3種成軟骨誘導培養基對單層培養和微球培養的人脂肪干細胞成軟骨效果比較

于慶賀，曲戎梅，張國煒，李鑫，仇顯帥，歐陽鈞，戴景興，閔少雄

1.南方醫科大學珠江醫院脊柱外科，廣州 510280；2.南方醫科大學基礎醫學院解剖教研室暨廣東省醫學生物力學重點實驗，廣州510515

關節軟骨是組成活動關節面的一種有彈性的負重組織，主要功能是承受力學負荷和潤滑作用。軟骨損傷的修復是臨床難題，由于缺乏血供，軟骨的自身修復能力極為有限[1]。近年來國內外學者針對軟骨再生進行一系列研究，研發多種治療方式，如自體軟骨細胞移植，骨髓刺激，基質誘導自體軟骨細胞移植等，但在并發癥、治療效果等方面存在缺陷[2～5]。體外構建工程化軟骨屬于軟骨再生研究熱點，其誘導種子細胞如間充質干細胞（mesenchymal stem cells，MSCs）分化為軟骨細胞，植入受損關節使患者癥狀緩解[6～8]。胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）是細胞增殖，代謝和分化培養基中最重要的補充劑，但許多報道表明軟骨誘導培養基中使用其他種類血清如牛血清，或使用血清替代物如胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉溶液（ITS），抑或使用較低水平的FBS可以產生更高水平的軟骨細胞標志物[9～12]。轉化生長因子3（TGF-β3）是最常見的用于軟骨誘導分化的生長因子，多數實驗采用10 ng/ml的終濃度[13,14]，但有些實驗使用了更低濃度的TGF-β3[15]。本實驗主要比較添加常規濃度FBS（10%）和ITS（胰島素10μg/L、5.5μg/L轉鐵蛋白、0.67μg/L亞硒酸鈉），以及高濃度和低濃度TGF-β3（10 ng/ml vs 1 ng/ml）的軟骨誘導培養基體外誘導MSCs成軟骨分化的效果。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 人脂肪干細胞的分離和擴增 在超凈臺內用眼科剪將人脂肪組織剪……