實(shí)時(shí)PCR 檢驗(yàn)在高危型人乳頭瘤病毒中的診斷價(jià)值分析

唐昕

廣安市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 四川廣安 638000

人乳頭病毒（HPV）是一種常見、多發(fā)疾病，根據(jù)一項(xiàng)調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，在已經(jīng)確診的宮頸癌患者中，大部分患者均有HPV 感染情況，此外CIN（宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變）也有著HPV 感染現(xiàn)象，對(duì)生命造成了極大威脅[1]。HPV 種類并不是單一的，現(xiàn)已知的高危型HPV 種類已經(jīng)達(dá)到15 種，在我國(guó)常見的高危型毒種族以16、18、58 為主。現(xiàn)臨床檢驗(yàn)HPV 常用法為HC Ⅱ（第二代雜交式捕獲法），然而隨著醫(yī)療技術(shù)不斷提升，實(shí)時(shí)熒光PCR 檢驗(yàn)技術(shù)逐漸成熟、規(guī)范，因其有著快捷簡(jiǎn)便、價(jià)格低等獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，所以在臨床被廣泛應(yīng)用。本次研究中主要分析時(shí)PCR 檢驗(yàn)在高危型人乳頭瘤病毒中的診斷價(jià)值，以下為具體數(shù)據(jù)報(bào)告。

1 研究資料與方法

1.1 研究資料

選擇2019年5月～2020年5月我院收治109例高危型人乳頭瘤病毒患者作為本次研究對(duì)象。年齡最小者23歲，年齡最大者66歲，中位數(shù)年齡為（44.5±6.6）歲；21例為高度上皮內(nèi)鱗狀病變，46例為不典型鱗狀細(xì)胞特征，42例為低度上皮內(nèi)鱗狀病變；38例年齡≤30歲、16例年齡在31～45歲間、25例年46～60歲、30例年齡≥61歲。入選患者均為已婚女性，且同意參加此次研究。

1.2 方法

取樣：在進(jìn)行檢驗(yàn)之前，利用窺陰器暴露出宮頸，取棉拭子擦拭宮頸口分泌物，然后使用專用HPV 宮頸刷收集宮頸口處標(biāo)本，輕輕的轉(zhuǎn)動(dòng)4～5 圈以取得充足上皮細(xì)胞樣本，然后取出宮頸刷，將其折斷之后浸泡到保存液內(nèi)，做好標(biāo)記。

A 組：按照每分鐘13000 轉(zhuǎn)的速度對(duì)標(biāo)本進(jìn)行處理，時(shí)間約1min，然后將50uL 裂解液放入沉淀物中，通過(guò)水浴加熱10min，然后再進(jìn)行離心處理，取上層清野視為PCR 模板。嚴(yán)格按照試劑盒內(nèi)說(shuō)明書實(shí)施檢測(cè)。

B 組：取HPV-DNA 試劑盒、子宮頸微采樣器、HC Ⅱ雜交信號(hào)擴(kuò)大系統(tǒng)。采集檢驗(yàn)標(biāo)本之后經(jīng)RNA探針實(shí)施雜交，然后將生成的雜交體與特異性抗體結(jié)合在一起，同時(shí)發(fā)出信號(hào)，經(jīng)發(fā)光強(qiáng)度大小實(shí)施定量測(cè)定，并將含量計(jì)算出來(lái)。當(dāng)HPV 負(fù)荷量＞1.0pg/ml時(shí)為陽(yáng)性。

1.3 觀察指標(biāo)

比較實(shí)時(shí)PCR 檢驗(yàn)法、HC Ⅱ檢驗(yàn)法檢驗(yàn)不同程度宮頸病變HPV 結(jié)果與HPV 陽(yáng)性檢出率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)應(yīng)用

將數(shù)據(jù)建立的EXCEL 數(shù)據(jù)庫(kù)導(dǎo)入SPSS19.0 軟件，對(duì)各種變量中的計(jì)數(shù)資料以%表示，使用X2檢驗(yàn)，P＜0.05 認(rèn)定為差異存在顯著性。

2 結(jié)果

2.1 兩種檢驗(yàn)不同程度宮頸病變HPV 結(jié)果 見表1

表1 兩種檢驗(yàn)不同程度宮頸病變HPV 結(jié)果[n(%)]

2.2 兩種檢驗(yàn)方法的HPV 陽(yáng)性檢出率對(duì)比 見表2

表2 兩種檢驗(yàn)方法的HPV 陽(yáng)性檢出率對(duì)比[n(%)]

3 討論

高危型HPV 是引起宮頸病變主要因素，在全球中宮頸癌的發(fā)病率是極高的，每年因?qū)m頸癌死亡病例＞50萬(wàn)，對(duì)生命安全造成了極大威脅，影響著女性生存質(zhì)量。一旦機(jī)體感染HPV 后免疫系統(tǒng)會(huì)發(fā)生變化，隨之產(chǎn)生大量炎癥因子與細(xì)胞因襲，機(jī)體表現(xiàn)出炎癥反應(yīng)與組織損傷，導(dǎo)致人體自黏膜增生發(fā)展成為惡性腫瘤，因而早診斷、早治療意義重大[2]。隨著醫(yī)療技術(shù)的提升，就HPV 基因型來(lái)說(shuō)被發(fā)現(xiàn)的就已經(jīng)達(dá)到百種，其中大約40%的基因型與生殖系統(tǒng)感染有著密切關(guān)系、大約20%的基因型與腫瘤有著密切關(guān)系，按照與癌疾病發(fā)生關(guān)系將HPV 分為兩種，一種為低危型、一種為高危型[3]。病毒引起疾病的方式有所不同，43、11 型等低危型病毒會(huì)導(dǎo)致宮頸低度病變，68、58、39、18 等高危型病毒致病力極強(qiáng)，導(dǎo)致癌疾病幾率極高。通過(guò)多年的研究發(fā)現(xiàn)，我國(guó)常見的高危病毒有HPV58、16、18。

HPV 并不能做體外培養(yǎng)，也就不能通過(guò)血清血檢測(cè)進(jìn)行診斷，HPV 的檢測(cè)需依靠細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測(cè)等技術(shù)，傳統(tǒng)巴氏涂片為細(xì)胞學(xué)檢測(cè)法，但是因感染HPV 后形態(tài)學(xué)會(huì)發(fā)生變化，所以敏感性并不高，且極易漏診，組織學(xué)檢測(cè)與細(xì)胞學(xué)檢測(cè)相同，不僅檢驗(yàn)準(zhǔn)確率高，受檢患者所承受疼痛較大，分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)的靈敏性較高，也可以對(duì)HPV 進(jìn)行分型[4]。HPV 感染初期癥狀不是很顯著，潛伏期時(shí)間更比較長(zhǎng)，在早期檢驗(yàn)診斷中分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)發(fā)揮了重要意義。HC Ⅱ檢驗(yàn)法是檢驗(yàn)HPV常用方式，檢驗(yàn)效果較好。當(dāng)醫(yī)學(xué)技術(shù)不斷提升之后，多種檢驗(yàn)方法應(yīng)運(yùn)而生，且在多方面發(fā)揮著獨(dú)特優(yōu)勢(shì)。PCR 檢驗(yàn)技術(shù)有著敏感性高、特異性高的特點(diǎn)，在遺傳學(xué)檢測(cè)等多領(lǐng)域中均有著重要價(jià)值，特別是在普通PCR基礎(chǔ)上發(fā)展的實(shí)時(shí)PCR 技術(shù)，在PCR 反應(yīng)體系內(nèi)加熒光基團(tuán)之后再通過(guò)熒光信號(hào)積累對(duì)整個(gè)PCR 進(jìn)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)，熒光染料在滲入DNA 雙鏈后，會(huì)發(fā)出熒光引號(hào)，確保熒光信號(hào)與PCR 產(chǎn)物處于同步增加狀[5]。HC Ⅱ檢驗(yàn)法在檢驗(yàn)因方法學(xué)、檢驗(yàn)系統(tǒng)與實(shí)時(shí)PCR 檢驗(yàn)法有著很大不同，所以檢驗(yàn)結(jié)果會(huì)出現(xiàn)偏差，而實(shí)時(shí)PCR 檢驗(yàn)的檢驗(yàn)結(jié)果較好，有效實(shí)現(xiàn)了早發(fā)現(xiàn)、早治療。

在本次研究中，高危型HPV 患者年齡在23～66歲，其中38例年齡≤30歲、16例年齡在31～45歲間、25例年46～60歲、30例年齡≥61歲，由此可見高危型HPV呈U 形，30歲以下人群感染率比較高，分析其原因這個(gè)年齡段的性生活較為頻繁，自我保護(hù)意識(shí)也較為缺乏，所以宮頸抵抗力比較差，31～45歲間發(fā)病利率有所降低，分析其原因?yàn)檫@個(gè)年齡段有著固定的性伴侶，性生活有所減少，身體機(jī)能穩(wěn)定，但是在46歲后，感染率漸漸增加，且隨著年齡增加感染率也隨之增加，分析其原因?yàn)槔夏耆嗣庖吣芰Σ睢⒋萍に厮降停簿褪钦f(shuō)＜30歲、＞60歲人群是重點(diǎn)檢查對(duì)象；分別采用實(shí)時(shí)PCR 檢驗(yàn)法與HC Ⅱ檢驗(yàn)法分別對(duì)高危型HPV 患者實(shí)施檢驗(yàn)，通過(guò)比較檢驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：①在統(tǒng)計(jì)學(xué)方面兩種檢驗(yàn)方法的宮頸病變分級(jí)檢出率并無(wú)差異P ＞0.05，而在鱗狀上皮病變急慢性宮頸炎方面，實(shí)時(shí)PCR 檢驗(yàn)法檢出率較高，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義差異明顯P ＜0.05；②HC Ⅱ檢驗(yàn)法的HPV陽(yáng)性檢出率為62.4%，實(shí)時(shí)PCR 檢驗(yàn)法的HPV 陽(yáng)性檢出率為71.6%，在統(tǒng)計(jì)學(xué)方面有意義P ＜0.05。由此可見實(shí)時(shí)PCR檢驗(yàn)效果較好。總結(jié)實(shí)時(shí)PCR檢驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)如下：①PCR 產(chǎn)物不需要進(jìn)行特別處理，因此擴(kuò)增產(chǎn)物感染幾率比較小；②有效彌補(bǔ)了常規(guī)PCR 的不足（假陽(yáng)性率高、不能定量）；③操作簡(jiǎn)單、快速[6]。實(shí)時(shí)PCR 檢驗(yàn)是在全封閉環(huán)境中進(jìn)行檢驗(yàn)，避免了受污染現(xiàn)象，所以檢出率較好。

總而言之，實(shí)時(shí)PCR 檢驗(yàn)在高危型人乳頭病毒檢驗(yàn)中，檢出率較高，具有推廣價(jià)值。