固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)分析養(yǎng)殖水體及中華鱉中6種喹諾酮類(lèi)藥物殘留

許凱倫 蔣倩倩 鄭伊諾 徐匯鑌 陸榮茂 周朝生 胡園

摘要?[目的]通過(guò)固相萃取，建立超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時(shí)分析水體及水產(chǎn)品中6種喹諾酮類(lèi)藥物殘留檢測(cè)方法。[方法]水質(zhì)檢測(cè)方法取樣量少，生物檢測(cè)方法利用乙腈和水作為提取液，并添加DMSO，增進(jìn)目標(biāo)物在乙腈中的溶解度從而提高回收率;調(diào)查浙江省某地區(qū)20個(gè)中華鱉養(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖水體和中華鱉的6種喹諾酮藥物殘留水平。[結(jié)果]水質(zhì)檢出2種喹諾酮?dú)埩簦瑱z出濃度最大值分別為421.06 ng/L（恩諾沙星）、54.20 ng/L（環(huán)丙沙星）;中華鱉樣品中檢出4種喹諾酮?dú)埩簦畲髾z出濃度分別為3.98 μg/kg（氧氟沙星）、3.22 μg/kg（培氟沙星）、127.44 μg/kg（恩諾沙星）、65.00 μg/kg（環(huán)丙沙星），食品安全指數(shù)均值為0.000 7，食品安全狀態(tài)較好。[結(jié)論]該方法靈敏度較高、分析時(shí)間較短、回收率較高，可以定量檢測(cè)養(yǎng)殖水體和養(yǎng)殖生物體中喹諾酮類(lèi)藥物殘留。

關(guān)鍵詞?喹諾酮;養(yǎng)殖水體;中華鱉;藥物殘留;食品安全指數(shù);固相萃取-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

中圖分類(lèi)號(hào)?TS254.7?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼?A

文章編號(hào)?0517-6611（2021）01-0181-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2021.01.049

Abstract?[Objective]A method for simultaneous detection of 6 kinds of quinolone in environmental water samples and aquatic products samples by using high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry was developed.[Method]The volume of water sample which was needed was small，and aquatic products samples were extracted with the mixture of acetonitrile， water and DMSO. The residue of 6 kinds of quinolone antibiotics in water in aquafarm and Trionyx sinensis in an area of Zhejiang Province was measured.[Result]2 antibiotics were detected in water samples with maximum concentrations of 421.06 ng/L（enrofloxacin），54.20 ng/L（ciprofloxacin）.4 antibiotics were detected in Trionyx sinensis with maximum concentrations of 3.98 μg/kg（ofloxacin），3.22 μg/kg （pefloxacin），127.44 μg/kg（enrofloxacin），65.00 μg/kg（ciprofloxacin）. The average number of IFS of Trionyx sinensis was 0.000 7， which was acceptable. [Conclusion]This method has high sensitivity， short analysis time and high recovery rate， and can quantitatively detect quinolone drug residues in aquaculture water and aquaculture organisms.

Key words?Quinolone;Aquaculture water;Trionyx sinensis;Drug residues;IFS;Solid phase extraction-ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry

抗生素能有效預(yù)防和治療疾病，并有一定的促進(jìn)生長(zhǎng)的作用，被廣泛地用于醫(yī)藥、畜禽水產(chǎn)的養(yǎng)殖業(yè)中。我國(guó)作為人口大國(guó)和養(yǎng)殖業(yè)大國(guó)，抗生素使用量巨大。2013年中國(guó)科學(xué)院廣州地球化學(xué)研究所發(fā)布了全國(guó)抗生素污染地圖，調(diào)查估算一年有超過(guò)5萬(wàn)t抗生素排放進(jìn)水土環(huán)境中，其中46.1%由養(yǎng)殖業(yè)引起[1]，浙江屬于較為嚴(yán)重的抗生物污染地區(qū)。

喹諾酮是一類(lèi)人工合成的廣譜類(lèi)抗菌藥，通過(guò)抑制細(xì)菌的DNA解旋酶Ⅱ（topoisomerase Ⅱ）和拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ（topoisomerase Ⅳ）而影響細(xì)菌的DNA復(fù)制、轉(zhuǎn)錄、修復(fù)和細(xì)胞壁的染色體分裂過(guò)程，從而使細(xì)菌失活，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性菌等菌株有良好的抗菌效果，是現(xiàn)階段大量使用的一類(lèi)抗生素[2-3]。由于其具有服用吸收好、抗菌譜廣、半衰期較長(zhǎng)、價(jià)格相對(duì)低廉等突出優(yōu)勢(shì)，在包括中國(guó)以?xún)?nèi)的許多國(guó)家和地區(qū)，喹諾酮已經(jīng)成為在水產(chǎn)養(yǎng)殖方面最常用的藥物之一。雖然喹諾酮藥物在細(xì)菌耐藥性和多重耐藥性問(wèn)題上，從第1代到第4代上有了很大的改善，其使用安全性也隨著藥效動(dòng)力學(xué)和細(xì)胞毒性等方面的改良而顯著提高[4]，但是隨著水產(chǎn)行業(yè)集約化發(fā)展、高密度養(yǎng)殖，各種細(xì)菌性和真菌性等魚(yú)病頻發(fā)，漁民違規(guī)、超量、濫用喹諾酮藥物，因其施藥后，僅少部分被機(jī)體吸收，大部分喹諾酮被排泄到水體，或沉降到沉積物中，仍會(huì)引發(fā)細(xì)菌耐藥性不斷增強(qiáng)的問(wèn)題，也對(duì)環(huán)境造成污染，最終影響人體健康[5]。

目前，市場(chǎng)上流通的藥品以氟喹諾酮類(lèi)抗生素為主，如環(huán)丙沙星、恩諾沙星、氧氟沙星、培氟沙星、洛美沙星等，隨著對(duì)氟喹諾酮類(lèi)藥物在環(huán)境和生物體中殘留和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等研究不斷深入，不少藥物已經(jīng)逐步被我國(guó)和其他國(guó)家歸為獸用禁藥。我國(guó)農(nóng)業(yè)部發(fā)布的《食品動(dòng)物禁用的獸藥及其它化合物清單》（農(nóng)業(yè)部公告第193號(hào)）、《動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量》（農(nóng)業(yè)部公告第235號(hào)）、《農(nóng)業(yè)部決定在食品動(dòng)物中停止使用洛美沙星等4種獸藥》（農(nóng)業(yè)部公告第2292號(hào)）等文件中對(duì)諾氟沙星等藥物和物質(zhì)作出了規(guī)定。因此該研究建立了養(yǎng)殖水體和養(yǎng)殖水產(chǎn)品中6種最常見(jiàn)的喹諾酮藥物超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)分析方法，有助于進(jìn)一步分析浙江省養(yǎng)殖水體、養(yǎng)殖中華鱉以及其他水產(chǎn)品喹諾酮的含量和分布情況，并檢測(cè)分析了浙江省某地區(qū)中華鱉養(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖水體和中華鱉的喹諾酮?dú)埩簟?/p>

1?材料與方法

1.1?儀器與試劑?Waters Xevo TQ-S 三重四級(jí)桿質(zhì)譜儀、氮吹儀。

恩諾沙星（ENR）、環(huán)丙沙星（CIP）、諾氟沙星（NOR）、培氟沙星、氧氟沙星、洛美沙星，純度≥95%（Dr.Ehrenstorfer）;Oasis HLB 固相萃取小柱（ 500 mg/6 mL），購(gòu)于美國(guó)Waters 公司;甲醇、乙腈為色譜純，購(gòu)于上海安譜公司。

1.2?樣品采集?2019年9—12月采集浙江省某地區(qū)20個(gè)中華鱉養(yǎng)殖場(chǎng)水質(zhì)樣品20個(gè)，20個(gè)中華鱉樣品。樣品于24 h內(nèi)帶回實(shí)驗(yàn)室處理，水質(zhì)樣品經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾備用，中華鱉取其肌肉組織均質(zhì)備用。

1.3?樣品前處理

1.3.1?水樣提取。水樣經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾后，量取40.0 mL，加入10.0 mL Na2EDTA-Mcllvaine緩沖溶液混合均勻，以1～2滴/s的速度過(guò)HLB固相萃取柱（不需要活化），待試樣完全流出后，用3.0 mL去離子水淋洗，減壓抽干，用6.0 mL甲醇溶液洗脫。將洗脫液在40 ℃下，氮吹濃縮至近干，用1.00 mL 10%的甲醇水溶液溶解殘?jiān)?jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾，待上機(jī)測(cè)定分析。

1.3.2?生物樣提取。稱(chēng)取1.0 g（精確到0.01 g）中華鱉樣品至50 mL塑料離心管，加入2.0 mL H2O，再加入8.0 mL含2%DMSO的乙腈水溶液，振蕩提取5 min，在4 ℃下5 000 r/min離心5 min，取其上清液。

1.3.3?凈化。取3.0 mL提取液，于15 mL離心管中，加入3.0 mL乙腈溶液，混合均勻，4 ℃下5 000 r/min離心5 min。以1～2滴/s的速度過(guò)HLB固相萃取柱（不需要活化），棄去初始2.0 mL流出液體，收集剩余流出液于另一干凈15 mL離心管，氮吹濃縮至近干，用純水定容至1.0 mL，經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾，待上機(jī)測(cè)定分析。

1.4?儀器條件

1.4.1?色譜條件。

色譜柱為waters BEH?C18（50 mm×2.1 mm，1.7 μm）;柱溫40 ℃;進(jìn)樣量3.0 μL;流速0.25 mL/min;流動(dòng)相為甲醇（A）和0.1%甲酸水溶液（B）;洗脫程序?yàn)?～0.3 min，10%A;0.3～3.5 min，10%～70%A;3.5～3.7 min，70%A;3.7～4.0 min，70%～10%A;4.0～6.0 min，10%A。

1.4.2?質(zhì)譜條件。離子源：電噴霧離子源;柱溫：40 ℃;通過(guò)多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，離子模式：ES+，毛細(xì)管電壓為1.5 kV，離子源溫度150 ℃，去溶劑氣溫度600 ℃;去溶劑流速：1 000 L/h;錐孔流速：0.15 mL/min。6種喹諾酮類(lèi)質(zhì)譜參數(shù)如表1所示。

1.5?食品安全指數(shù)（IFS）

IFS遠(yuǎn)小于1時(shí)，表明該物質(zhì)對(duì)食品安全沒(méi)有影響;IFS≤1，表明該物質(zhì)對(duì)食品安全的風(fēng)險(xiǎn)是可以接受的;IFS>1，表明該物質(zhì)對(duì)食品安全影響的風(fēng)險(xiǎn)超過(guò)了可以接受的限度，需要進(jìn)入風(fēng)險(xiǎn)管理[6-7]。

IFS=R×FSI×bw

其中，IFS為食品安全指數(shù);R為藥物殘留濃度（μg/kg）;F為食品消費(fèi)量（kg/d）;SI為安全攝入量，用ADI代入計(jì)算;

bw為體重，取60 kg計(jì)算。

2?結(jié)果與分析

2.1?色譜條件優(yōu)化

盡管乙腈作為流動(dòng)相的有機(jī)相部分，系統(tǒng)壓力比甲醇低，但是大多數(shù)化合物在甲醇中獲得比在乙腈中更強(qiáng)的響應(yīng)，而且甲醇毒性比乙腈小，故流動(dòng)相有機(jī)相部分選擇甲醇。

對(duì)比流動(dòng)相水相部分添加甲酸、乙酸銨和不添加3種情況， 0.1%甲酸峰型效果好。

如圖1、2，流動(dòng)相分別為甲醇和0.1%甲酸水溶液、乙腈和0.1%甲酸水溶液、甲酸和去離子水、乙腈和去離子水。圖1中總離子圖中流動(dòng)相為甲醇和0.1%甲酸水溶液、乙腈和0.1%甲酸水溶液的峰型較好，但是在圖2中單個(gè)組分上，流動(dòng)相有機(jī)相為甲醇的峰型更好，基線更平穩(wěn)，而且乙腈為流動(dòng)相，有雜峰。所以選擇流動(dòng)相為甲醇和0.1%甲酸水溶液。

2.2?前處理?xiàng)l件優(yōu)化

為水質(zhì)樣品獲得較高的回收率，考察了甲醇、乙腈、丙酮3種洗脫劑對(duì)0.1、0.5和1.0 μg/L的加標(biāo)濃度水平下6種喹諾酮藥品回收率的影響。結(jié)果顯示，乙腈、丙酮洗脫6種藥物在3種不同加標(biāo)濃度下的回收率較低，而甲醇洗脫3種不同加標(biāo)濃度的樣品回收率在61%～120%，故選擇甲醇作為水質(zhì)樣品的洗脫劑。

生物樣提取中第一步中用含有DMSO的乙腈水溶液，是因?yàn)槎鄶?shù)獸藥為極性化合物或弱極性化合物，增加了樣品中水含量，而DMSO具有增加多種獸藥在乙腈中溶解度的作用，以提高回收率[8]。提取液合并后，其有機(jī)相比例為80%，盡管大部分蛋白質(zhì)和脂肪被分離，提取液中還是存在水溶性基質(zhì)和鹽分，取3.0 mL提取液，加入3.0 mL乙腈溶液混合均勻，將有機(jī)相比例提升至90%，剩余大部分的水溶性基質(zhì)和鹽分通過(guò)離心沉淀，因?yàn)榈鞍踪|(zhì)、鹽分等在高濃度的乙腈中溶解度顯著降低。

2.3?樣品加標(biāo)回收率

水質(zhì)樣品以外標(biāo)法進(jìn)行測(cè)定，取空白樣品40 mL，添加3個(gè)不同濃度水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成0.1、0.5和1.0 μg/L的濃度，生物體取空白樣品1 g，用內(nèi)標(biāo)法加入10和20 ng混合標(biāo)準(zhǔn)品，計(jì)算平均回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)（表2），水質(zhì)樣品中6種喹諾酮的加標(biāo)回收率為61.4%～120.6%，RSD為1.2%～16.9%;生物體中6種喹諾酮的加標(biāo)回收率為73.3%～113.7%，RSD為0.8%～7.6%。

2.4?工作曲線線性范圍和方法檢出限?按“2.1”優(yōu)化的色譜條件進(jìn)樣，6種喹諾酮藥物在0.5～10.0 μg/L具有良好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)（r）均大于0.99。以信噪比（S/N）≥10對(duì)應(yīng)濃度為依據(jù)估算儀器的檢出限，結(jié)果發(fā)現(xiàn)（表2），水質(zhì)樣品和生物體中6種喹諾酮的檢出限分別為0.6～9.1 ng/L、0.04～0.71 μg/kg。

2.5?實(shí)際樣品中喹諾酮的含量?該試驗(yàn)中于浙江省某地20個(gè)中華鱉養(yǎng)殖場(chǎng)采集的20個(gè)水質(zhì)樣品和20個(gè)中華鱉樣品，用所建立的分析方法進(jìn)行目標(biāo)喹諾酮的分析。結(jié)果顯示，部分水樣中檢出恩諾沙星、環(huán)丙沙星，其中2批次檢出恩諾沙星，檢出濃度為0.27～10.50 μg/L，1批次檢出環(huán)丙沙星，檢出濃度為1.36 μg/L;部分中華鱉樣品中檢出氧氟沙星、恩諾沙星、環(huán)丙沙星和培氟沙星，其中6批次檢出氧氟沙星，檢出濃度在0.79～3.98 μg/kg，1批次檢出培氟沙星，檢出濃度為3.22 μg/kg，7批次檢出恩諾沙星，檢出濃度為1.70～127.44 μg/kg，8批次檢出環(huán)丙沙星，檢出濃度為1.87～65.00 μg/kg。

3?討論

3.1?水質(zhì)樣品中喹諾酮藥物的殘留狀況

結(jié)果顯示，浙江省該地區(qū)20個(gè)中華鱉養(yǎng)殖場(chǎng)水體喹諾酮?dú)埩舨惶珖?yán)重。與其他研究相比，李佩佩等[9]檢測(cè)溫州和舟山的10個(gè)養(yǎng)殖廠水體，一批次檢出環(huán)丙沙星，檢出濃度為0.01 μg/L;趙東豪等[10]檢測(cè)廣東省水產(chǎn)養(yǎng)殖場(chǎng)養(yǎng)殖水10份，其中3份水樣檢出了恩諾沙星、環(huán)丙沙星，檢出濃度為117～376 ng/L，情況比較一致。養(yǎng)殖場(chǎng)水質(zhì)樣品中檢出率不高，可能是因?yàn)樵卩Z酮類(lèi)藥物在水體中轉(zhuǎn)移能力較強(qiáng)，會(huì)隨著時(shí)間推移，沉降富集到底層沉積物上，同時(shí)養(yǎng)殖場(chǎng)會(huì)定時(shí)換水，部分藥物殘留經(jīng)水體交換排放出去。

3.2?中華鱉樣品中喹諾酮藥物的殘留狀況

浙江省該地區(qū)20個(gè)中華鱉養(yǎng)殖場(chǎng)采集的中華鱉樣品檢出率較高，目前，市場(chǎng)上水產(chǎn)品喹諾酮類(lèi)藥物檢出情況也比較多。2020年浙江省市場(chǎng)監(jiān)督管理局公布的2020年第7期食品安全監(jiān)督抽檢信息通告中，4批次的大黃魚(yú)和黑魚(yú)中氧氟沙星不合格[11]。2019年12月，溫州市市場(chǎng)監(jiān)督管理局開(kāi)展的日常食品安全監(jiān)督抽檢有關(guān)情況通報(bào)中，檢出黑魚(yú)氧氟沙星23.9 μg/kg，花螺恩諾沙星和環(huán)丙沙星總和233.0 μg/kg[12]。

根據(jù)農(nóng)業(yè)部第235號(hào)公告，恩諾沙星的每日允許攝取量（acceptable daily intake，ADI）為2 μg/kg[13]，由于恩諾沙星在生物體內(nèi)會(huì)轉(zhuǎn)化成環(huán)丙沙星，按其總量計(jì)算。據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，2013年浙江省甲魚(yú)銷(xiāo)售量約為11.2萬(wàn)t[14]，浙江省人口約為5 500萬(wàn)人，估算得平均每人每天消費(fèi)5.58 g。該試驗(yàn)中，恩諾沙星和環(huán)丙沙星之和濃度為0～192.44 μg/kg，均值為15.55 μg/kg，則食品安全指數(shù)（IFS）均值為0.000 7，最大值為0.008 9，遠(yuǎn)低于1。其他4種喹諾酮沒(méi)有設(shè)定ADI值，不予計(jì)算。

4?結(jié)論

（1）該試驗(yàn)中，水質(zhì)檢測(cè)方法取樣量少，生物檢測(cè)方法利用乙腈和水作為提取液，并添加了DMSO，增進(jìn)了目標(biāo)物在乙腈中的溶解度從而提高回收率，而且兩者其凈化過(guò)程簡(jiǎn)單方便。該方法靈敏度較高、分析時(shí)間較短、回收率較高，可以定量檢測(cè)養(yǎng)殖水體和養(yǎng)殖生物體中喹諾酮類(lèi)藥物殘留，為進(jìn)一步監(jiān)測(cè)浙江省典型養(yǎng)殖環(huán)境中水體喹諾酮類(lèi)物質(zhì)分布以及分析生物體喹諾酮類(lèi)物質(zhì)殘留聚集和代謝提供技術(shù)支持。

（2）該試驗(yàn)中20份水樣和20份中華鱉樣品的6種喹諾酮藥物殘留結(jié)果表明，養(yǎng)殖水中，喹諾酮類(lèi)藥物不容易富集。中華鱉中檢出率較高，IFS遠(yuǎn)小于1，其食品安全狀態(tài)可以接受。但是采用的消費(fèi)量水平數(shù)據(jù)，是根據(jù)全省消費(fèi)量和人口數(shù)據(jù)計(jì)算，數(shù)據(jù)有一定的局限性和誤差性。特定地區(qū)單一食品膳食攝入量的缺失，是當(dāng)前制約食品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的主要瓶頸問(wèn)題。因此，開(kāi)展特定地區(qū)膳食攝入量調(diào)查，對(duì)該地區(qū)開(kāi)展食品安全評(píng)價(jià)有重要意義。

參考文獻(xiàn)

[1]應(yīng)光國(guó).中國(guó)抗生素使用與流域污染[C]//中國(guó)化學(xué)會(huì).中國(guó)化學(xué)會(huì)第30屆學(xué)術(shù)年會(huì)摘要集——第二十六分會(huì)：環(huán)境化學(xué).北京：中國(guó)化學(xué)會(huì)，2016.

[2]BOGIALLI S，D′ASCENZO G，DI CORCIA A，et al.A simple and rapid assay based on hot water extraction and liquid chromatography-tandem mass spectrometry for monitoring quinolone residues in bovine milk[J].Food chemistry，2008，108（1）：354-360.

[3]汪昆平，章琴琴，郭勁松，等.環(huán)境中氟喹諾酮類(lèi)抗生素殘留檢測(cè)和去除研究進(jìn)展[J].安全與環(huán)境學(xué)報(bào)，2012，12（2）：104-110.

[4]張石云，宋超，陳家長(zhǎng).喹諾酮類(lèi)抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2019，47（3）：32-36.

[5]何秀婷.廣東沿海典型養(yǎng)殖區(qū)喹諾酮類(lèi)藥物的監(jiān)測(cè)分析及其生物標(biāo)記物研究[D].廣州：暨南大學(xué)，2009.

[6]李聰，張藝兵，李朝偉，等.暴露評(píng)估在食品安全狀態(tài)評(píng)價(jià)中的應(yīng)用[J].檢驗(yàn)檢疫科學(xué)，2002，12（1）：11-12，7.

[7]WHO.Food consumption and exposure assessment of chemicals：Report of FAO/WHO consultation[R].Geneva：WHO，1997.

[8]楊艷，邱文倩，李宇翔.基于QuECHERS法-超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo)法測(cè)定動(dòng)物源性食品中11種喹諾酮類(lèi)藥物殘留[J].國(guó)際藥學(xué)研究雜志，2019，46（2）：158-162.

[9]李佩佩，張小軍，梅光明，等.超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)養(yǎng)殖水體中喹諾酮類(lèi)抗生素[J].浙江大學(xué)學(xué)報(bào)（理學(xué)版），2015，42（3）：334-338.

[10]趙東豪，王強(qiáng)，王旭峰，等.超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)養(yǎng)殖水體中49種獸藥的殘留量[J].中國(guó)漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn)，2017，7（3）：30-37.

[11]沐夕.浙江這7批次樣品檢出不合格?涉及食品農(nóng)獸藥殘留、污染物超標(biāo)問(wèn)題[EB/OL].（2020-02-20）[2020-02-21].https：//www.sohu.com/a/374502137_172731.

[12]溫州市市場(chǎng)監(jiān)督管理局：16批次食品抽檢不合格[EB/OL].（2019-12-05）[2020-02-21].http：//www.cqn.com.cn/ms/content/2019-12/05/content_7866309.htm.

[13]中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部.中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部第235號(hào)公告：動(dòng)物性食品中獸藥最高殘留限量[EB/OL].（2002-12-24）[2020-02-21].http：//jiuban.moa.gov.cn/zwllm/nybz/200803/t20080304_1028649.htm.

[14]趙春光.浙江省甲魚(yú)產(chǎn)業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀和前景[J].科學(xué)養(yǎng)魚(yú)，2015（1）：1-2.