輸血前患者不規則抗體篩查及鑒定的臨床意義探討

詹廷西 王 靜 徐丹丹 李 鑫 孫 靜 余澤波

(重慶醫科大學附屬第一醫院輸血科，重慶 400016)

不規則抗體又稱意外抗體，是指血清中除常見的抗-A、抗-B以外的其他血型抗體，這類抗體多為IgG抗體，主要經輸血或妊娠等免疫刺激產生，是引起免疫性溶血性輸血反應、新生兒溶血病、血型鑒定正反不符、交叉配血不相容以及血液輸注無效的主要因素[1-2]。因此，輸血前進行不規則抗體的篩查與鑒定對輸血安全性和有效性尤為重要。隨著輸血醫學發展，我國對輸血安全愈加重視，由ABO、RhD引起的輸血不良反應已大大減少[3]。然而，其他血型抗原如RhC、c、E、e未能在采供血機構及輸血科納入常規檢測項目并進行同型輸注，患者反復多次輸血后產生免疫性不規則抗體，引起輸血不良反應時有報道，嚴重影響了輸血安全性[4-7]。據此，《醫療機構臨床用血管理辦法》(衛生部令第85號)《臨床輸血技術規范》《關于印發醫療質量安全核心制度要點的通知》等一系列政策法規相繼出臺，明確規定醫療機構在輸血前應進行不規則抗體篩查，以降低患者輸血不良反應的發生率。本研究通過85 645例輸血前患者不規則抗體篩查和鑒定結果分析，探討不規則抗體產生及分布情況，分析Rh五項、年齡、科室、性別、輸血史、妊娠史對不規則抗體檢出率的影響及其臨床意義。

1 資料與方法

1.1資料

1.1.1一般資料 選取本院2017年9月至2018年12月計劃輸血和手術備血患者共85 645例，于交叉配血前進行不規則抗體篩查。

1.1.2試劑與儀器 Diana Gel Coombs抗人球蛋白微柱凝膠卡購自西班牙GRIFOLS公司(批號17613.01)；低離子溶液購自英國Ortho-Clinical Diagnostics公司(批號481479)；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號篩選細胞(批號8000151495)、不規則抗體鑒定16株譜細胞(批號8000248526)、各種血型系統抗體血清(包括Rh、Kell、Duffy、Kidd、Lewis、P、MNS、Luther血型系統血清)均購自荷蘭Sanquin血站；WA Diana全自動血型鑒定儀、DG Therm孵育器和DG Spin離心機均購自西班牙GRIFOLS公司；血型血清學專用離心機購自珠海貝索生物技術有限公司。

1.2方法 抽取患者靜脈血4 ml置于EDTA真空抗凝管，3 000 r/min離心10 min。在抗人球蛋白微柱凝膠卡上標記3孔，每孔加入40 μl低離子溶液后依次加入10 μl不規則抗體篩選細胞Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ號，分別加入50 μl患者血漿，放入37℃孵育器中孵育15 min后，專用離心機990 r/min離心9 min，觀察并判定結果。對不規則抗體陽性樣本進行抗體鑒定，根據譜細胞反應格局，判定不規則抗體特異性，采用對應抗體血清檢測患者紅細胞，反向驗證不規則抗體特異性。

2 結果

2.1不規則抗體的產生及其分布 共有85 645例輸血前患者進行不規則抗體篩查，篩查出陽性患者313例，陽性率0.37%。進一步鑒定抗體特異性，其中特異性抗體201例，主要涉及Rh、Kell、Duffy、Kidd、Lewis、P、MNS等血型系統，Rh系統最多，為121例，占38.67%。自身抗體74例，占23.64%；無特異性抗體38例，占12.14%；混合抗體19例，占6.07%。見表1。

表1 313例不規則抗體特異性鑒定結果(%)

2.2Rh五項對不規則抗體檢出率的影響 85 645例不規則抗體篩查患者中共有47 151例進行了Rh五項分型檢測，各表現型中以CCDee最多，共23 039例，占48.86%，其次為CcDEe，共15 376例，占32.61%；CcDee共4 051例，占8.59%。上述3種表現型共占所有表現型的90.06%。針對RhC、c、D、E及e抗原進行分析，47 151例住院患者中，RhC抗原陰性患者共4 242例，占9.00%；Rhc抗原陰性患者共23 339例，占49.50%；RhD抗原陰性患者23例，占0.05%；RhE抗原陰性患者共27 216例，占57.72%；Rhe抗原陰性患者共2 860例，占6.07%，差異均具有統計學意義(P<0.05)。313例不規則抗體陽性樣本中，含有抗-C抗體為1例，抗-c為8例，抗-D為7例，抗-E為113例，無抗-e。見表2。

表2 住院患者Rh五項分型結果

2.3年齡對不規則抗體檢出率的影響 根據患者年齡不同，對85 645例不規則抗體篩查患者進行分組比較，各組間兩兩比較差異無統計學意義(P>0.05，表3)。

表3 年齡對不規則抗體產生的影響

2.4不同科室對不規則抗體檢出率的影響 將不規則抗體篩查的患者根據不同的科室進行分組，分為婦產科、內科、外科共3組。313例不規則抗體陽性患者中，外科人數最多，共156例，占49.84%；內科97例，占30.99%；婦產科陽性例數最少，僅為60例，占19.17%。然而，各科室不規則抗體陽性率由高到低排列依次為外科(0.53%)、婦產科(0.36%)和內科(0.25%)。3組不規則抗體陽性率經卡方檢驗，差異具有統計學意義(P<0.05)，各組間陽性率的兩兩比較差異具有統計學意義(P<0.05)。見表4。

表4 不同科室對不規則抗體產生的影響

2.5輸血史、妊娠史對不規則抗體檢出率的影響 313例不規則抗體陽性患者中，有輸血史92例，占29.39%；有妊娠史207例，占66.13%；有輸血史或妊娠史的242例，占77.32%；差異均具有統計學意義(P<0.05)。見表5。

表5 輸血史及妊娠史對不規則抗體產生的影響

2.6性別對不規則抗體檢出率的影響 共有 85 645例住院患者進行了不規則抗體篩查，其中男性36 086例，占42.13%；女性49 559例，占57.87%。313例初篩陽性患者中，男性患者98例，陽性率0.27%，占比31.31%；女性215例，陽性率0.43%，占比68.69%。不規則抗體陽性率經卡方檢驗，兩組間比較差異有統計學意義(P<0.05，表6)。

表6 性別對不規則抗體產生的影響

3 討論

依據國家相關政策法規，我院針對85 645例計劃輸血和手術備血患者進行了不規則抗體篩查，共檢出313例不規則抗體陽性患者，陽性率0.37%，接近于文獻報道的0.3%～2%[8-10]。其中特異性抗體201例，主要涉及Rh、Kell、Dufy、Kidd、Lewis、P、MNS等血型系統，Rh系統最多，為121例，占38.67%。混合抗體19例，占6.07%；自身抗體74例，占23.64%；非特異性抗體38例，占12.14%。產生自身抗體的原因多種多樣，可與惡性腫瘤、免疫性疾病、感染以及藥物有關。此類患者在血型鑒定時首先需排除自身抗體對準確測定ABO及Rh血型的影響，再進行多份同型血的交叉配血，選擇反應最弱即最小不相容的血液輸注。此次不規則抗體鑒定時，發現38例無特異性抗體。這可能與檢測樣本為血漿而非血清、樣本儲存時間較長致使抗體減弱、16株譜細胞未能包含所有抗原等情況有關。

特異性抗體中，含有抗-E抗體患者人數最多，共有113例，其次為抗Lea(27例)、抗-M(24例)、Jka(11例)等。抗-E的產生主要與E抗原的分布情況及我國尚未將E抗原的檢測納入常規檢測項目中，未實施Rh五項同型輸注有關。文獻報道我國漢族血型中E抗原陰性率為48.23%-70%[11-13]。同時RhE的抗原性僅次于RhD，從而導致抗-E在不規則抗體中占有最大比重。我院47 151例住院患者的Rh五項分型檢測結果發現，表現型中以CCDee最多，共23 039例，占48.86%；其次為CcDEe，共15 376例，占32.61%；CcDee共4 051例，占8.59%，與文獻報道相似[3,14-15]。臨床實踐時，在隨機交叉配血的情況下，RhE陰性患者會接受RhE陽性血液概率較大。進一步統計各抗原陰性率時，研究發現，RhE抗原陰性率最高為57.72%，這也進一步解釋了抗-E高比重的原因，同時也提示在各地血液中心及醫院開展Rh五項常規檢測及Rh五項同型輸注的必要性。另外，值得注意的是，在我國已嚴格開展RhD同型輸注的情況下，依舊有6例單純抗-D，1例混合抗-D。查閱這7名患者臨床信息，提示均為有妊娠史的RhD陰性婦女。此類情況提示我們，在臨床實踐中，有必要針對RhD陰性婦女進行RhD陰性相關知識的宣講，以便其日后懷孕生產計劃的制定。

針對可能影響不規則抗體檢出率的因素進行分析，發現不同年齡段對不規則抗體的檢出率不存在統計學差異。不同科室中不規則抗體的檢出率不同，本研究顯示按照陽性率從高到低依次為外科、婦產科及內科(P<0.05)。出現這種現象的原因可能是由于我院外科各類手術尤其三、四級手術及器官移植手術呈逐年增加趨勢，手術患者輸血幾率較大，同一患者同次住院輸血次數較多，多次輸血后產生免疫性不規則抗體。因此，每次輸血前均進行不規則抗體篩查對輸血安全性和有效性尤為重要。

分析其他影響不規則抗體檢出率的因素顯示：就性別而言，女性患者不規則抗體陽性率高于男性(P<0.05)。造成上述差異的原因主要是女性在其特有的妊娠或流產的情況下容易受到免疫因素影響產生不規則抗體[16-18]。在后續的輸血及妊娠史研究中，發現具有輸血/妊娠史的患者檢出不規則抗體的概率顯著高于對照組(P<0.05)。因此，對擬輸血的患者，特別是多次妊娠、輸血的患者，在輸血前進行不規則抗體篩查及鑒定非常重要，能有效減少輸血不良反應(輕者發熱寒戰，重者溶血性輸血反應)發生的概率，提高臨床輸血的安全性及有效性。

隨著輸血醫學的發展，針對ABO及RhD的同型輸注已落實到每個輸血醫生的臨床實踐中。但此次研究發現，Rh系統不規則抗體比重最大，以抗-E所比最高(113例患者體內含抗-E)，同時Rh五項表現型第一位CCDee及第三位CcDee之和高達57.45%(第二位為CcDEe，占32.61%，交叉配血時可不予考慮)。針對RhE陰性患者，建議采取同型輸注原則在獻血員中篩選RhE陰性血液，以減少輸血后抗-E的產生。隨著人們對Rh抗體產生的深入了解，RhC、c、E、e抗原的檢測及其同型輸注，將在各地血液中心及醫院中得到逐步普及，以減少Rh系統不規則抗體的產生，進一步保障患者輸血安全。