀(美國CEM 公司)；超純水儀(美國Millipore公司)；百萬分之一電子天平(梅特勒-托列多儀器上海有限公司)；5和10 μL移液槍(德國BRAND公司)。

1.2試藥 覆盆子樣品分別來源于浙江三門、浙江文成、福建柘榮、江西玉山、皖南涇縣、皖南歙縣、皖南績溪、浙江衢州航埠、浙江千島湖和浙江蘭溪，經蔣永海主任中藥師鑒定為薔薇科懸鉤子屬植物掌葉覆盆子(RubuschingiiHu)的干燥未成熟果實，標本存放于原藥材標本室。

硝酸(優級純，批號STBJ1332，美國Sigma-Aldrich公司)；超純水(電阻率18.2 MΩ·cm，美國Millipore公司)；體積分數30%過氧化氫(優級純，國藥集團化學試劑有限公司)；26種元素混合對照品儲備液(批號54-224CRY2，美國安捷倫儀器有限公司)：K、Na、Ca、Mg、Fe(質量濃度均為1 000 μg·mL-1)，Sr(質量濃度為100 μg·mL-1)，Ag、Al、As、Ba、Be、Cd、Co、Cr、Cu、Mn、Mo、Ni、Pb、Sb、Se、Th、Tl、U、V、Zn(質量濃度為10 μg·mL-1)；汞元素對照品溶液(質量濃度為1 000 μg·mL-1，編號GBW08617-6003，國家標準物質研究中心)；質譜調諧液[鋰(Li)、釔(Y)、鈰(Ce)、Tl、Co的質量濃度均為10 μg·L-1，國家標準物質研究中心]；內標溶液[鈧(Sc)、鍺(Ge)、銦(In)、鉍(Bi)的質量濃度均為0.01 μg·L-1，國家標準物質研究中心]，使用前用體積分數2%的硝酸溶液稀釋至質量濃度為1 μg·L-1的溶液。

2 方法與結果

2.1ICP-MS測定工作條件 檢測時的ICP-MS條件參數見表1。

表1 檢測時ICP-MS的條件參數Tab.1 Condition parameters of ICP-MS in detection

2.2微波消解儀的工作參數 消解時分三步，第一步最大功率為1 600 W，使用功率為100%，爬升時間為6 min，消解溫度為120 ℃，保持時間為3 min；第二步、第三步的最大功率和使用功率不變，爬升時間均為3 min，消解溫度分別為150、160 ℃，保持時間分別為3、15 min。

2.3對照品溶液的配制及標準曲線的繪制 用移液槍精密吸取對照品儲備液，加體積分數為2%的硝酸溶液稀釋，配制成如下質量濃度的對照品溶液。含Ag、Al、As、Ba、Be、Cd、Co、Cr、Cu、Mn、Mo、Ni、Pb、Sb、Se、Th、Tl、U、V、Zn的混合對照品溶液，質量濃度分別為2、5、20、50、200 ng·mL-1；質量濃度分別為20、50、200、500、2 000 ng·mL-1的Sr對照品溶液：含K、Na、Ca、Mg、Fe的混合對照品溶液，質量濃度分別為200、500、2 000、5 000、20 000 ng·mL-1；質量濃度分別為0.1、0.5、2、5、10、50 ng·mL-1的Hg對照品溶液。

2.4樣品前處理

2.4.1材料準備 將覆盆子去除雜質，蒸氣殺青，置于60 ℃烘箱中加熱8 h烘干，冷卻后，采用四分法分取樣品，粉碎，備用。

2.4.2樣品制備 分別精密稱取處理好的覆盆子樣品0.5 g各3份，置于聚四氟乙烯消解罐中，加硝酸4 mL，超純水4 mL，置于微波消解儀內，按2.2項下條件消解。冷卻降壓后，用超純水洗滌定容至25 mL，搖勻備用，同時做試劑空白，待測。

2.5線性關系 按2.4項下方法操作，繪制各元素的標準工作曲線，見表2。

表2 各元素的標準工作曲線、線性范圍及檢出限Tab.2 Linearity parameters and limits of detection

2.6精密度測定 取覆盆子0.5 g，按2.4.2項下方法操作，進行平行實驗6次，計算得RSD值為1.97%，表明精密度良好。

2.7加樣回收率實驗 精密稱取上述精密度測定實驗樣品0.5 g，按2.4.2項下步驟操作，精密加入相應的對照品溶液，進行平行實驗6次，測定得加樣回收率為95.1%～97.9%，RSD<2.87%。

2.8樣品測定 按照2.4.2項下方法制備樣品，進行平行實驗3次，按照所設定的儀器工作條件，分別對10個產自不同地區的覆盆子中所含微量元素的含量進行測定。結果見表3。

2.9測得結果處理 查閱文獻，以Zn、Fe、Cu、Mn、Co、Cr、Sn、V、Sr、Ni、Pb、As、Hg和Cd 14種元素在人體內含量和日攝入量[5]為參考，將其與各不同地區所產覆盆子(12 g)中的含量進行比較，結果見表4。

3 討論

隨著研究的不斷深入，微量元素[17]對人體健康的影響越來越受到重視。世界衛生組織曾提出：Fe、F、Zn、Cu、Mo、Co、Sr、Cr、Mn、Ni、I、Se、Sn、V 14種人體所必需的微量元素，參與人體中多個生理病理過程，是維持人體健康所必需的物質[18-19]。近年來越來越多的學者認為，中草藥中的微量元素與中草藥的功效存在著必然聯系[18-19]，微量元素在功效中發揮的作用不容低估。

近年來重金屬中毒事件的報道越來越多，這些重金屬，如Pb、Hg、As、Cd對人體健康的危害極大[11]。由表4可以看出，人日食覆盆子在12 g以內時，Pb、Hg、As和Cd 4種重金屬元素均未超出日攝入量最高值，故10個地區覆盆子中此4種重金屬元素均在安全值范圍內，均未超標，食用安全。

對于放射性元素，目前的研究中鮮見放射性元素對人體健康有益的報道，多數放射性元素對人體健康具有危害，如有研究表明，鉈(TI)為可疑致癌元素[11]。因此，對于這類微量元素，人體攝入量越少越好。

10個產地所產覆盆子中所含微量元素的種類豐富，尤其是人體必需微量元素就有10余種。除Cr、Mn含量較高外，其他人體必需微量元素的含量既高又在人體的安全攝取閾值內，并且其所含的常量元素，如K、Ca、Mg等的含量均較豐富，所以此10個產地所產覆盆子有較高的醫療保健價值[20]。此外，10個產地所產覆盆子中，所含的Pb、Hg、As、Cd 4種重金屬元素的含量均在安全值范圍內，均未超出國家標準，故此10個產地中，除浙江千島湖和衢州航埠外，其余產地所產的覆盆子均可以開發加工成相應的藥材或保健品。不建議使用上述2個產地的覆盆子，是因為這2個產地所產覆盆子中均含有少量的放射性元素，如TI等，這些元素對人體有一定的危害，雖然其含量較少，但這些元素半衰期較長，不易降解消除，所以長時間過量食用此覆盆子，會造成這些元素在人體內的蓄積，久之損害身體，不利于人體健康。比較而言，其中Mn是浙江千島湖、皖南歙縣、福建柘榮和皖南績溪產覆盆子富集較多的元素，也是差異性元素，提示覆盆子類中藥的補陽作用可能與其含有較高的Mn元素有一定關系；所含22種對人體有益的微量元素(K、Na、Ca、Mg、Fe、Zn、Cu、Mn、Co、Ni、Pb、As、Cr、Cd、Se、Mo、Sb、Sr、Hg、Ag、Al和V)中，9種(K、Na、Mg、Zn、Cu、Cd、Mn、Sr和Al)含量也高于其他產地，8種(Ca、Fe、Co、Ni、Cr、Se、Mo和V)次之，為傳統產區覆盆子的質量評價及道地性研究提供依據。除浙江千島湖、皖南歙縣、福建柘榮和皖南績溪外，有6個產地的覆盆子中Cr元素的含量明顯偏高，超出人體日安全攝取量，其產生機制有待進一步研究。