磷脂酰肌醇3-激酶p110α/β在甲狀腺乳頭狀癌組織中的表達及與預后的相關性

楊曉華 吳淑華

甲狀腺乳頭狀癌占甲狀腺惡性腫瘤的80%～90%，受腫瘤轉移、分期等影響，預后較差[1]，且易發生淋巴結轉移[2]。根據甲狀腺乳頭狀癌的綜合癥狀，及早發現預后檢測指標對于改善預后意義重大。磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)作為信號傳導蛋白激酶，可通過不同途徑被多種細胞因子激活，活化后影響下游信號通路從而進行信號傳導，參與細胞增殖、分化、凋亡、轉移等多種生理過程[3]；作為經典腫瘤信號通路重要調控因子，在甲狀腺乳頭狀癌中激活PI3K可促進甲狀腺乳頭狀癌細胞增殖和侵襲，從而加重疾病進程[4]。其中PI3Kp110α、PI3Kp110β作為PI3K催化亞單元α、β的蛋白產物，在細胞中廣泛存在，正常表達時能夠調控DNA合成，促進細胞的正常發育。有研究表明，大腸癌中呈高表達，與大腸癌發生發展密切相關[5]。我們檢測甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織中PI3Kp110α、PI3Kp110β表達情況，探討其與預后的關系。

對象與方法

一、對象

2008年1月～2013年7月甲狀腺乳頭狀癌病人60例(甲狀腺乳頭狀癌組)，結節性甲狀腺腫60例(結節性甲狀腺腫組)，其他非癌病例中正常甲狀腺組織60例(正常組)。甲狀腺乳頭狀癌、結節性甲狀腺腫均經病理檢查確診。納入標準：(1)均符合診斷標準；(2)首次治療，且均未接受過化療；(3)臨床資料完整。排除標準：(1)甲狀腺乳頭狀癌合并結節性甲狀腺腫；(2)合并其他惡性腫瘤疾病；(3)合并內分泌相關疾病及嚴重的心腦血管疾病；(4)妊娠期。

二、方法

收集甲狀腺乳頭狀癌病人一般資料，包括年齡、性別、腫瘤大小、淋巴結轉移情況、TNM分期。

1.樣品收集及保存：甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織、結節性甲狀腺腫病人甲狀腺腫塊以及正常組的正常甲狀腺組織，經手術切除術后樣本至4%多聚甲醛中固定，固定后石蠟包埋并切片，室溫保存待用。

2.PI3Kp110α、PI3Kp110β蛋白表達檢測：免疫組化法檢測各組PI3Kp110α、PI3Kp110β的表達情況。脫蠟后檸檬酸高壓熱修復，分別滴加一抗PI3Kp110α、PI3Kp110β后4℃過夜，滴加二抗，DAB顯色，蘇木素復染、鹽酸酒精分化，中性樹膠封片。染色強度與陽性細胞的百分率相結合判定免疫組化染色結果。染色強度：不著色0分，淡黃色1分，棕黃色2分，黃褐色3分。陽性細胞所占百分比：陽性細胞數<5%計0分，5%≤陽性細胞數<30%計1分，30%≤陽性細胞數<60%計2分，≥60%計3分。兩者乘積為染色總分，陰性(-)：0分，弱陽性(+)：1～4分，中度陽性(++)：5～8分，強陽性(+++)：9～12分。

3.隨訪：甲狀腺乳頭狀癌病人自術后隨訪5年，截止隨訪時間2018年8月，最短隨訪時間為14個月，最長隨訪時間為60個月，中位隨訪時間為(52.63±5.81)個月。生存時間計算為手術至截止隨訪為止，或因復發、轉移等原因造成復發而預后變差時間。

三、統計學分析

應用SPSS25.0、GraphPad軟件分析數據計數資料以例(%)表示，采用χ2檢驗；采用Cox回歸分析影響甲狀腺乳頭狀癌病人預后的因素；Kaplan-Meier生存曲線分析甲狀腺乳頭狀癌病人PI3Kp110α、PI3Kp110β陽性組和陰性組生存情況，行Log-rank檢驗；Spearman法分析甲狀腺乳頭狀癌病人PI3Kp110α與PI3Kp110β的相關性。P<0.05為差異有統計學意義。

結果

1.3組PI3Kp110α、PI3Kp110β陽性表達比較見表1。分別與正常組、結節性甲狀腺腫組相比，甲狀腺乳頭狀癌組PI3Kp110α、PI3Kp110β陽性率升高，差異有統計學意義(P<0.05)。

表1 3組PI3Kp110α、PI3Kp110β表達比較(例，%)

2.甲狀腺乳頭狀癌病人PI3Kp110α、PI3Kp110β陽性表達與臨床病理特征的關系見表2。甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織PI3Kp110α、PI3Kp110β陽性表達均與年齡、性別無明顯相關性(P>0.05)，與腫瘤大小、淋巴結轉移情況、TNM分期相關性明顯相關(P<0.05)。

3.影響甲狀腺乳頭狀癌預后不良的因素：單因素分析顯示，PI3Kp110α、PI3Kp110β、淋巴結轉移、TNM分期均為影響甲狀腺乳頭狀癌預后不良的危險因素(P<0.05)。多因素分析顯示，PI3Kp110α、PI3Kp110β、淋巴結轉移、TNM分期均是影響甲狀腺乳頭狀癌預后不良的獨立危險因素(P<0.05)。見表3。

4.PI3Kp110α、PI3Kp110β與甲狀腺乳頭狀癌病人預后關系：60例病人術后隨訪，其中14例病人出現復發，無失訪病例。PI3Kp110α、PI3Kp110β陽性累計生存率明顯低于PI3Kp110α、PI3Kp110β陰性累計生存率(Log-rank=8.738、5.767，P=0.003、0.016均<0.05)。見圖1。

表2 甲狀腺乳頭狀癌病人PI3Kp110α、PI3Kp110β陽性表達與臨床病理特征關系(例，%)

表3 影響甲狀腺乳頭狀癌預后不良的因素

注：A.PI3Kp110α；B.PI3Kp110β

5.甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織中PI3Kp110α與PI3Kp110β的相關性分析：Spearman法分析顯示，甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織中PI3Kp110α與PI3Kp110β呈正相關(r=0.791，P=0.000<0.05)。見圖2。

討論

甲狀腺乳頭狀癌屬內分泌器官惡性腫瘤，是內分泌系統中造成死亡的重要原因，嚴重影響病人生存質量[6]。甲狀腺乳頭狀癌預后影響因素較多，早期癥狀不明顯，尚無公認的腫瘤免疫學指標評估預后[7]。因此，及早發現甲狀腺乳頭狀癌預后評估指標，根據預后情況及早干預，對于提高5年生存率具有重要意義。

圖2 甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織中PI3Kp110α與PI3Kp110β的相關性

PI3K在腫瘤發生發展中發揮重要作用，具體分型為Ⅰ型PI3K，Ⅰ型PI3K根據特異性的酶底物及激活機制的不同分為ⅠA型和ⅠB型，其中ⅠA型PI3K由一個調節亞基p85α和一個催化亞基p110組成[8]。PI3Kp85α本身有較強的致癌作用，在甲狀腺乳頭狀癌癌組織中水平高于增生組織，可作為甲狀腺乳頭狀癌和甲狀腺良性病變的診斷依據之一[9]。PI3Kp110由p110α、p110β、p110δ三種亞基構成，PI3Kp110α在垂體腺瘤中研究較多，作為一種致癌基因，可導致組織過度生長如纖維脂肪過度生長、節段性過度生長、皮膚異常、血管異常、腫瘤、脊柱側凸等，加重疾病進程[10]；在甲狀腺乳頭狀癌中表達上調，可能參與甲狀腺乳頭狀癌的病理過程[11]。PI3Kp110β作為PI3Kp110另一亞基，其在維持腫瘤抑制基因第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因缺失的腫瘤細胞增殖中發揮促癌作用，高表達病人預后較差[12]。本研究發現，與正常組、結節性甲狀腺腫組相比，甲狀腺乳頭狀癌組PI3Kp110α、PI3Kp110β陽性率升高，高表達PI3Kp110α可以激活信號通路并促進細胞的增殖、遷移和侵襲過程，抑制PI3Kp110α表達可降低惡性腫瘤惡性生物學行為，可能成為治療疾病的靶點[13]，提示絨毛狀腺瘤、鋸齒狀腺瘤、伴癌的腺瘤中均高表達，其高表達可能是腺瘤發展為腺癌的危險因素；PI3Kp110β與細胞凋亡因子B細胞淋巴癌基因-2關系密切，且促進腫瘤細胞增殖、抑制腫瘤細胞凋亡,促進細胞體外侵襲能力，加重疾病進程[14]。提示PI3Kp110α、PI3Kp110β可能影響細胞增殖、遷移、侵襲過程從而影響疾病。PI3Kp110α、PI3Kp110β陽性表達均與腫瘤大小、淋巴結轉移情況、TNM分期相關性較明顯，提示PI3Kp110α、PI3Kp110β的高表達在甲狀腺乳頭狀癌中可能影響癌細胞遷移從而增加TNM分期，加重疾病。且PI3Kp110α、PI3Kp110β陽性表達增加甲狀腺乳頭狀癌預后不良的風險，在臨床上檢測甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織中PI3Kp110α、PI3Kp110β水平可在一定程度上預測預后狀況。進一步研究發現，PI3Kp110α與PI3Kp110β呈正相關，提示甲狀腺乳頭狀癌癌組織中PI3Kp110α與PI3Kp110β可能共同處于激活狀態影響細胞遷移，加重疾病。

甲狀腺乳頭狀癌病人癌組織中PI3Kp110α、PI3Kp110β陽性表達升高，二者與淋巴結轉移、TNM分期關系密切，可作為甲狀腺乳頭狀癌病人預測預后的指示性因子。在臨床上抑制PI3Kp110α、PI3Kp110β表達情況可能作為治療靶點。由于本研究受例數限制，結果可能與實際存在一定偏差。